山東花生主產(chǎn)區(qū)土壤及花生果霉菌菌相調(diào)查及分析

龐國(guó)興1， 胡東青1， 趙喜喜2， 石文娟1， 李天放1， 門愛軍3，唐 靜4， 房保海4*

(1.青島出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東青島 266001；2.青島國(guó)家海洋科學(xué)研究中心，山東青島 266071；3.山東出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東青島 266001；4．山東檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，山東青島 266001)

摘要[目的]了解山東地區(qū)種植花生的土壤及剛收獲的花生果的霉菌污染情況。[方法]分別對(duì)山東省3個(gè)花生主產(chǎn)區(qū)日照、青島和臨沂種植花生的田間土壤和剛收獲的花生果進(jìn)行了調(diào)查研究，重點(diǎn)對(duì)產(chǎn)毒霉菌，特別是黃曲霉進(jìn)行了分析。[結(jié)果] 研究表明，山東花生主產(chǎn)區(qū)3個(gè)地區(qū)的產(chǎn)毒霉菌污染情況很低，且最受世界食品安全關(guān)注的黃曲霉檢出率很低，只檢出3株，其中青島檢出2株，臨沂檢出1株，說明山東花生主產(chǎn)區(qū)的花生生長(zhǎng)土壤環(huán)境很好，有利于花生安全生產(chǎn)的實(shí)現(xiàn)。[結(jié)論] 研究對(duì)于探討花生種植地黃曲霉毒素污染以及采取預(yù)防措施具有重要意義。

關(guān)鍵詞花生；霉菌；菌相

中圖分類號(hào)S565.2

基金項(xiàng)目山東檢驗(yàn)檢疫局科學(xué)研究項(xiàng)目(SK201363)；國(guó)家質(zhì)檢總局科學(xué)研究項(xiàng)目(2006IK105)。

作者簡(jiǎn)介龐國(guó)興(1979- )，男，內(nèi)蒙古呼倫貝爾人，高級(jí)工程師，碩士，從事食品檢驗(yàn)研究。*

收稿日期2015-06-01

InvestigationandAnalysisofSoilandPeanutMouldBacterialFlorainShandongProvince

PANGGuo-xing1,HU Dong-qing1,ZHAO Xi-xi2,FANG Bao-hai4*etal(1.QingdaoEntryExitInspectionandQuarantineBureau,Qingdao,Shandong266001; 2.QingdaoNationalMarineScienceResearchCenter,Qingdao,Shandong266071; 4.TechnicalCenterofShandongInspectionandQuarantineBureau,Qingdao,Shandong266001)

Abstract[Objective] To study mould contamination situation of soil and harvesting peanut in Shandong Province. [Method] The soil of peanut planting field in Rizhao,Qingdao,Linyi and harvesting peanut were investigated,aflatoxin was analyzed. [Result] The study showed that,mould contamination situation of three peanut producing area in Shandong Province is low,only three strains of aflatoxin were detected,indicating that soil environment is good for peanut in Shandong Province,and is beneficial to peanut safety production. [Conclusion] The study has significance on discussion of aflatoxin contamination and control measures in peanut planting field.

KeywordsPeanut;Mould;Bacterialflora

花生是我國(guó)重要的食、油兩用經(jīng)濟(jì)作物和傳統(tǒng)的大宗出口農(nóng)產(chǎn)品，對(duì)提高農(nóng)民收入、推動(dòng)農(nóng)村發(fā)展和平衡我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易逆差具有重要意義[1]。但近年來，我國(guó)出口花生頻繁被歐盟、日本等國(guó)家通報(bào)黃曲霉毒素超標(biāo)，黃曲霉毒素超標(biāo)是目前我國(guó)花生出口中存在的主要質(zhì)量問題[2]。黃曲霉菌的生長(zhǎng)和黃曲霉毒素的產(chǎn)生有2個(gè)重要影響因素：溫度和濕度，只要條件合適，花生在生長(zhǎng)、收獲、加工、倉(cāng)儲(chǔ)和運(yùn)輸?shù)热魏我粋€(gè)環(huán)節(jié)都可能被黃曲霉菌侵染，并有可能產(chǎn)生黃曲霉毒素?；ㄉa(chǎn)地普查結(jié)果表明，花生存在產(chǎn)地黃曲霉毒素田間污染的情況，青島部分地區(qū)在花生收獲時(shí)就有部分花生被黃曲霉毒素污染[3]。

山東是全國(guó)花生的主產(chǎn)區(qū)，出口花生數(shù)量占全國(guó)90%以上，為了了解山東地區(qū)種植花生的土壤及剛收獲的花生果的霉菌污染情況，筆者對(duì)山東省3個(gè)花生主產(chǎn)區(qū)：日照、青島和臨沂種植花生的田間土壤和剛收獲的花生果進(jìn)行了調(diào)查研究，重點(diǎn)對(duì)產(chǎn)毒霉菌，特別是黃曲霉進(jìn)行了分析，對(duì)于探討花生種植地黃曲霉毒素污染以及采取預(yù)防措施具有重要意義。

1材料與方法

1.1樣品來源在山東省日照、青島和臨沂3個(gè)市的9個(gè)地區(qū)東港、莒縣中樓鎮(zhèn)、五蓮、嵐山、萊西、膠州、沂水、蘭山和莒南，分5個(gè)時(shí)間段，根據(jù)分層兩級(jí)隨機(jī)抽樣方法，共采集19種土壤樣品。同時(shí)，在土壤取樣地取新鮮收獲的花生果作為花生樣品。

1.2霉菌分離方法以無(wú)菌手段稱取25g樣品，置于無(wú)菌均質(zhì)袋中，加入225ml緩沖蛋白胨水(BPW)，用均質(zhì)器充分均質(zhì)，所得混合液即為1∶10稀釋液。制備YGC-D培養(yǎng)基平板(規(guī)格：140mm×15mm)備用，繼續(xù)作10倍稀釋，選擇適宜稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，每稀釋度每種樣品3個(gè)平皿，每皿500μl作涂布培養(yǎng)，28 ℃至第3、5、7天各記錄一次結(jié)果，在菌落數(shù)為在30～100的稀釋度選擇單菌落分離之。

1.3霉菌分類鑒定根據(jù)霉菌在培養(yǎng)基上的菌落特征和鏡下形態(tài)作鑒定，對(duì)在原培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d后仍未產(chǎn)生孢子的菌落及未鑒定菌落轉(zhuǎn)接馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)仍無(wú)孢子產(chǎn)生和未鑒定者劃入未鑒定菌株，除曲霉和青霉屬全部鑒定到種外，其他鑒定到種或?qū)佟?/p>

2結(jié)果與分析

2.13個(gè)地區(qū)黏土霉菌菌相分布情況日照、青島和臨沂3個(gè)地區(qū)黏土中霉菌的菌相十分豐富，但是產(chǎn)毒霉菌相對(duì)含量較少，見表1。從2014年8月11日到9月12日，霉菌分離的菌相逐漸增多，而隨后有所減少。

2.23個(gè)地區(qū)沙土霉菌菌相分布情況日照、青島和臨沂3個(gè)地區(qū)沙土中霉菌的菌相情況與黏土相類似，隨時(shí)間的變化也大致相同，見表2?？傮w上沙土菌相明顯少于黏土。

2.33個(gè)地區(qū)黏土地花生果霉菌菌相分布情況日照、青島和臨沂3個(gè)地區(qū)黏土產(chǎn)花生果霉菌菌相情況與黏土土壤類似，只是菌相比土壤要少很多，產(chǎn)毒霉菌也相應(yīng)減少，見表3。說明花生果的霉菌污染情況比土壤要低。

表1　3個(gè)地區(qū)黏土霉菌菌相分布情況

表2　3個(gè)地區(qū)黏土霉菌菌相分布情況

表3　3個(gè)地區(qū)黏土產(chǎn)花生果霉菌菌相分布情況

2.4日照、青島和臨沂3個(gè)地區(qū)沙土地花生果霉菌菌相分布情況日照、青島和臨沂沙土產(chǎn)花生果霉菌菌相情況與沙土土壤類似，只是菌相比土壤要少很多，產(chǎn)毒霉菌也相應(yīng)減少，見表4。

2.5青島、臨沂、日照3個(gè)地區(qū)檢出霉菌菌相情況各地土壤和花生中分離出的霉菌種類相似，只是含量多少有所區(qū)別，主要有：曲霉屬、青霉屬和其他屬，優(yōu)勢(shì)菌種如表5所示。

2.6青島、臨沂、日照3個(gè)地區(qū)檢出產(chǎn)毒霉菌菌相情況為了對(duì)產(chǎn)生黃曲霉毒素霉菌作進(jìn)一步的研究，將國(guó)標(biāo)和世界各國(guó)普遍關(guān)注的產(chǎn)毒霉菌檢出和比率情況列出分析，見表6。

表4　3個(gè)地區(qū)沙土產(chǎn)花生果霉菌菌相分布情況

表5　青島、臨沂、日照3個(gè)地區(qū)檢出霉菌菌相情況

表6　青島、臨沂、日照3個(gè)地區(qū)產(chǎn)毒霉菌菌相分布

3討論

土壤真菌是土壤微生物的重要組成部分，對(duì)土壤生態(tài)系統(tǒng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化和能量流動(dòng)具有十分重要的作用，有關(guān)土壤真菌群落的研究已有大量報(bào)道[4]?；ㄉ寥朗且粋€(gè)復(fù)雜的、動(dòng)態(tài)的有機(jī)整體，容易受到各種自然和人為因素的影響，土壤的理化性質(zhì)，生育期的不同，氣候及其他因素均會(huì)引起土壤真菌的種類和數(shù)量發(fā)生變化。因此，對(duì)花生土壤真菌進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析，對(duì)于探討花生種植地黃曲霉毒素污染以及采取預(yù)防措施具有重要意義。

3.13個(gè)地區(qū)土壤霉菌菌相的分布該研究表明，各地區(qū)不同類型的土壤中，廣泛地分布著各類霉菌的代表屬、種。地帶不同、土質(zhì)不同的土壤中，霉菌區(qū)系存在一定的差別。該研究的幾種土壤霉菌檢出率均為100.0%，菌相也十分豐富。3個(gè)地區(qū)的霉菌菌相略有差別，日照和青島地區(qū)比臨沂稍多一些。青島地區(qū)膠州的菌相比萊西的要豐富，但是產(chǎn)毒霉菌的菌相差別不大。沙土霉菌菌相均小于黏土，這可能由于沙土比黏土的透氣性和透水性都好，相對(duì)水分含量低的情況下，不利于霉菌的生長(zhǎng)繁殖。這在其他研究中也有類似報(bào)道，多數(shù)研究表明，黏土中霉菌類型較多。

并非所有土壤霉菌都能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而且相當(dāng)一部分霉菌在人工培養(yǎng)基條件下不產(chǎn)生繁殖結(jié)構(gòu)或子實(shí)體，或繼代培養(yǎng)后喪失產(chǎn)孢能力，故有些土壤霉菌還不能完全分離；而且該研究還有部分霉菌種類尚待進(jìn)一步鑒定[5]。因

此，雖然該研究基本上明確了山東花生主產(chǎn)區(qū)土壤霉菌的種類和數(shù)量，但還不能完全顯示其土壤真菌的多樣性，還有待于深入研究。

3.23個(gè)地區(qū)花生果霉菌菌相的分布該研究對(duì)花生果霉菌菌相進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，各種土壤所產(chǎn)花生果的霉菌菌相均少于單純土壤，并且產(chǎn)毒霉菌數(shù)也相對(duì)減少。說明花生果在土壤中并不一定感染土壤中所帶的所有霉菌，并且自身可能也有一定的防御作用。一般花生直接食用的部位是花生仁，花生仁在花生殼包裹之下可以極大地減少霉菌對(duì)花生仁的侵染。此外調(diào)查結(jié)果表明，黏土產(chǎn)花生果菌相顯著多于沙土產(chǎn)花生果，這個(gè)結(jié)果與土壤菌相檢測(cè)結(jié)果相符。

3.33個(gè)地區(qū)霉菌菌相優(yōu)勢(shì)種分析3個(gè)地區(qū)霉菌的優(yōu)勢(shì)菌種都是青霉，曲霉次之，其他霉菌種類繁多，比較復(fù)雜。這可能與該研究選擇的分離培養(yǎng)基有關(guān)。不同的霉菌培養(yǎng)基：YGC-D、孟加拉紅、PDA、察氏培養(yǎng)基等對(duì)霉菌的不同屬種的培養(yǎng)效果不完全相同，有的適合曲霉(如孟加拉紅)，有的適合青霉(如YGC-D)，所以該研究的研究結(jié)果不能完全代表自然界的環(huán)境狀況，如要定性要做深入的研究。

3.43個(gè)地區(qū)產(chǎn)毒霉菌菌相分析該研究結(jié)果表明，山東花生主產(chǎn)區(qū)3個(gè)地區(qū)的產(chǎn)毒霉菌污染情況很低，且最受世界食品安全關(guān)注的黃曲霉檢出率很低，只檢出3株，其中青島檢出2株，臨沂檢出1株，說明山東花生主產(chǎn)區(qū)的花生生長(zhǎng)土壤環(huán)境很好，有利于花生安全生產(chǎn)的實(shí)現(xiàn)。但是值得注意的是，曲霉、黃曲霉菌相分布低，并不意味著花生本身就不會(huì)被黃曲霉菌侵染，更不能認(rèn)定花生不會(huì)受黃曲霉毒素污染，花生在種植、收獲、晾曬、加工、貯存、運(yùn)輸?shù)冗^程中都可能遭受產(chǎn)毒霉菌的侵染，花生采收后的相關(guān)流程的霉菌菌相調(diào)查更加重要，更多的工作仍需進(jìn)行。

該研究結(jié)果表明，山東花生在種植地中遭受黃曲霉等產(chǎn)毒菌的侵染概率較低，不同產(chǎn)地花生黃曲霉毒素污染水平可能與花生在收獲、晾曬、貯存等環(huán)節(jié)有關(guān)，加強(qiáng)這些環(huán)節(jié)的控制有助于降低花生中黃曲霉毒素的污染。

參考文獻(xiàn)

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