文/王天坤 李永清 黃 驊 孟慶更 劉寶華 楊鐵剛 孫寶山 薛 勇

（1北京市昌平區(qū)動物疫病預防控制中心；2北京市農林科學院畜牧獸醫(yī)研究所畜禽疫病防控技術北京市重點實驗室；3北京市飼料監(jiān)察所；4北京市昌平區(qū)南口動物防疫站；5北京市昌平區(qū)崔村動物防疫站）

體細胞（Somatic Cell，SC）是奶牛生乳中存在的血液白細胞和脫落的上皮細胞的總稱。體細胞數(shù)（Somatic Cell Counts，SCC）是指每毫升生乳中體細胞的個數(shù)。健康奶牛生乳中的SCC為2 萬～20 萬個/mL。SCC是反應乳腺感染細菌或病毒嚴重程度的標記，又稱“金標準”。當奶牛乳腺被感染或受機械損傷后，SCC就會上升，感染越嚴重，體細胞數(shù)越高。SCC增高不僅會造成奶牛產奶量下降，而且還會對生乳的化學成分產生不同程度的影響，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)和乳品加工業(yè)造成嚴重的損失，給人類的健康帶來威脅。

2015年4月15日，北京市昌平區(qū)某奶牛場報告，該場20 多頭產奶牛出現(xiàn)體細胞嚴重超標現(xiàn)象，生乳品質受到了影響，以至于乳品廠拒收其生乳，遭受嚴重的經濟損失，而牛場管理及技術人員均無法查得病因。于是邀請本單位人員前往牛場進行現(xiàn)場診治。通過DHI檢測結果發(fā)現(xiàn)，發(fā)病牛只生乳中體細胞數(shù)最高達930 萬個/mL，最低100 萬個/mL，達到重度乳房炎的程度。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，這些奶牛的乳頭或乳房均有不同程度的損傷，表現(xiàn)為紅腫、乳管口開裂、潰瘍；觸診時，奶牛表現(xiàn)出疼痛（踢腿）。初步診斷為擠奶員操作不規(guī)范導致擠奶機損傷乳頭，加上牛床不衛(wèi)生引起感染而形成乳房炎。將8 頭SCC最高的奶牛生乳帶回實驗室進行細菌分離和鑒定，結果如下。

1 細菌分離鑒定

無菌條件下采集生乳樣品，分別接種于LB瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板以及含5%的犢牛血清的TSA和TSB平板上，37 oC培養(yǎng)過夜，結果在LB瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板上未見細菌生長，而在TSA和TSB平板上均有白色或金黃色菌落生長。顯微鏡鏡檢發(fā)現(xiàn)，所分離的細菌均為革蘭氏陽性菌，為葡萄串或短鏈狀。再對所分離細菌進行16s RNA的PCR產物測序進行鑒定，結果獲得2 株表皮葡萄球菌（Staph.Epidemitis），2 株無乳鏈球菌（Strep.Agalactiae）和1株金黃色葡萄球菌（Staph.Chromogenes）。這些細菌都在自然界天然存在，均可引起奶牛乳房炎。其中，金黃色葡萄球菌藥物治療無多大意義，建議牛場淘汰病牛。

2 藥敏試驗

各選取1 株表皮葡萄球菌和無乳鏈球菌以TSA加血清37 oC培養(yǎng)5 h后，取100 μL涂布TSA血清平板，待表面液體被吸干后，將藥敏紙片輕貼于平板上并保持合適的間距（每板7 個），然后倒置于37 ℃溫箱培養(yǎng)過夜。觀察并測量每個藥物抑菌圈的直徑，結果如表1所示。從結果中可以看出，所分離的細菌對頭孢噻肟、頭孢氨芐、環(huán)丙沙星高度敏感，而對多黏菌素、慶大霉素有抵抗，對其它藥物表現(xiàn)為不同程度的耐藥性。

3 毒力試驗

將分離出的表皮葡萄球菌和無乳鏈球菌在含10%胎牛血清TSB培養(yǎng)平皿上劃線，于37 ℃培養(yǎng)過夜，然后挑取單個菌落接種到含10%胎牛血清TSB培養(yǎng)液中，240 r／min振蕩搖菌16 h后，測定OD 600值，當達到2.1046時，再按照0.5 mL/只的劑量腹腔注射5 只8 周齡的BALB/c小鼠，于隔離環(huán)境中飼養(yǎng)，觀察小鼠發(fā)病與死亡情況。結果為：接種過無乳鏈球菌的小鼠于24 h后100%（5/5）死亡，解剖發(fā)現(xiàn)小鼠肺臟嚴重出血，對肝臟切面觸片進行革蘭氏染色后，顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)，肝細胞內有大量的短鏈桿菌。這表明小鼠的死亡原因為無乳鏈球菌感染，從而證實從體細胞嚴重超標的奶牛乳房內分離出的細菌為高毒力的無乳鏈球菌。

表1 不同藥物的抑菌圈直徑結果

4 分析與建議

藥敏試驗和毒力試驗結果表明，該牛場嚴重體細胞數(shù)超標的一個重要病原為無乳鏈球菌感染，該菌具有很強的毒力。該菌常存在于奶牛的皮膚、乳頭及乳房，通過擠乳人員的手、擠乳機械以及蠅類攜帶而傳播，是奶牛感染乳房炎的主要病原體。其感染后不激發(fā)機體免疫，目前尚無菌苗可用，因此建議按照如下措施進行防治。

4.1 調整擠奶機械

要求擠奶員重新校正擠奶機的負壓壓力和脈沖頻率，檢查擠奶杯的橡皮奶襯是否老化，然后根據(jù)不同奶牛乳頭形狀調整擠奶時間，避免負壓空吸。

4.2 合理處理患病奶牛

淘汰產奶量低又有嚴重乳房炎的奶牛；對一些癥狀較輕或體細胞數(shù)相對較低的奶牛實施對癥治療：以頭孢噻肟、頭孢氨芐、環(huán)丙沙星3 種敏感抗生素交替進行肌肉注射和乳頭灌注，對紅腫的乳頭除藥浴外，還應采取外敷消腫等措施。

4.3 對環(huán)境進行消毒

開展全面的衛(wèi)生消毒工作，盡可能防止牛只感染病原微生物。