農(nóng)藥引起的漁業(yè)污染事故調(diào)查方法的研究——以三唑磷為例

鐘 志1,2， 郭遠(yuǎn)明2， 劉 琴3

(1.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江舟山 316021；2.農(nóng)業(yè)部重點漁場漁業(yè)資源科學(xué)觀測實驗站，浙江舟山 316021；3.浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點實驗室，浙江舟山 316021)

摘要以三唑磷為例，根據(jù)三唑磷引起的漁業(yè)污染事故所產(chǎn)生的一些現(xiàn)場情況、魚類死亡特征及死亡順序，結(jié)合實驗室模擬魚類三唑磷中毒的毒性試驗，用氣相色譜法測定事故中水樣及生物樣中三唑磷含量效果較好，可應(yīng)用于漁業(yè)污染事故調(diào)查。

關(guān)鍵詞三唑磷；漁業(yè)污染事故；氣相色譜法

中圖分類號S851.34+7

基金項目浙江省科技計劃項目(2015C32001)。

作者簡介鐘志(1979- )，男，江西萍鄉(xiāng)人，高級工程師，碩士，從事漁業(yè)環(huán)境監(jiān)測研究。

收稿日期2015-06-17

Research the Method of Fishery Pollution Accident Caused by Pesticide-Taking Triazophos as an Example

ZHONG Zhi1,2, GUO Yuan-ming2, LIU Qin3(1. The Marine Fishery and Research of Zhejiang Province, Zhoushan, Zhejiang 316021; 2. Scientific Observing and Experimental Station of Fishery Resources for Key Fishing Grounds, MOA, Zhoushan, Zhejiang 316021; 3. Key Laboratory of Sustainable Utilization of Technology Research for Fisheries Resources of Zhejiang Province, Zhoushan, Zhejiang 316021)

AbstractTaking triazophos as an example, based on describing fishery pollution accident caused by triazophos, fish mortality and death sequence, combined with toxicity experiment, using GC method to determine content of triazophos in water and biology is good, which can be used in fishery pollution accident investigation.

Key words Triazophos; Fishery pollution accident; GC

近年來隨著海水養(yǎng)殖的不斷發(fā)展，養(yǎng)殖過程中藥物的使用也開始泛濫，養(yǎng)殖戶為了保護(hù)養(yǎng)殖產(chǎn)品不受敵害生物的侵害并達(dá)到最大的經(jīng)濟(jì)效益，使用大量的藥物清除敵害生物，從而導(dǎo)致養(yǎng)殖生物體內(nèi)的藥物殘留增加，也可能殃及其他的養(yǎng)殖生物和天然資源。在浙江沿海灘涂養(yǎng)殖中廣泛使用三唑磷就是典型例子。三唑磷對不同種類海洋生物的毒性不同[1-2]，控制一定的三唑磷濃度，可以清除對三唑磷比較敏感的生物，如一些魚類、蝦蟹類，而保留了不敏感的生物，如一些貝類。20世紀(jì)80年代后期以來，灘涂貝類幼苗養(yǎng)殖大量使用三唑磷，貝類成活率明顯提高；在圍塘養(yǎng)殖中也使用三唑磷清塘來提高養(yǎng)殖生物的成活率。目前，三唑磷的使用泛濫，甚至在泥螺起捕時也使用三唑磷以提高采捕效率。然而，被清除的敵害生物是一些敏感魚類和蝦蟹類，是附近張網(wǎng)、插網(wǎng)、串網(wǎng)等不同作業(yè)的漁獲物，甚至出現(xiàn)在圍塘和網(wǎng)箱養(yǎng)殖生物中。因此，海水養(yǎng)殖生物的死亡必然引起不同作業(yè)漁民之間的矛盾糾紛，調(diào)查、鑒定該類事故原因便成為一項涉及社會穩(wěn)定的重要工作，具有明顯的社會和經(jīng)濟(jì)意義。

該類事故一旦發(fā)生，與其他漁業(yè)污染事故類似，必須在事故現(xiàn)場根據(jù)養(yǎng)殖生物死亡與水質(zhì)特征調(diào)查取證，作出初步判斷,分析可能的污染原因及主要污染因子，控制污染源，為進(jìn)一步深入調(diào)查贏得主動?；貙嶒炇液螅ㄟ^實驗室內(nèi)的定性、定量分析查找有關(guān)的污染物對水生生物的毒性試驗資料，在沒有相應(yīng)資料的情況下，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的污染物對養(yǎng)殖生物的毒性試驗以取得理論依據(jù)，最后對所獲得的資料進(jìn)行綜合分析，得出科學(xué)、有說服力的結(jié)論。鑒于此，筆者針對調(diào)查、鑒定的幾起三唑磷引起的污染死魚事故，介紹了農(nóng)藥引起的漁業(yè)污染事故調(diào)查方法，以期為漁業(yè)污染事故鑒定提供參考。

1魚類三唑磷中毒特征

鱸魚三唑磷中毒時，魚嘴張開，鰓蓋外翹，魚體顏色明顯加深，口內(nèi)出血，該現(xiàn)象在浙江蝦峙圍塘養(yǎng)殖鱸魚和蒼南網(wǎng)箱養(yǎng)殖鱸魚的死亡事故中都能觀察到。在實驗室模擬毒性試驗，三唑磷中毒時，魚類出現(xiàn)煩躁不安、跳躍撞壁、鰓蓋鼓起、游動速度減慢，魚體明顯出血直至死亡，試驗時不斷充氣，水體沒有缺氧的可能，推測該癥狀可能是三唑磷毒性表現(xiàn)為接觸損害，鰓受損造成呼吸困難。嘴巴張開、鰓蓋外翹是三唑磷引起鱸魚死亡最明顯的特征?，F(xiàn)場死魚特征與上述描述相吻合，為死魚的鑒定提供重要證據(jù)。

三唑磷中毒和其他有機(jī)磷農(nóng)藥中毒癥狀有所不同，其他有機(jī)磷農(nóng)藥中毒時魚體腹部腫大，具有程度不同的積水腫腹，并且魚鱗疏松豎立，易于脫落，眼球突出，角膜出現(xiàn)血點。

蝦類的死亡特征就不是很明顯，因為三唑磷對蝦類的毒性非常大，蝦類的LC50值幾乎比魚類小2個數(shù)量級，其特征的癥狀來不及顯現(xiàn)。死亡的判斷只能靠三唑磷的定性與定量測定。

2水體、沉積物、生物體中三唑磷的測定方法

死魚現(xiàn)場有特征的癥狀，給事故的調(diào)查、鑒定提供工作方向，但是還必須在現(xiàn)場的環(huán)境調(diào)查中用公認(rèn)、規(guī)范的方法取得證據(jù)。

2.1樣品中三唑磷的提取

2.1.1水體中三唑磷的提取。取500 ml水樣于分液漏斗中，加入10 ml二氯甲烷，充分振搖后靜置分層，取下層二氯甲烷過無水硫酸鈉柱脫水至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，用10 ml二氯甲烷重復(fù)萃取1次，過無水硫酸鈉柱后合并萃取液，40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入少量甲苯洗滌旋發(fā)瓶，定容至1 ml，供氣相色譜分析用。

2.1.2沉積物中三唑磷的提取。取10 g樣品于50 ml具塞錐形瓶中，加入10 ml正己烷，磁力攪拌5 min，收集有機(jī)相，重復(fù)萃取2次，合并有機(jī)相，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉柱脫水，40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入少量甲苯洗滌旋發(fā)瓶，定容至1 ml，供氣相色譜分析用。

2.1.3生物體中三唑磷的提取。將樣品解凍，稱取10 g樣品于50 ml離心管中，加入20 ml丙酮，均質(zhì)機(jī)均質(zhì)1 min，分散均勻， 4 000 r/min離心3 min，將丙酮層轉(zhuǎn)移至100 ml雞心瓶中。原離心管中加入10 ml丙酮重復(fù)提取1次，合并提取液，于35 ℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。加入30 ml 30 g/L硫酸鈉溶液和10 ml正己烷，充分振蕩混合1 min，轉(zhuǎn)移至另一50 ml離心管中，4 000 r/min離心3 min，除去上層正己烷層。重復(fù)向水相中加入正己烷提取直至正己烷層呈無色。水相倒入125 ml分液漏斗中，加入20 ml二氯甲烷，充分振搖2 min，靜置分層。將下層二氯甲烷提取液放入100 ml雞心瓶中。再向原分液漏斗中加入20 ml二氯甲烷，充分振搖2 min，靜置分層。合并下層二氯甲烷提取液，經(jīng)過無水硫酸鈉柱脫水過濾于100 ml雞心瓶中，于35 ℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，轉(zhuǎn)移至5 ml刻度試管中并用氮氣吹干，加入1 ml甲苯，供氣相色譜分析用。

2.2儀器儀器為美國瓦里安公司生產(chǎn)的氣相色譜儀，型號為CP3800。

2.3分析條件進(jìn)樣口溫度為270 ℃，不分流進(jìn)樣；載氣為99.999%高純氮，流速為2.0 ml/min；毛細(xì)管為SUPELCO SPB-50，采用程序升溫，150 ℃以30 ℃/min升溫到250 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升溫到260 ℃，保持5 min；檢測器為氮磷檢測器，溫度為300 ℃，尾吹氣流量為28.0 ml/min，氫氣流量為4.2 ml/min，空氣流量為175.0 ml/min，銣珠電流為3.2 A。

3水生物毒性試驗

3.1方法標(biāo)準(zhǔn)參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB17378.7-1998海洋監(jiān)測規(guī)范 近海污染生態(tài)調(diào)查和生物監(jiān)測，4.1.7 生物毒性試驗以及國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T13267-91水質(zhì)物質(zhì)對淡水魚類急性毒性測定方法。

3.2試驗結(jié)果三唑磷對鱸魚和脊尾白蝦的24 h-LC50分別為0.089 0、0.080 0 mg/L,48 h-LC50分別為0.082 0、0.008 9 mg/L,96 h-LC50分別為0.031 0、0.001 0 mg/L(表1)[1-2]。

表1　三唑磷對鱸魚和脊尾白蝦的毒力　 mg/L

4案例分析

4.1由于三唑磷引起的養(yǎng)殖塘污染事故鑒定2005年，浙江舟山某養(yǎng)殖塘養(yǎng)殖的脊尾白蝦突然出現(xiàn)死亡，附近有養(yǎng)殖戶清塘使用三唑磷。到現(xiàn)場分別采集脊尾白蝦死亡塘、進(jìn)水口、進(jìn)水渠、施用三唑磷養(yǎng)殖塘水樣及死亡的生物樣。通過分析，在上述樣品中均檢出三唑磷，其濃度分別為0.041、0.052、0.067、0.089、0.024 mg/kg，水體中濃度分布基本上呈施用三唑磷養(yǎng)殖塘從水渠由高到低至脊尾白蝦死亡養(yǎng)殖塘的趨勢，結(jié)合三唑磷對脊尾白蝦的48 hLC50為0.008 9 mg/L[2]，證明脊尾白蝦的死亡與施用三唑磷清塘有關(guān)。

4.2由于三唑磷引起的網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)污染事故鑒定2005年，溫州蒼南縣某網(wǎng)箱養(yǎng)殖鱸魚出現(xiàn)死亡，并送來水樣和死亡鱸魚樣品，鱸魚嘴張開，鰓蓋外翹，魚體顏色明顯加深，口中出血，與實驗室毒性試驗死亡鱸魚特征相似。用氣相色譜儀對水體、魚鰓、肌肉組織進(jìn)行檢測，水體中三唑磷檢出濃度為0.011 0 mg/L，魚鰓中0.025 mg/kg，肌肉組織中未檢測出三唑磷含量，三唑磷對鱸魚的毒性較大，其48 hLC50為0.082 0 mg/L[1]，可判斷鱸魚的死亡與三唑磷有關(guān)。

5討論

三唑磷多用毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行測定[3-5],運用保留時間定性，外標(biāo)法定量。不同的儀器對三唑磷的測定有不同的保留時間，通過對氣相色譜儀的測定條件進(jìn)行優(yōu)化，可以快速地對污染事故中的三唑磷含量進(jìn)行定性和定量測定。

魚類三唑磷中毒后魚嘴張開，鰓蓋外翹，是由于三唑磷直接破壞魚類的鰓部組織使其呼吸困難，魚類極力張開嘴及擴(kuò)大鰓部換水量以獲得充足氧氣所致。上述癥狀與水體缺氧導(dǎo)致的死魚相似，但出現(xiàn)該類死魚事故時如水體中溶解氧正常，則表明魚體可能是三唑磷中毒死亡。這是魚類三唑磷中毒后有別于其他有機(jī)磷類農(nóng)藥中毒后的特征。

三唑磷中毒特征是小魚先死，大魚后死，魚嘴張開、鰓蓋外翹，體色普遍明顯加深、口中出血。三唑磷對4種生活在沿岸水域或灘涂魚類的毒性大小為梭魚>大彈涂魚>鱸魚>日本鰻鱺苗[2]，對長毛對蝦的48 hLC50為0.053 0 mg/L，對脊尾白蝦為0.008 9 mg/L[3]。

用氣相色譜儀對水質(zhì)、沉積物以及生物體中的三唑磷進(jìn)行定量定性檢測，該方法具有操作簡便、快速、靈敏度高等優(yōu)點，可以應(yīng)用于漁業(yè)污染事故調(diào)查，對確定污染物和污染源起了重大作用，有助于漁業(yè)污染事故的調(diào)查處理，取得較好的社會和經(jīng)濟(jì)效益。

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