徐 兵，章文濤，冀 宏

（常熟理工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，江蘇 常熟 215500）

白背毛木耳菌絲生長促進劑研究與應(yīng)用*

徐 兵，章文濤，冀 宏**

（常熟理工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，江蘇 常熟 215500）

對白背毛木耳進行液體培養(yǎng)，采用正交試驗設(shè)計，尋求較優(yōu)配比的白背毛木耳生長促進劑配方，并通過固體培養(yǎng)試驗驗證生長促進劑的可靠性。最終確定優(yōu)化生長促進劑配方為：每100毫升萘乙酸0.05 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸鋅2 g、硼酸0.4 g、碳酸鈣0.4 g、鎢1 g、硫酸鎂2 g。驗證結(jié)果顯示，該促進劑對白背毛木耳菌絲生長有顯著促進作用。

白背毛木耳；生長促進劑；正交設(shè)計；液體培養(yǎng)

白背毛木耳是一種食藥兼用的食用菌，我國從80年代初開始進行人工栽培，近幾年栽培面積日益擴大，由于品種的改良，栽培技術(shù)的完善，產(chǎn)品質(zhì)量及產(chǎn)量均得以提高，加之其在醫(yī)療保健方面所凸顯的價值，越來越得到廣大食用菌科技工作者的關(guān)注和消費者的喜愛[1-3]。

隨著白背毛木耳的食用價值和營養(yǎng)價值日益被人們所熟知，消費市場對于白背毛木耳需求越來越大。在現(xiàn)在市場經(jīng)濟和經(jīng)濟發(fā)展的大趨勢下，廠商應(yīng)在提高商品內(nèi)在價值的同時大大縮短生產(chǎn)周期，這樣才能在激烈的競爭環(huán)境中脫穎而出。研究白背毛木耳菌絲生長促進劑是必然的和可行的。在查閱相關(guān)資料后發(fā)現(xiàn)，針對白背毛木耳菌絲生長促進劑的研究報道較少，本實驗設(shè)計七因素三水平的正交試驗[4-5]，采用液體搖床培養(yǎng)觀測，固體斜面培養(yǎng)驗證的方法，確定較優(yōu)配比的白背毛木耳菌絲生長促進劑配方。

1 材料和方法

1.1菌種

分離自“徐州市豐縣白背毛木耳”，4℃保存。

1.2培養(yǎng)方法

1.2.1 固體培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基。

1.2.2 液體培養(yǎng)基

馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、生長促進劑（見表1）。

1.2.3 液體培養(yǎng)方法

取3塊，面積為0.5 cm2的斜面菌種（不帶瓊脂），接入液體培養(yǎng)基，靜置 24 h后 25℃、150 r·min-1培養(yǎng)，每日定時（每日下午16時）測量生物量變化。

1.2測定方法

菌絲球干重法（菌絲體生物量，g/100mL）：將培養(yǎng)液經(jīng)80目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，菌絲體經(jīng)蒸餾水反復(fù)沖洗數(shù)次后，于60℃，2 h烘干至恒重，由電子天平測量其干重，記錄數(shù)據(jù)。

1.3實驗方法

1.3.1 確定因素水平

查閱參考文獻 [6]、參考文獻 [7]，在預(yù)實驗基礎(chǔ)上選擇確定萘乙酸、磷酸二氫鉀、硫酸鋅、硼酸、碳酸鈣、鎢、硫酸鎂為因素變量，設(shè)計七因素三水平的正交試驗見表1。

表1 正交設(shè)計因素水平表Tab.1 The table of factors and levels of orthogonal design

將各處理組分別加入液體培養(yǎng)基，接種毛木耳進行液體培養(yǎng)，觀測相同培養(yǎng)條件下發(fā)酵終點菌絲體生物量，以菌絲體生物量為指標進行結(jié)果分析，確定優(yōu)化生長促進劑配方。

1.3.2 固體培養(yǎng)驗證試驗

將白背毛木耳液體培養(yǎng)后測得的菌絲體生物量，運用生物統(tǒng)計分析后可得出優(yōu)化配方。該配方與空白對照做白背毛木耳菌絲固體培養(yǎng)生長驗證試驗，設(shè)置10個平行組。

2 結(jié)果與分析

2.1液體培養(yǎng)菌絲每日生物量

記錄液體培養(yǎng)菌絲每日生物量數(shù)據(jù)，見表2。

由表2中數(shù)據(jù)可知，液體培養(yǎng)菌絲體每日生物量不斷增加，且隨著時間的增長，增長速度呈加快的趨勢。測定結(jié)果所反映的菌絲體生物量變化符合絲狀真菌液體培養(yǎng)生長的普遍規(guī)律，并且數(shù)據(jù)具有穩(wěn)定性、重復(fù)性、可靠性。因此，通過觀測菌絲體生物量的變化可以考察培養(yǎng)條件（如培養(yǎng)基營養(yǎng)成分、生長因子） 對菌絲體生長的影響，提示了可以利用液體發(fā)酵的方法，以菌絲體生物量為指標，評價生長促進劑對白背毛木耳菌絲生長的作用效果。從而為下面正交試驗提供了依據(jù)。

表2 液體培養(yǎng)菌絲體每日生物量統(tǒng)計Tab.2 Sratistics of daily mycelial biomass in liquid culture

2.2配方正交試驗結(jié)果分析

配方正交試驗結(jié)果分析見表3。

為了清楚顯示各試驗組菌絲體生物量（菌絲干重）的區(qū)別，見圖1所示。

R值越大表示該因素對于白背毛木耳菌絲的生長影響越顯著，由表4可得，7個因素對于菌絲生長的影響從大到小為：硫酸鎂＞磷酸二氫鉀＞硫酸鋅＞硼酸＞碳酸鈣＞鎢＞萘乙酸。

由表4中K值可得出，最終確定白背毛木耳生長促進劑配方為：每100毫升萘乙酸 0.05 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸鋅2 g、硼酸0.4 g、碳酸鈣0.4 g、鎢1 g、硫酸鎂2 g。

表3 菌絲體生物量正交試驗結(jié)果Tab.3 Data analysis of dry mycelial weight by orthogonal design experiment

圖1 不同試驗組的菌絲體生物量Fig.1 The dry weight of mycelium in the different groups

2.3固體培養(yǎng)驗證試驗結(jié)果

實驗組與空白組培養(yǎng)觀測白背毛木耳菌絲生長速度，每組10個重復(fù)試驗，結(jié)果見表4。

表4 固體斜面培養(yǎng)菌絲生長速度Tab.4 Mycelia growth rate in solid culture

由表4可知，F(xiàn)值為3.76。實驗組菌絲平均生長速度為10.78 mm·d-1，空白組菌絲平均生長速度為8.15 mm·d-1。

查表[8]得F0.05=3.18，所以F＞F0.05，接受零假設(shè)，故實驗組與空白組有顯著差距。說明本實驗毛木耳菌絲生長促進劑對毛木耳菌絲生長有明顯促進作用。

3 結(jié)論

七因素三水平正交設(shè)計試驗表明白背毛木耳液體培養(yǎng)菌絲隨著時間的延長生物量隨之增加，這是因為白背毛木耳菌絲在生長過程中會消耗大量的營養(yǎng)物質(zhì)，通過自身的新陳代謝合成有機物。菌絲生物量的變化符合一般微生物液體培養(yǎng)的普遍規(guī)律。

通過正交設(shè)計，得出較優(yōu)的白背毛木耳菌絲生長促進劑的配方為：每100毫升萘乙酸 0.05 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸鋅2 g、硼酸0.4 g、碳酸鈣0.4 g、鎢1 g、硫酸鎂2 g。各因素對于菌絲生長影響從大到小依次是硫酸鎂＞磷酸二氫鉀＞硫酸鋅＞硼酸＞碳酸鈣＞鎢＞萘乙酸。通過方差分析可知，磷酸二氫鉀和硫酸鎂兩個因素水平變化對于配方效果影響顯著。

生長促進劑配方與空白對照（PDA培養(yǎng)基）的對比驗證試驗結(jié)果說明，在0.05水平上（F＞F0.05），實驗組與空白組菌絲生長速度差異顯著。從而證明本實驗篩選的白背毛木耳菌絲生長促進劑對其菌絲生長有顯著促進作用。

[1]婁隆后,朱慧真，婁人杰.木耳屬種類的初步研究 [J].中國食用菌，1992，11（4）：30-32.

[2]袁明生，孫佩群.四川蕈菌 [M].成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，1995：98-99.

[3]戴芳瀾.真菌的形態(tài)和分類[M].北京：科學(xué)出版社，1987：232.

[4]方開泰，馬長興.正交與均勻設(shè)計試驗設(shè)計[M].北京：科學(xué)出版社，2001.

[5]馬蓉，管玉珠，宋龍，等.用正交實驗法對巴布劑基質(zhì)配比的研究[J].蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002，28（9）：43.

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[8]李春喜，姜麗娜，紹云，等.生物統(tǒng)計學(xué)（第三版）[M].北京：科學(xué)出版社，2005：319.

Research and Application of Accelerator on Auricularia polytricha Mycelial Growth

XU Bing,ZHANG Wen-tao,JI Hong
(College of Biology and Food Engineering,Changshu Institute of Technology,Changshu 215500,China)

The optimum formula of Auricularia polytricha growth promoter in the liquid culture was studied by using orthogonal experimental design.The reliability of growth promoter was done by Auricularia polytricha cultivated in solid.The optimum formula of growth promoter(100 mL culture fluid)were naphthylacetic acid 0.05 g,monopotassium phosphate 2 g,zinc sulfate 2 g,boric acid 0.4 g,calcium carbonate 0.4 g,wolfram 1 g,manganese sulphate 2 g.The experiment results showed that the growth promoter had a significant role for Auricularia polytricha mycelial growth.

Auricularia polytricha;growth accelerator;orthogonal experiment;liquid culture

S646.6

A

1003-8310（2015）02-0044-04

10.13629/j.cnki.53-1054.2015.02.012

常熟市科技計劃項目（CN201308）；江蘇省高校成果產(chǎn)業(yè)化推進項目（JHB2012-49）。

徐兵（1982-），男，本科，實驗師，主要研究方向為食用菌學(xué)。E-mail:xubing@cslg.cn

**通信作者：冀宏（1969-），男，博士，教授，主要從事食（藥）用菌工程技術(shù)研究及現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)經(jīng)濟與管理方面研究。E-mail:jihong@cslg.cn

2015-01-20