朱 鑫,易 潭,陳 琳,吳 萍,汪建華,陳 韜,張建社,褚武英
(1. 長沙學(xué)院生物與環(huán)境工程系,中國 長沙 410003;2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,中國 長沙 410128)
?
翹嘴鱖miR-146a在胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)及溫度對(duì)其表達(dá)的影響
朱鑫1, 2#,易潭1,2#,陳琳1,吳萍1,汪建華1,陳韜2,張建社1,褚武英1
(1. 長沙學(xué)院生物與環(huán)境工程系,中國 長沙410003;2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,中國 長沙410128)
摘要為了解翹嘴鱖胚胎發(fā)育中miR-146a的表達(dá)規(guī)律以及溫度對(duì)miR-146a表達(dá)的影響,將翹嘴鱖受精卵分別在22 ℃和25 ℃水溫下孵化,并利用實(shí)時(shí)熒光定量方法檢測miR-146a在各個(gè)發(fā)育階段的表達(dá).結(jié)果顯示,在22 ℃孵化時(shí),miR-146a的表達(dá)在原腸期前處于較高水平且各時(shí)期表達(dá)沒有顯著性差異(P>0.05),在尾芽期后出現(xiàn)顯著性降低(P<0.05),并在出膜時(shí)達(dá)到最低值;在25 ℃孵化時(shí),miR-146a的表達(dá)直到神經(jīng)胚期仍處于較高水平且各時(shí)期表達(dá)沒有顯著性差異(P>0.05),發(fā)育進(jìn)入尾芽期后表達(dá)顯著降低(P<0.05),在肌效期達(dá)到最低值;miR-146a在25 ℃水溫孵化時(shí)的表達(dá)較22 ℃孵化同時(shí)期的表達(dá)都出現(xiàn)顯著降低(P<0.05).研究表明,miR-146a可能主要在胚胎發(fā)育后期起到調(diào)控胚胎發(fā)育的作用,在尾芽期后通過下調(diào)表達(dá)來促進(jìn)胚胎的發(fā)育;并且溫度能影響miR-146a的表達(dá),溫度升高會(huì)降低miR-146a在胚胎發(fā)育各個(gè)時(shí)期的表達(dá),將有利于胚胎的發(fā)育.
關(guān)鍵詞翹嘴鱖;miR-146a;發(fā)育性表達(dá);胚胎發(fā)育;溫度調(diào)節(jié)
ExpressionAnalysisofSiniperca ChuatsiMiR-146aDuringEmbryonic
上世紀(jì)80年代,隨著鱖魚人工繁殖獲得成功,我國開始大規(guī)模推廣鱖魚養(yǎng)殖,使之成為我國主要名貴養(yǎng)殖魚類之一.翹嘴鱖因其肉質(zhì)細(xì)嫩而鮮美,無小刺,且富含蛋白質(zhì),現(xiàn)已成為水產(chǎn)品市場的緊俏商品和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要品種[1].深入探索翹嘴鱖的發(fā)育機(jī)制能夠?yàn)轸~類發(fā)育生物學(xué)研究和水產(chǎn)養(yǎng)殖提供一些有價(jià)值的參考資料.
microRNA(miRNA) 是真核生物中一類進(jìn)化上保守的參與調(diào)控基因表達(dá)的非編碼小分子RNA.它通過與靶基因3′端非翻譯區(qū)互補(bǔ)配對(duì)來促進(jìn)靶mRNA降解或翻譯抑制,在基因表達(dá)中起著負(fù)調(diào)控作用[2-3].miRNA在胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖與分化、腫瘤發(fā)生和新成代謝等一系列生物過程中發(fā)揮重要的作用[4-5],但是有關(guān)miRNA在胚胎的表達(dá)特性及其在魚類早期發(fā)育中的功能研究還很少.早期的研究表明miRNA對(duì)胚胎發(fā)育起到重要作用.鼠和人的胚胎干細(xì)胞在發(fā)育形成胚胎小體時(shí),胚胎干細(xì)胞中一些特定的miRNA的表達(dá)會(huì)下調(diào)[6-7],缺失miRNA的鼠和斑馬魚胚胎在原腸胚形成、神經(jīng)發(fā)育、體節(jié)形成時(shí)出現(xiàn)發(fā)育畸形甚至停滯[8-9].Kuang等[10]發(fā)現(xiàn)miR-146a能夠與Numb基因的3′端非翻譯區(qū)互補(bǔ)配對(duì),并且驗(yàn)證了miR-146a能夠抑制Numb的表達(dá),而Numb調(diào)控的靶基因Notch參與一系列胚胎發(fā)育和形態(tài)形成過程,如成肌細(xì)胞的增殖、神經(jīng)發(fā)育和體節(jié)形成[11],因此可以推斷miR-146a很可能參與調(diào)控胚胎的發(fā)育.
水溫可以改變胚胎發(fā)育所需時(shí)間,較高的孵化溫度能加速魚類胚胎的發(fā)育速率,縮短孵化所需的時(shí)間[12].何利君[13]的研究顯示,翹嘴鱖胚胎發(fā)育在21,25和27 ℃下,分別經(jīng)過74.05,56.73和48.37h孵育后出膜.在適宜溫度范圍內(nèi),適當(dāng)升溫可以加快胚胎發(fā)育的進(jìn)程,但miRNA是否參與到水溫影響翹嘴鱖胚胎發(fā)育的分子機(jī)制中尚不明確.在本研究中,我們分別在22和25℃水溫下孵化翹嘴鱖的受精卵,并利用實(shí)時(shí)熒光定量的方法檢測miR-146a在幾個(gè)重要發(fā)育階段的表達(dá),以此了解miR-146a在胚胎發(fā)育進(jìn)程中的表達(dá)模式及水溫對(duì)miR-146a表達(dá)的影響.
1材料與方法
1.1實(shí)驗(yàn)魚
實(shí)驗(yàn)用親魚為湖南省水產(chǎn)科學(xué)研究所無病無傷、體格健壯、性腺成熟度好的翹嘴鱖,雌性個(gè)體為體質(zhì)量1.0kg以上的2~4齡魚,雄性個(gè)體為體質(zhì)量0.75kg以上的2~4齡魚.
1.2方法
1.2.1不同溫度下胚胎的孵化和取樣使用寧波市激素制品有限公司生產(chǎn)的絨毛膜促性腺激素(HCG)、促黃體生成素釋放激素類似物和鯉鯽魚腦垂體(PG)對(duì)親魚進(jìn)行人工催產(chǎn),操作方法參考劉希良[14]等文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo).將受精卵置于直徑15cm的玻璃培養(yǎng)皿中,每個(gè)培養(yǎng)皿放200~300顆,分別在22 ℃和25 ℃的水溫中孵化.期間,每半小時(shí)更換一次曝氣水以保證溶氧充足.自受精后定時(shí)將翹嘴鱖魚卵置于顯微鏡下觀察翹嘴鱖胚胎的發(fā)育進(jìn)程,當(dāng)所有魚卵半數(shù)以上達(dá)到某個(gè)時(shí)期時(shí)確定為到達(dá)該時(shí)期.當(dāng)受精卵進(jìn)入二細(xì)胞、囊胚、原腸、神經(jīng)、尾芽、肌效、心搏、出膜期時(shí),分別取適量受精卵置于裝有Trizol的2mL離心管中,每個(gè)時(shí)期取5管平行樣,置于-20 ℃冰箱保存.
1.2.2總RNA的提取及cDNA第一鏈的合成保存于Trizol中的受精卵用破口槍頭吸打數(shù)次,直至胚胎全部破碎,然后置于裝有1mLTrizol的離心管中.總RNA提取流程參照TrizolReagent(Invitrogen)說明書操作.所有總RNA樣品分別取1μL作為模板,按照OneStepPrimeScriptmiRNAcDNAsynthesisKit試劑盒(寶生物公司,大連)的說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,合成的cDNA第一鏈,于4 ℃冰箱保存待用.
1.2.3實(shí)時(shí)熒光定量檢測miR-146a的表達(dá)根據(jù)Chu等[15]建立的鱖魚miRNA文庫,設(shè)計(jì)miR-146a特異性的上游引物,以管家基因β-actin作為胚胎發(fā)育階段樣品的內(nèi)參基因[16].用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)熒光定量PCR的引物,引物由上海鉑尚生物公司合成 (見表1).取2μL逆轉(zhuǎn)錄好的cDNA為模板,加入12.5μLSYBRPremixExTaqⅡ (寶生物公司, 大連),1μL特異性的上游引物和1μL通用下游引物(Uni-miRqPCRPrimer, 10μmol/L, 寶生物公司), 8.5μL的無菌水,總體積25μL,擴(kuò)增反應(yīng)在Bio-RadCFX96system(USA)上進(jìn)行.?dāng)U增條件為:(1)95 ℃預(yù)變性60s;(2)擴(kuò)增和定量,95 ℃變性5s,60 ℃退火和延伸25s,重復(fù)40個(gè)循環(huán).(3) 繪制融解曲線(65~95 ℃,每0.1 ℃檢測一次熒光值).
表1 熒光定量檢測用引物
注:miR-146a定量所使用的下游引物為通用引物,序列未公布,購自寶生物工程(大連)有限公司(濃度:10μmol/L).
1.2.4數(shù)據(jù)處理相對(duì)表達(dá)結(jié)果計(jì)算公式為R=2-ΔΔCt,其中Ct值為PCR反應(yīng)循環(huán)閾值,ΔΔCt的計(jì)算公式為:ΔΔCt=(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)實(shí)驗(yàn)組-(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)對(duì)照組.采用SPSS12.0軟件對(duì)所得相對(duì)表達(dá)豐度數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-wayANOVA),并采用最小顯著差數(shù)法(LSD)進(jìn)行多重比較(P<0.05表示顯著性差異,P<0.01表示差異極顯著),結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(Mean±SE,n=5)表示.
2結(jié)果與分析
2.1miR-146a在胚胎發(fā)育性表達(dá)
有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iRNA在不同的細(xì)胞和不同的發(fā)育階段有差異性的表達(dá),并且它們參與細(xì)胞的生長、分化以及凋亡等過程[17-18].目前miRNA在魚類胚胎發(fā)育階段的表達(dá)研究還較少,且暫未有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-146a在魚類胚胎的發(fā)育性表達(dá).圖1結(jié)果顯示,胚胎在22 ℃水溫孵化下,miR-146a的表達(dá)在發(fā)育早期處于較高水平,其中原腸期前的各時(shí)期表達(dá)沒有顯著性差異,進(jìn)入尾芽期后顯著性地降低,并持續(xù)降低,在出膜期時(shí)達(dá)到最低水平.而在25 ℃孵化時(shí),miR-146a的表達(dá)在神經(jīng)期前處于較高水平且各時(shí)期都沒有顯著性差異,在尾芽期顯著性地降低,在肌效期達(dá)到最低值,心搏期和出膜期處于較低水平并且之間沒有顯著性差異(圖1).
圖1 miR-146a在翹嘴鱖受精卵不同發(fā)育時(shí)期的相對(duì)表達(dá)情況.A和B分別為miR-146a在22 ℃和25 ℃水溫孵化下不同時(shí)期的發(fā)育性表達(dá).相對(duì)表達(dá)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(n=5).不同的字母代表存在顯著性差異(P<0.05)Fig.1 Detection of miR-146a expression at different embryonic developmental stages. A, B represent miR-146a expressed at different embryonic developmental stages when incubation under 22 ℃and 25 ℃ water temperature, respectively. Values are the mean ±SE, n=5. The different letters indicate significant differences between columns (P<0.05)
2.2miR-146a在不同溫度孵化下的差異性表達(dá)
圖1的結(jié)果顯示溫度影響了miRNA在胚胎發(fā)育中的表達(dá).當(dāng)比較胚胎發(fā)育同一時(shí)期在22 ℃和25 ℃水溫孵化下miR-146a的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn),miR-146a在25 ℃水溫孵化時(shí)的表達(dá)較22 ℃孵化下同時(shí)期的表達(dá)都出現(xiàn)顯著性地降低,其中除出膜期外,其他時(shí)期的表達(dá)差異極顯著(P<0.01)(圖2).
圖2 miR-146a在翹嘴鱖受精卵不同水溫孵化下,同一時(shí)期的差異性表達(dá).每個(gè)時(shí)期均以22 ℃孵化下的表達(dá)值作為對(duì)照,*代表顯著性差異(P<0.05),**代表差異極顯著(P<0.01)Fig.2 The contrastive expression of miR-146a incubated under different water temperature. The data was expressed as the relative change compared with the expression level of each stage incubated under 22 ℃, asterisk (*) indicates significant difference (P<0.05), double asterisk (**) indicates significance at P<0.01
3討論
miR-146a最初被發(fā)現(xiàn)在miRNA中參與天然免疫應(yīng)答,當(dāng)單核細(xì)胞受到細(xì)菌內(nèi)毒素侵襲時(shí),miR-146a的表達(dá)顯著上調(diào)[19].近年來許多文獻(xiàn)報(bào)道,miR-146a調(diào)節(jié)的許多靶基因參與了細(xì)胞分化的作用,但這些研究主要集中在分析miR-146a對(duì)造血細(xì)胞的分化作用,而miR-146a對(duì)胚胎發(fā)育的作用暫未見到相關(guān)報(bào)道.Kuang等[10]的研究驗(yàn)證了miR-146a能夠抑制Numb的表達(dá).Numb是一種進(jìn)化保守蛋白,其作為內(nèi)源性細(xì)胞命運(yùn)決定因子,對(duì)細(xì)胞分裂的命運(yùn)起決定作用.Numb對(duì)胚胎早期神經(jīng)和肌肉的發(fā)育作用也已經(jīng)被證明[20-21].Numb作為一個(gè)重要的細(xì)胞命運(yùn)決定蛋白,參與Notch的負(fù)性調(diào)控,兩者的平衡決定了細(xì)胞分化的方向[22].Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路作為生物發(fā)育分化中高度保守的通路,通過與配體的相互作用產(chǎn)生級(jí)聯(lián)瀑布效應(yīng),參與細(xì)胞發(fā)育過程中分化方向的選擇,并對(duì)細(xì)胞的增殖及凋亡也起著重要的作用[23-24].Notch信號(hào)通路在胚胎發(fā)育中起到調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和決定細(xì)胞命運(yùn)的作用[25].激活Notch信號(hào)能夠促進(jìn)肌原細(xì)胞的增殖,并降低MyoD和myogenin的表達(dá)來延遲成肌細(xì)胞的分化[26].miR-146a及其靶基因的研究為進(jìn)一步了解miR-146a在胚胎發(fā)育中潛在的作用提供了一些重要的理論依據(jù).
翹嘴鱖miR-146a胚胎發(fā)育性表達(dá)結(jié)果顯示,在22 ℃和25 ℃水溫孵化下,miR-146a表達(dá)規(guī)律趨勢總體相似,但在不同溫度下,miR-146a的表達(dá)在幾個(gè)時(shí)期經(jīng)歷了微調(diào),說明溫度確實(shí)影響了miR-146a的表達(dá).本文結(jié)果顯示在胚胎發(fā)育早期(二細(xì)胞到神經(jīng)胚期)miR-146a的表達(dá)趨于穩(wěn)定且處于較高水平(除22 ℃神經(jīng)胚期有顯著性上升),在進(jìn)入尾芽期后表達(dá)都顯著性地降低.Giraldez等[27]的研究表明miRNA的作用并不是在發(fā)育早期決定細(xì)胞的命運(yùn)而是影響發(fā)育后期組織的發(fā)育和形成,而在神經(jīng)胚期前胚胎的大部分組織器官還未開始分化,本文結(jié)果與Giraldez等的結(jié)論相符.胚胎發(fā)育經(jīng)過神經(jīng)胚期后,是器官形成的主要階段,而本文結(jié)果顯示miR-146a的表達(dá)在尾芽期顯著降低,表明miR-146a的靶基因在這個(gè)階段后受到其抑制作用將明顯降低,并推測miR-146a的靶基因的作用可能是促進(jìn)胚胎發(fā)育的.Kuang等[10]的研究發(fā)現(xiàn)Numb是miR-146a的靶基因,Numb能夠促進(jìn)胚胎早期神經(jīng)和肌肉的發(fā)育[20-21],Numb參與調(diào)節(jié)的Notch信號(hào)通路也對(duì)胚胎的發(fā)育起到重要的作用.
溫度是影響魚類胚胎發(fā)育的一個(gè)主要的外在因子.大量研究表明,在適宜溫度下,隨著水溫的升高,胚胎的發(fā)育進(jìn)程加快,孵化所需時(shí)間縮短[28-29],但是miRNA的表達(dá)是否受到溫度的影響還未見相關(guān)報(bào)道.從圖2可以看出,在25 ℃孵化時(shí),miR-146a在不同階段的表達(dá)都比22 ℃時(shí)出現(xiàn)顯著性降低.這一結(jié)果表明溫度升高能降低miR-146a的表達(dá),從而調(diào)節(jié)胚胎的發(fā)育.有研究表明肌纖維增生和增粗的速率在較高的水溫孵化時(shí)都會(huì)升高,但是溫度對(duì)肌纖維的增粗效果強(qiáng)于增生[5].在25 ℃孵化時(shí),miR-146a的表達(dá)顯著性降低能增強(qiáng)Numb對(duì)Notch信號(hào)通路的抑制作用,促進(jìn)成肌細(xì)胞的分化,從而有利于胚胎中肌肉組織形成.這一結(jié)果表明了miR-146a在參與水溫調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的過程中是通過下調(diào)來促進(jìn)發(fā)育的.
4結(jié)論
研究表明,miR-146a在胚胎發(fā)育早期(神經(jīng)期前)的作用不明顯.在胚胎發(fā)育后期(尾芽期至出膜),miR-146a通過下調(diào)其表達(dá)來促進(jìn)胚胎的發(fā)育.而水溫升高能顯著降低miR-146a在胚胎發(fā)育每個(gè)時(shí)期的表達(dá),減少其對(duì)靶基因Numb的抑制,發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞分化的作用,從而有利于胚胎發(fā)育的進(jìn)程.
參考文獻(xiàn):
[1]李玉瓏,農(nóng)小獻(xiàn),李虹輝,等. 鱖魚生肌調(diào)節(jié)因子MyoD的克隆及其發(fā)育表達(dá)分析[J].湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào), 2013,36(4):63-68.
[2]LIUJ.ControlofproteinsynthesisandmRNAdegradationbymicroRNAs[J].CurrOpinCellBiol, 2008,20(2):214-221.
[3]XIEX,LUJ,KULBOKASEJ, et al.Systematicdiscoveryofregulatorymotifsinhumanpromotersand3′UTRsbycomparisonofseveralmammals[J].Nature, 2005,434(7031):338-345.
[4]FUY,SHIZ,WUM, et al.IdentificationanddifferentialexpressionofmicroRNAsduringmetamorphosisoftheJapaneseflounder(Paralichthys olivaceus)[J].PLoSOne, 2011,6(7):e22957.
[5]SONGL,TUANRS.MicroRNAsandcelldifferentiationinmammaliandevelopment[J].BirthDefectsResCEmbryoToday, 2006,78(2):140-149.
[6]HOUBAVIYHB,MURRAYMF,SHARPPA.Embryonicstemcell-specificmicroRNAs[J].DevCell, 2003,5(2):351-358.
[7]SUHMR,LEEY,KIMJY, et al.HumanembryonicstemcellsexpressauniquesetofmicroRNAs[J].DevBiol, 2004,270(2):488-498.
[8]BERNSTEINE,KIMSY,CARMELLMA, et al.Dicerisessentialformousedevelopment[J].NatGenet, 2003,35(3):215-217.
[9]GIRALDEZAJ,CINALLIRM,GLASNERME, et al.MicroRNAsregulatebrainmorphogenesisinzebrafish[J].Science, 2005,308(5723):833-838.
[10]KUANGW,TANJ,DUANY, et al.CyclicstretchinducedmiR-146aupregulationdelaysC2C12myogenicdifferentiationthroughinhibitionofNumb[J].BiochemBiophysResCommun, 2009,378(2):259-263.
[11]CONBOYIM,RANDOTA.TheregulationofNotchsignalingcontrolssatellitecellactivationandcellfatedeterminationinpostnatalmyogenesis[J].DevCell, 2002,3(3):397-409.
[12]KINNEO,KINNEEM.Ratesofdevelopmentinembryosofacyprinodontfishexposedtodifferenttemperature-salinity-oxygencombinations[J].CanJZool, 1962,40(2):231-253.
[13]何利君. 溫度對(duì)鱖魚胚胎發(fā)育的影響[J]. 四川畜牧獸醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1999,13(4):19-22.
[14]劉希良,賓石玉,王開卓,等. 翹嘴鱖的人工繁殖與胚胎發(fā)育觀察[J].廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2013,31(2):100-106.
[15]CHUWY,LIULS,LIYL, et al.SystematicidentificationanddifferentialexpressionprofilingofmicroRNAsfromwhiteandredmusclesofSiniperca chuatsi[J].CurrMolMed, 2013,13(8):1397-1407.
[16]ZHOURX,MENGT,MENGHB, et al.SelectionofreferencegenesintranscriptionanalysisofgeneexpressionoftheMandarinfish, Siniperca chuasti[J].ZoolRes, 2010,31(2):141-146.
[17]NEILSONJR,ZHENGGX,BURGECB, et al.DynamicregulationofmiRNAexpressioninorderedstagesofcellulardevelopment[J].GenesDev, 2007,21(5):578-589.
[18]MCCARTHYJJ,ESSERKA.MicroRNA-1andmicroRNA-133aexpressionaredecreasedduringskeletalmusclehypertrophy[J].JApplPhysiol, 2007,102(1):306-313.
[19]TAGANOVKD,BOLDINMP,CHANGKJ, et al.NF-kappaB-dependentinductionofmicroRNAmiR-146,aninhibitortargetedtosignalingproteinsofinnateimmuneresponses[J].ProcNatlAcadSciUSA, 2006, 103(33):12481-12486.
[20]PETERSENPH,ZOUK,HWANGJK, et al.Progenitorcellmaintenancerequiresnumbandnumblikeduringmouseneurogenesis[J].Nature, 2002,419(6910):929-934.
[21]CONBOYIM,RANDOTA.TheregulationofNotchsignalingcontrolssatellitecellactivationandcellfatedeterminationinpostnatalmyogenesis[J].DevCell, 2002,3(3):397-409.
[22]LIUXH,YAOS,QIAORF, et al.NandrolonereducesactivationofNotchsignalingindenervatedmuscleassociatedwithincreasedNumbCX-pression[J].BiochemBiophysResCommun, 2011,414(1):165-169.
[23]LEONGKG,KARSANA.RecentinsishtsintotheroleofNotchsignalingintumorigenesis[J].Blood, 2006,107(6):2223-2233.
[24]NICOLASM,WOLFERA,RAJK, et al.Notchlfunctionsasatumorsuppressorinmouseskin[J].Natgenet, 2003,33(3):416-421.
[25]ARTAVANIS-TSAKONASS,RANDMD,LAKERJ.Notchsignaling:cellfatecontrolandsignalintegrationindevelopment[J].Science, 1999,284(5415):770-776.
[26]NOFZIGERD,MIYAMOTOA,LYONSKM, et al.NotchsignalingimposestwodistinctblocksinthedifferentiationofC2C12myoblasts[J].Development, 1999,126(8):1689-1702.
[27]GIRALDEZAJ,CINALLIRM,GLASNERME, et al.MicroRNAsregulatebrainmorphogenesisinzebrafish[J].Science, 2005,308(5723):833-838.
[28]胡振禧,黃洪貴,吳妹英,等. 溫度對(duì)斑鱖胚胎發(fā)育的影響[J]. 淡水漁業(yè), 2014,44(3):104-107.
[29]陳昆慈,朱新平,杜合軍,等. 溫度和鹽度對(duì)寶石鱸胚胎發(fā)育的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué), 2007,14(6):1032-1037.
(編輯王健)
DevelopmentandEffectofTemperatureonMiR-146aExpression
ZHU Xin1,2#, YI Tan1,2#, CHEN Lin1,WUPing1,WANGJian-hua1,
CHEN Tao2,ZHANGJian-she1, CHU Wu-ying1*
(1.DepartmentofBiologicalandEnvironmentalEngineering,ChangshaUniversity,Changsha410003,China;
2.CollegeofVeterinaryMedicine,HunanAgricultureUniversity,Changsha410128,China)
AbstractTo investigate the expression pattern of miR-146a in embryonic developmental stage and the effect of temperature on the expression of miR-146a in Siniperca chuatsi, the embryos were incubated under different temperatures and the expression of miR-146a during embryonic developmental stage was detected by RT-qPCR. The results showed that the expressions of miR-146a were at a higher level and there is no significant difference before gastrula stage when the embryos incubated under 22 ℃ (P>0.05). And then the expressions of miR-146a decreased after tail-bud stage and decreased to the lowest level at larval stage (P<0.05). When the embryos incubated under 25 ℃, the expressions of miR-146a were at a higher level and there is no significant difference till neurula stage (P>0.05). Once at tail-bud stage, the expression of miR-146a significantly decreased (P<0.05) and to the lowest level at muscular effect stage. It was interesting that the expressions of miR-146a were significantly decreased at each developmental stage incubated under 25 ℃ when compared with 22 ℃ incubation (P<0.05). The results indicated that miR-146a mainly involved in regulating embryonic development during later embryonic developmental stages and promoted embryonic development by down regulation its expression. In addition, the expressions of miR-146a could decrease when the incubation temperature increased, and miR-146a might involve in the effect of temperature on embryonic development of Siniperca chuatsi.
Key wordsSiniperca chuatsi; miR-146a; developmental expression; embryonic development; temperature regulation
中圖分類號(hào)Q752; S917.4
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A
文章編號(hào)1000-2537(2015)05-0021-06
通訊作者*,E-mail:chuwuying18@sina.com
基金項(xiàng)目:#本文同等貢獻(xiàn)作者.
收稿日期:2014-12-15
DOI:10.7612/j.issn.1000-2537.2015.05.004
湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)2015年5期