張婷，史文靜，2

(1.陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心，陜西 西安 710075;2.陜西中藥研究所，陜西 咸陽 712000)

魚金注射液為國家中藥二類新藥，具有清熱解毒的作用。臨床上主要用于治療急性上呼吸道感染，急性支氣管炎等癥［1］。魚金注射液中甲基正壬酮是衡量魚金注射液質(zhì)量的重要指標之一。

不確定度是表征被測量物質(zhì)真值所處的量值范圍的評定結(jié)果，是對試驗測量結(jié)果的可信度評定，目前國際上推行使用不確定度代替誤差來表征實驗結(jié)果的可信賴程度［2］。甲基正壬酮作為魚金注射液中一項重要的質(zhì)量控制參數(shù)［3］，其測定數(shù)據(jù)的準確性尤為重要。本文根據(jù)《測試和校準實驗室能力的通用要求》及JJF 1059—1999《測量不確定度與表示》［4］，對甲基正壬酮測量過程進行不確定度評估，通過建立不確定度的數(shù)學(xué)模型，分析不確定度來源，為魚金注射液的質(zhì)量控制研究提供參考依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 原料與儀器

魚金注射液(陜西醫(yī)藥控股集團山海丹藥業(yè)有限責任公司，批號:13070060);甲基正壬酮標準品(批號:120420，中國藥品生物制品檢定所);乙酸乙酯、氯化鈉均為分析純。

Agilent 7890A 氣相色譜儀;AG-135 電子天平。

1.2 實驗方法［3，5］

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱:鍵合交聯(lián)聚乙二醇為固定液的毛細管柱(60 m ×250 μm×0.25 μm);載氣為高純度氦氣;檢測器:FID;載氣流速1.2 mL/min;進樣口溫度230 ℃;檢測器溫度280 ℃;分流比5∶1;程序升溫:初始80 ℃，保持5 min，以5 ℃/min 升溫速率升至220 ℃，保持3 min。

1.2.2 供試品溶液的制備 利用萃取法進行。精密量取魚金注射液25 mL(V1)，置具塞試管中，加入乙酸乙酯5 mL，再加氯化鈉5 g，振搖3 min，分取乙酸乙酯層，再加入乙酸乙酯5 mL，振搖3 min，分取乙酸乙酯層，合并乙酸乙酯提取液轉(zhuǎn)至10 mL(V2)量瓶中稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

1.2.3 標準品溶液的制備 取甲基正壬酮標準品適量，精密稱定，加乙酸乙酯溶解并稀釋至25 mL(V3)量瓶中，制成含甲基正壬酮0.273 6 mg/mL溶液，即得標準品溶液。

1.2.4 測定法 分別吸取標準品溶液與供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，經(jīng)外標法計算，供試品中甲基正壬酮含量為15.46 μg/mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 數(shù)學(xué)模型的確定

式中 C樣——魚金注射液中甲基正壬酮的濃度，μg/mL;

m標——標準品的稱樣量，mg;

V3——標準品的最后定容體積，mL;

V1——樣品的移取體積，mL;

V2——樣品的最后定容體積，mL;

A樣——樣品的峰面積;

A標——標準品的峰面積;

1 000——由mg 與μg 的換算系數(shù)。

2.1.1 不確定度來源分析［6-8］

2.1.1.1 25 mL 移液管 試樣使用25 mL 移液管，在取樣過程中會引入不確定度。

2.1.1.2 10 mL 容量瓶 試樣使用10 mL 容量瓶，在取樣過程中會引入不確定度。

2.1.1.3 25 mL 容量瓶 試樣使用25 mL 容量瓶，在取樣過程中會引入不確定度。

2.1.1.4 電子天平 十萬分之一電子分析天平，其偏差值為0.1 mg。

2.1.1.5 供試品 供試品在測定過程中會引入不確定度。

2.1.2 測定結(jié)果 經(jīng)檢測，甲基正壬酮含量測定結(jié)果是5 次重復(fù)測試結(jié)果的平均值，RSD 為1.46%。該數(shù)值可以直接用來計算與各重復(fù)性相關(guān)的合成標準不確定度。

2.2 標準不確定度分量的計算

2.2.1 標準品稱量引入的不確定度

2.2.1.1 天平示值的不確定度U(m甲) 天平AG-135(d=0. 01 mg)，其最大允許誤差為±0. 1 mg。假設(shè)為正態(tài)分布(K =3)，其標準不確定度0.1/= 0.057 7 mg。

采用減量法，其不確定度應(yīng)重復(fù)計算2 次，所以最終產(chǎn)生的不確定度為:

2.2.1.2 甲基正壬酮標準品的不確定度U(p甲)甲基正壬酮標準品由中國生物制品檢定所提供，未標注純度數(shù)據(jù)，按純度為100.0%計算，其不確定度為U(p甲)= 0。

2.2.1.3 標準稀釋用玻璃器皿25 mL(V3)單標線量瓶引入的不確定度 校準引入的不確定度U(V3)量瓶經(jīng)檢定為A 級，容量允許誤差為±0.03 mL，假設(shè)為正態(tài)分布(K=3)，其標準不確定度U(V3)= 0.03/= 0.012 2 mL。

2.2.2 供試品量取引入的不確定度

2.2.2.2 樣品溶液稀釋玻璃器皿10 mL(V2)單標線量瓶引入的不確定度 校準引入的不確定度U(V2)量瓶經(jīng)檢定為 A 級，容量允許誤差為±0.020 mL，假設(shè)為正態(tài)分布(K =3)，其標準不確定度U(V2)= 0.020/= 0.008 2 mL。

2.2.3 供試品溶液重復(fù)性測試引入的不確定度U(Ax) 供試品溶液在氣相色譜儀上連續(xù)測定5 次得到5 個數(shù)據(jù)，為隨機測量，屬于A 類不確定度，結(jié)果見表1。

表1 供試品溶液的測定結(jié)果Table 1 Results of sample solution

標準品相對標準不確定度為:

魚金注射液樣品中甲基正壬酮測定重復(fù)性的相對標準不確定度:

表2 不確定度各分量分析一覽表Table 2 The component table of standard uncertainty

2.2.4 合成標準不確定度

2.2.5 擴展不確定度U 的計算 按95%置信概率，取包含因子K=2 計算擴展不確定度:

魚金注射液中甲基正壬酮的含量可表示為:(15.46 ±0.051 4)μg/mL，K=2。

3 討論

(1)根據(jù)《中國藥典》(2010 年版)一部附錄項下氣相色譜法，測定魚金注射液中甲基正壬酮的含量，參考JJF 1059—1999《測量不確定度與表示》，對含量測定過程中的不確定度來源進行分析，通過不確定度分析評價，可以為合理改進分析方法，以期將檢驗方案誤差降至最小提供可靠依據(jù)。

(2)經(jīng)不確定度分析，天平示值的不確定度和供試品中經(jīng)氣相色譜法測定所得峰面積，以及測定結(jié)果的重復(fù)性的不確定度分量是各不確定度分量中最大的。

(3)在試驗中適當增加對照品的稱樣重量可減少減量引起的不確定度。

(4)用氣相色譜法測定時，適當增加進樣次數(shù)可降低該步驟的不確定度。

(5)在藥物測試過程中，人員、儀器、量器、環(huán)境等都會引起檢測誤差，將不確定度引入合格評定的判定結(jié)果中可保證結(jié)果的公平、公正。

［1］ 劉杰，陳海金.魚金注射液的一般藥理學(xué)研究［J］. 中國藥物與臨床，2009，9(3):223-224.

［2］ 李艷，羅立駿，程輝躍，等. 氣相色譜法測定維生素E軟膠囊含量的不確定度評定［J］. 藥物分析雜志，2012，32(4):692-696.

［3］ 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:1188.

［4］ 中國合格評定國家認可委員會. CNAS—GL06 化學(xué)分析中不確定度的評估指南［S］. 北京:中國計量出版社，2006.

［5］ 韓爽，張明時，周貽兵，等. 氣相色譜法測定魚腥草干品中甲基正壬酮的含量［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(28):15606-15607.

［6］ 劉淑聰，王小營，張麗，等. 三七總灰分與酸不溶性灰分的標準值及不確定度評價［J］. 醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，31(2):195-198.

［7］ 曹愛英，張園，趙春暉，等. 液質(zhì)聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中泰樂霉素含量不確定度評價［J］. 中國漁業(yè)質(zhì)量與標準，2013，3(4):21-24.

［8］ 楊建剛，肖志強，王天，等. 高效液相色譜法測定愈風(fēng)寧心片中葛根素不確定度評價［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，8(32):219-220.