湯雪燕， 趙統(tǒng)利， 邵小斌， 朱朋波， 孫明偉， 王江英， 徐 艷

(連云港市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，江蘇連云港 222006)

TDZ在非洲菊組培快繁中的應(yīng)用

湯雪燕， 趙統(tǒng)利， 邵小斌， 朱朋波， 孫明偉， 王江英， 徐 艷

(連云港市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，江蘇連云港 222006)

摘要[目的]優(yōu)化非洲菊組培快繁技術(shù)體系。[方法]研究不同外植體、激素水平對(duì)非洲菊愈傷組織形成、芽分化及根誘導(dǎo)的影響。[結(jié)果]以花托作為外植體，愈傷組織誘導(dǎo)率高；MS培養(yǎng)基中加入6-BA 0.4 mg/L十TDZ 2.0 mg/L十NAA 0.3 mg/L時(shí)，形成愈傷組織多，愈傷組織結(jié)實(shí)，芽誘導(dǎo)效果最好；在1/2MS+NAA 0.5 mg/L培養(yǎng)基中，非洲菊根長勢(shì)最好，且小苗移栽活率最高。[結(jié)論]該研究為非洲菊的大規(guī)模生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞TDZ；非洲菊；組織培養(yǎng)；快繁

非洲菊(Gerbera jamesoniiBolus)別名扶郎花、燈盞花、太陽花，是菊科大丁草屬多年生宿根草本花卉。其植株風(fēng)韻秀美，花朵碩大，花色艷麗豐富，花期長，在適宜條件下能周年持續(xù)產(chǎn)花，產(chǎn)花率高，是切花和盆花兼用的優(yōu)良觀賞花卉，現(xiàn)已躋身世界五大切花之一,在我國有躍居四大切花之勢(shì)。

非洲菊為異花傳粉植物(2n=50)，自交不孕，且種子壽命短，發(fā)芽率低，而且種子后代變異大，難以保持原有品種的優(yōu)良性狀；而分株法雖然能保持母本的優(yōu)良性狀但繁殖系數(shù)低下，無法滿足產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的要求[1]。因此國內(nèi)外一般采用組織培養(yǎng)的方法生產(chǎn)非洲菊種苗，可對(duì)優(yōu)良品種進(jìn)行大規(guī)模的擴(kuò)繁。為了優(yōu)化非洲菊組培快繁技術(shù)體系，筆者研究不同外植體、激素水平對(duì)非洲菊愈傷組織形成、芽分化及根誘導(dǎo)的影響。

1材料與方法

1.1材料試驗(yàn)品種選用主栽品種小雪桔。從東辛試驗(yàn)地生長健壯的非洲菊植株上摘取直徑1cm左右且花蕊不裸露的幼嫩花托、帶芽短縮莖、幼嫩葉柄和葉片。

1．2方法

1.2.1外植體滅菌。先用自來水反復(fù)沖洗，去除表面臟物，再用含洗潔精的溶液浸泡30min，然后用自來水沖洗干凈，置于干凈燒杯中備用。在無菌超凈臺(tái)上用70%的乙醇將外植體消毒15s，再用無菌水沖洗3次，然后用1‰的升汞消毒10min，隨后再用無菌水反復(fù)沖洗3～4次，然后在超凈工作臺(tái)上用無菌濾紙吸干水分，將花托剝?nèi)セㄝ?，切去花絲花柄后平均切成2～4小塊接種到預(yù)先配好的無菌培養(yǎng)基中，其余外植體直接平均切成3～4小塊后接種到預(yù)先配好的無菌培養(yǎng)基中。

1.2.2培養(yǎng)條件。參照前人研究的基礎(chǔ)上[2]，在MS培養(yǎng)基中附加不同種類濃度激素，pH5.8，所有培養(yǎng)基配制分裝完成后，經(jīng)120 ℃高壓滅菌20min。接種后置于溫度(25±2) ℃，光照強(qiáng)度1 800～2 100lx，光照時(shí)間14h/d條件下培養(yǎng)。

1.2.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)。處理①：不同外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響，每個(gè)處理接種20個(gè)培養(yǎng)瓶，每瓶接種3塊外植體，處理50d。處理②：不同激素6-BA和TDZ組合對(duì)花托愈傷組織誘導(dǎo)的影響，每處理接種20個(gè)培養(yǎng)瓶，每瓶接種3塊外植體，處理60d。處理③：不同培養(yǎng)基對(duì)非洲菊苗根誘導(dǎo)的影響，每處理接種20個(gè)培養(yǎng)瓶，每瓶接種5株小苗，處理30d。

2結(jié)果與分析

2．1不同外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響將帶芽短縮莖、葉柄、葉片、花托分別接入培養(yǎng)基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，數(shù)日后，切口處均可見不同程度的膨大、突起和愈傷組織的形成。發(fā)生時(shí)間依次為帶芽短縮莖最早，15d即有愈傷組織產(chǎn)生，花托次之，葉柄、葉片最遲?；ㄍ薪臃N18d后便有大量的愈傷組織形成，而葉柄和葉片分別需要25、22d才能形成愈傷，且愈傷組織的量很少。帶芽的短縮莖污染很嚴(yán)重，污染率高達(dá)61.7%，是花托的7.4倍(表1)。

表1　不同外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

2.2不同激素對(duì)花托愈傷組織誘導(dǎo)的影響由表2可知，不同激素對(duì)花托愈傷組織誘導(dǎo)表現(xiàn)出明顯差異。TDZ作為一種新型植物生長調(diào)節(jié)劑，具有很強(qiáng)的細(xì)胞分裂素活性[3-5]。在MS+6-BA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+NAA0.3mg/L時(shí)，花托愈傷組織誘導(dǎo)率較高，花托切口處產(chǎn)生淡黃色、米粒狀的愈傷組織，2～3d后淡黃色愈傷組織會(huì)慢慢變綠。當(dāng)TDZ濃度為2.0mg/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最高。6-BA的濃度變化對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生影響不顯著。對(duì)照不加任何激素的MS培養(yǎng)基則不能誘導(dǎo)花托產(chǎn)生愈傷組織。

表2　不同濃度6-BA和TDZ組合對(duì)花托愈傷組織誘導(dǎo)的影響

注：NAA濃度為0.3mg/L。

表3　不同培養(yǎng)基處理對(duì)非洲菊苗根誘導(dǎo)及移栽成活率的影響

注：繼代培養(yǎng)20d做生根結(jié)果統(tǒng)計(jì)，30d進(jìn)行煉苗移栽。

2．3不同激素對(duì)愈傷組織成芽的影響由表2可知，TDZ濃度越高，非洲菊愈傷組織上長出的芽越弱，玻璃化也越嚴(yán)重；6-BA濃度越高，越不易長芽。誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織，經(jīng)過30d，部分變深綠的愈傷組織上可見綠色的點(diǎn)，這些點(diǎn)逐漸長大，再過30～40d，誘導(dǎo)出叢芽，高濃度6-BA的配方比低濃度6-BA的配方產(chǎn)生愈傷組織和叢芽時(shí)間短，但形成的愈傷組織不易產(chǎn)生叢芽，生長出的芽嫩，玻璃化嚴(yán)重，質(zhì)量不高?？傮w而言，當(dāng)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+NAA0.3mg/L時(shí)，花托愈傷組織誘導(dǎo)率較高，愈傷組織分化程度較強(qiáng)，愈傷組織緊實(shí)，易產(chǎn)生叢芽，芽健壯，質(zhì)量高[3]。

2．4不同培養(yǎng)基對(duì)非洲菊苗根誘導(dǎo)的影響NAA作為廣譜型植物生長調(diào)節(jié)劑，能促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根，1/2MS培養(yǎng)基中降低無機(jī)鹽濃度，而少量的營養(yǎng)也有利于植物為了吸收營養(yǎng)而生根來適應(yīng)環(huán)境[4-5]。由表3可知，1/2MS培養(yǎng)基中非洲菊苗根誘導(dǎo)率達(dá)100%，其中當(dāng)培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.5mg/L時(shí),移栽成活率最高。

3小結(jié)與討論

該結(jié)果表明，選取花托作為外植體可以很快地形成大量愈傷組織，且污染率較低，較理想。以帶芽短縮莖作為外植體，與花托在誘導(dǎo)愈傷組織上差別不大，但帶芽短縮莖污染率較高，可能是因?yàn)槠渖L在地面，攜帶較多的菌種。選擇MS+6-BA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+NAA0.3mg/L作為芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，低濃度的6-BA和TDZ有很好的協(xié)同促進(jìn)作用，形成愈傷組織多，愈傷組織結(jié)實(shí)，芽誘導(dǎo)效果最好； 外植體在愈傷組織誘導(dǎo)的過程中，對(duì)激素種類和濃度的反應(yīng)差別甚大，這可能與外植體本身所含的內(nèi)源激素種類、濃度水平差異和對(duì)外源激素的反應(yīng)靈敏性不同有關(guān)[6]。選擇1/2MS+NAA0.5mg/L時(shí),非洲菊根長勢(shì)最好，且小苗移栽成活率最高。

綜上所述,在某一品種上試驗(yàn)成功的培養(yǎng)基, 不等于在其他品種上同樣成功, 因此必須針對(duì)具體品種，適當(dāng)調(diào)整激素的種類、濃度和配比，從而篩選其相應(yīng)的培養(yǎng)基[7]。

參考文獻(xiàn)

[1]戴云新，張健，李敏，等.不同外植體和激素對(duì)非洲菊愈傷組織誘導(dǎo)及芽分化的影響[J]．浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，1(4)：695-696.

[2]陳曉靜，李梅婷，林馨．非洲菊的組培快繁[J]．福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2006，35(2)：169-172．

[3]ORLIKOWSKAT，NOWAKE，MARASEDKA,etal.Effectsofgrowthregulatorsandincubationperiodoninvitroregenerationofadventitiousshootsfromgerberapetioles[J].Plantcell,tissueandorganculture, 1999, 59(2): 95-102.

[4]MIYOSHIK，ASAKURAN.Callusinduction,regenerationofhaploidplantsandchromosomedoublinginovuleculturesofpotgerbera(Gerbera jamesonii)[J].Plantcellreports, 1996, 16(1/2): 1-5.

[5]MEYERHJ，VANSTADENJ.TheinvitrocultureofGerbera aurantiaca[J].Plantcell,tissueandorganculture, 1988, 14(1): 25-30.

[6]楊繼濤，鄒志榮，張素勤，等．植物激素對(duì)非洲菊花托愈傷組織誘導(dǎo)的研究[J]．西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2003，12(3)：133-135.

[7]馬瑞雯，宋世剛，韓愛清，等. 不同非洲菊品種在組培快繁中的差異初探[C]//植物組織培養(yǎng)與脫毒快繁技術(shù)：全國植物組培、脫毒快繁及工廠化生產(chǎn)技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.中國園藝學(xué)會(huì)，2001:36-37.

中圖分類號(hào)S188

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2015)30-031-02

基金項(xiàng)目連云港市科技攻關(guān)項(xiàng)目[CN 1302]；2015年連云港市第五期“521高層次人才培養(yǎng)工程”項(xiàng)目。

作者簡介湯雪燕(1983- )，女，江蘇江陰人，助理研究員，碩士，從事植物營養(yǎng)及花卉科研、科技推廣工作。

收稿日期2015-09-16

ApplicationofTDZinTissueCultureofGerbera jamesonii

TANGXue-yan,ZHAOTong-li,SHAOXiao-binetal(LianyungangAcademyofAgriculturalSciences,Lianyungang,Jiangsu222006)

Abstract[Objective]In order to optimize the technical system of Gerbera jamesonii tissue culture and rapid propagation. [Method] The effect of different explants and hormonal readiness on Gerbera jamesonii callus formation ,bud initiation and root induction were conducted.[Result]The result showed that using receptacle as an explant ,could accurate the induction rate，adding 0.4 mg/L 6-BA, 2.0 mg/L TDZ and 0.3 mg/L NAA to MS medium could form more callus,and had stronger callus and the best bud induction. In the medium of 1/2MS and 0.5 mg/L NAA, Gerbera jamesonii grew best and plantlet had the best survival rate of transplanting.[Conclusion]The study provided the basis for the mass production of Gerbera jamesonii.

Key wordsTDZ; Gerbera jamesonii; Tissue culture; Rapid propagation