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北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院暨北京市腫瘤防治研究所1乳腺腫瘤內(nèi)科，2淋巴腫瘤內(nèi)科，惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制及轉(zhuǎn)化研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100142

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是導(dǎo)致患者死亡的主要原因[1]。當(dāng)腫瘤局限在乳腺中時(shí)，其治愈率超過90%；而當(dāng)癌細(xì)胞發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移后，其5年生存率低于30%[2]。晚期乳腺癌的治療是以化療為主的綜合治療，而一線化療的有效率為30%～50%，二線化療的有效率則更低[3]。因此，如何提高化療的有效率是臨床治療成功的關(guān)鍵。隨著分子生物學(xué)及病理學(xué)的進(jìn)展，化療相關(guān)預(yù)測及預(yù)后因子的研究已成為熱點(diǎn)。

microRNA（miRNA）是一類長度為20～24個(gè)核苷酸的具有調(diào)控功能的非編碼RNA。其主要功能是對編碼mRNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)，其中大多數(shù)的miRNA可通過與靶基因mRNA的3'端非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR）的完全或不完全的互補(bǔ)結(jié)合而降解mRNA或抑制mRNA的表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖、凋亡和分化。近年來，miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，以及與預(yù)后和藥物敏感性的研究均有一定的報(bào)道，這提示miRNA可能為腫瘤耐藥機(jī)制的研究提供了新的思路。自Lawire等[4]首次在人血清中分離出miRNA后，多項(xiàng)研究已經(jīng)證實(shí)：miRNA分子廣泛存在于血清和血漿中，并且隨著生理狀況、疾病的種類和病程的不同，miRNA分子在血清和血漿中存在的種類和表達(dá)水平將發(fā)生變化。且晚期乳腺癌患者組織標(biāo)本獲取困難，這為血清或血漿miRNA作為疾病無創(chuàng)診斷和預(yù)后的分子標(biāo)志物提供了可能[5-6]。

本研究擬通過檢測復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者各血漿 miRNA（包括血漿miR-16、miR-34a、miR-200a、miR-375、miR-451）的化療前、后的表達(dá)水平，探討血漿中miR-16、miR-34a、miR-200a、miR-375、miR-451化療前、后表達(dá)水平與乳腺癌臨床病理特征、化療療效及預(yù)后之間的關(guān)系，以為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

選取2009年6月至2013年12月在北京腫瘤醫(yī)院乳腺腫瘤內(nèi)科治療的79例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者，所有病例均經(jīng)術(shù)后組織或穿刺病理證實(shí)。美國東部腫瘤協(xié)作組（Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG）體能狀態(tài)評分為0～1分；患者中位年齡為54歲（30～81歲）；其中浸潤性導(dǎo)管癌有75例，浸潤性小葉癌有1例，其他類型有3例；免疫組化結(jié)果為雌激素受體（estrogen receptor，ER）呈陽性者有52例，呈陰性者為26例，1例不詳；孕激素受體（progestrogen receptor，PR）呈陽性者為45例，呈陰性者為33例，1例不詳；激素受體（hormone receptor，HR）陽性者（ER或PR有一項(xiàng)陽性或均為陽性）為57例，呈陰性者為21例，1例不詳；人類表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）呈陽性者為15例，呈陰性者為58例，6例不詳；手術(shù)時(shí)原位癌患者為1例，分期為Ⅰ期者為8例，Ⅱ期者為29例，Ⅲ期者為29例，Ⅳ期者為7例，另外有5例分期不詳；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者均經(jīng)影像學(xué)證實(shí)；無內(nèi)臟轉(zhuǎn)移者為26例，有內(nèi)臟轉(zhuǎn)移者為53例，其中肺轉(zhuǎn)移31例，肝轉(zhuǎn)移29例，骨轉(zhuǎn)移35例，淋巴轉(zhuǎn)移48例，胸壁復(fù)發(fā)18例，腦轉(zhuǎn)移3例，惡性胸腔積液17例，惡性心包積液7例，骨髓轉(zhuǎn)移1例，軟組織轉(zhuǎn)移1例，伴發(fā)宮頸癌1例。79例患者中2例患者化療線數(shù)不詳。本項(xiàng)目所有研究對象均簽署了關(guān)于在本研究中使用其血液樣本的知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 患者的治療和評估 所 有患者接受兩藥聯(lián)合方案：多西他賽75 mg/m2+塞替哌75 mg/m2，d1，每3周為一個(gè)周期，共6個(gè)周期。分別在2個(gè)周期、4個(gè)周期及6個(gè)周期后（4、6個(gè)周期后仍常規(guī)影像學(xué)評效檢查，但未抽取血樣）評其療效。應(yīng)用RESCIST標(biāo)準(zhǔn)評估患者對治療的反應(yīng)：完全緩解（complete response，CR）為所有目標(biāo)病灶完全消失；部分緩解（partial response，PR）為基線病灶長徑總和縮小≥30%；疾病進(jìn)展（progressive disease，PD）為基線病灶長徑總和增加≥20%或出現(xiàn)新的病灶；疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）為基線病灶長徑總和縮小但未達(dá)PR或增加未達(dá)PD。ORR=CR+PR，臨床獲益率（clinical benefit rate，CBR）=CR+PR+SD（維持時(shí)間大于3個(gè)月）。無進(jìn)展生存時(shí)間為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移后化療第1天至疾病進(jìn)展時(shí)間；總生存時(shí)間為化療第1天至患者死亡。

1.2..22血液標(biāo)本的收集和制備 分別采集患者化療前及2個(gè)周期后評價(jià)時(shí)的外周血4 ml，放置于含肝素的抗凝管中。在采集后2 h內(nèi)將外周血以2000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，分離成血漿和細(xì)胞成分，血漿儲存在－80℃冰箱內(nèi)備用。

1.2..33 qRT-PCR -PCR檢測 應(yīng)用PrimeScript?反轉(zhuǎn)錄試劑盒（購自于日本Takara Bio Inc公司）直接對血漿標(biāo)本進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。其中反轉(zhuǎn)錄混合反應(yīng)液如下：5×PrimeScript緩沖液 4 μl；Prime-Script反轉(zhuǎn)錄混合酶Ⅰ1μl；miR-16、miR-34a、miR-200a、miR-375、miR-451反轉(zhuǎn)錄引物各2 μl；血漿10μl；加DEPC水至總體積20μl。在PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)條件為25℃10 min，42℃30min，85℃ 5 min；反應(yīng)結(jié)束后，將合成的cDNA樣品用蒸餾水稀釋至100μl置于冰上待用或于－20℃下保存，然后進(jìn)行Real-time PCR反應(yīng)。miRNA反轉(zhuǎn)錄引物及PCR引物均購自廣州銳博生物科技有限公司。應(yīng)用ABI?900HT Fast型Real-Time PCR（購自美國Life technology公司）檢測系統(tǒng)。25 μl體系配制如下：miR-16、miR-34a、miR-200a、miR-375和miR-451正向和反向引物（10μM）各 1 μl；cDNA 產(chǎn)物1 μl；Taq DNA 聚合酶（5 U/μl）0.2 μl；10×Real-time PCR緩沖液3 μl；dNTP（10 μM）0.3μl；加水至總體積為25μl。進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，95℃下持續(xù)2 min使雙鏈DNA預(yù)變性，95℃下持續(xù)15 s使之變性，60℃下持續(xù)1 min進(jìn)行退火及延伸，以上為一個(gè)循環(huán)，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增。設(shè)定統(tǒng)一的Ct閾值分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取3次實(shí)驗(yàn)的平均值。由于血漿中缺乏有效的對照，本研究采用GenEx version6軟件、Normfinder軟件和Genorm軟件確定內(nèi)對照為miR-34a，且通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該對照在血漿中表達(dá)穩(wěn)定?；颊吒餮獫{miRNA相對表達(dá)水平均采用公式2-ΔCt計(jì)算，其中ΔCt=Ct目標(biāo)miRNA－Ct對照miRNA。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析，采用χ2檢 驗(yàn)比較患者 miR-16、miR-200a、miR-375 和miR-451化療前表達(dá)水平的變化與臨床病理特征、化療療效的關(guān)系。采用χ2檢驗(yàn)檢測患者各種臨床病理特征對臨床獲益的影響。采用多因素回歸分析方法分析單因素分析中對ORR有意義的因素。采用Kaplan-Meier分析和Cox多因素回歸分析檢測患者臨床病理特征及各血漿miRNA對于PFS及OS的影響。P值為雙向性檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 血漿miRNA化療前的表達(dá)水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)系

根據(jù)患者各血漿miRNA中位表達(dá)水平分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。血漿miR-16、miR-200a、miR-375和miR-451化療前的表達(dá)水平與患者臨床病理特征關(guān)系的分析結(jié)果顯示，化療前血漿miR-451的表達(dá)與患者ER或HR狀態(tài)顯著相關(guān)，miR-451高表達(dá)組的患者ER陽性率顯著高于低表達(dá)者，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.025），分別為78.9%和55.0%；miR-451高表達(dá)組的患者HR陽性率顯著高于低表達(dá)者，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.031），分別為84.2%和62.5%。

而其他血漿miRNA表達(dá)水平與其他臨床病理特征如患者年齡、PR狀態(tài)、HER2狀態(tài)、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移、臟器轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)及化療線數(shù)無顯著相關(guān)（表1）。

2.2 血漿miRNA化療前、后表達(dá)水平與患者化療療效及生存時(shí)間的關(guān)系

2 2..2.1血漿mi RNA化療前、后表達(dá)水平與患者化療療效的關(guān)系 血漿miR-16、miR-200a、miR-451高表達(dá)組的PR與低表達(dá)組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為 P=0.001，P=0.034，P=0.008；表2）；血漿miR-200a化療后表達(dá)水平降低組的PR與升高組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.037，表3）。CBR（＋）患者中，血漿miR-200a及miR-451高表達(dá)組與低表達(dá)組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P=0.002，表2）。ORR（＋）患者中，血漿miR-16高表達(dá)組與低表達(dá)組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.03，表2）；血漿miR-200a化療后表達(dá)水平降低組與升高組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.01，表3）。而其他臨床病理特征如患者年齡、ER狀態(tài)、PR狀態(tài)、HR狀態(tài)、HER2狀態(tài)、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移、臟器轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)、化療線數(shù)及血漿miR-375與化療療效、CBR、ORR均無顯著相關(guān)性（表4）。

進(jìn)一步將單因素分析中有顯著影響的miRNA進(jìn)行多因素分析發(fā)現(xiàn)，無miRNA表達(dá)水平與患者PR、CBR具有顯著相關(guān)性（P＞0.05）。其中，miR-200a化療后表達(dá)水平變化與ORR顯著相關(guān)（P=0.032），miR-200a化療后表達(dá)升高者的ORR顯著高于降低者，分別為57.9%和29.3%。

表1 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者各血漿miRNA化療前表達(dá)水平與患者臨床病理特征的關(guān)系（例）

2.2..2 2血漿mi RNA化療前、后表達(dá)水平與患者生存時(shí)間關(guān)系 miR-200a低表達(dá)組的PFS與高表達(dá)組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.038），分別為10.2個(gè)月和5.2個(gè)月（表2）；血漿miR-200a化療后表達(dá)水平升高組的PFS與降低組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.009），分別為10.3個(gè)月和5.2個(gè)月（表3）。miR-16、miR-375、miR-451表達(dá)水平及化療后變化對于患者PFS均無顯著影響（表2，表3）。進(jìn)一步行Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)miR-200a化療后變化顯著影響患者PFS（P=0.038，HR=2.016）。

miR-16、miR-200a、miR-375和miR-451表達(dá)水平及化療后變化對OS均無顯著影響（表2，表3）。而患者年齡、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移及化療線數(shù)均顯著影響患者OS（表4）。進(jìn)一步行COX回歸分析患者化療線數(shù)顯著影響患者OS（P=0.046，HR=1.903）。

3 討論

自Lawrie等[4]首次發(fā)現(xiàn)人血清中含有miRNA后，Chen等[6]和Mitchell等[7]幾乎同時(shí)報(bào)道了人血漿或血清中存在著穩(wěn)定的miRNA。Zhu等[8]在乳腺癌研究中發(fā)現(xiàn)癌組織與血清miRNA表達(dá)有顯著差異。李振鳳等[9]研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，miR-21和miR-222在乳腺癌患者血漿中的表達(dá)明顯升高，而miR-205在乳腺癌患者血漿中的表達(dá)明顯下降。且血漿miR-21的表達(dá)水平與ER和PR相關(guān)，血漿miR-222的表達(dá)水平則在不同的腫瘤分期中表現(xiàn)不同。Anfossi等[10]研究發(fā)現(xiàn)，血清miR-19a在轉(zhuǎn)移性炎性乳腺癌中呈顯著升高，還發(fā)現(xiàn)HER2陽性的炎性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中，血清miR-19a高表達(dá)者PFS和OS顯著延長。

表2 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者各血漿mi RNA表達(dá)水平與患者化療療效及生存時(shí)間的關(guān)系（例）

miRNA能夠被分泌到細(xì)胞外環(huán)境，并進(jìn)入血液和其他體液中高穩(wěn)定性循環(huán)。這種循環(huán)miRNA因其標(biāo)本易獲取，具有可多次取樣的優(yōu)點(diǎn)，所以得到了越來越多的研究者的關(guān)注。循環(huán)miRNA被包裹在外泌體（exosome）、微小體（microvesicle）或凋亡小體（apoptotic body）中，這些膜性結(jié)構(gòu)對miRNA起到了有效的保護(hù)作用[11-12]。另外，血液中某些蛋白分子或脂質(zhì)與miRNA的結(jié)合會使其具有抵抗RNase的能力[13]。因此，循環(huán)miRNA可以穩(wěn)定存在。而miRNA是如何從組織細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)中，目前還不十分明了。據(jù)推測[14]，miRNA可能會像其他物質(zhì)一樣從破碎的組織細(xì)胞或調(diào)亡細(xì)胞中被動漏出，也可能是由有病變的組織和細(xì)胞主動分泌進(jìn)入血液循環(huán)，而后者被認(rèn)為是主要方式。據(jù)報(bào)道[15]，在多種病理狀態(tài)下血液或其他體液中的一些miRNA的表達(dá)水平呈顯著升高或降低。以上說明了循環(huán)miRNA在腫瘤的研究中可以作為很好的研究對象，可為腫瘤的研究提供新的方法和思路[16-19]。

循環(huán)miRNA的研究尚存在一些問題。既往的報(bào)道[20]表明循環(huán)miRNA表達(dá)水平的相關(guān)結(jié)果可重復(fù)性差，這種不一致性也說明了循環(huán)miRNA研究的困難性，由于各個(gè)研究采用的標(biāo)本各異，檢測平臺的不同及內(nèi)參miRNA的差異均可能造成結(jié)果的差異。各研究中檢測的標(biāo)本包括血漿、血清和全血，血漿和血清miRNA的含量相當(dāng)，且血清的含量略高于血漿，而血清或血漿標(biāo)本也同樣可能會受到血細(xì)胞miRNA（包括miR-16、miR-150、miR-486-5p、let-7a、miR-574-3p、miR-223、miR-197、miR-451和miR-92a）的影響[21]；全血標(biāo)本則包含了更多血細(xì)胞miRNA。同時(shí)各個(gè)研究應(yīng)用的miRNA芯片、第二代DNA測序、定量PCR方法的不同也可能會造成結(jié)果的差異。而內(nèi)參的選擇也是循環(huán)miRNA定量的困難點(diǎn)，各個(gè)研究中miRNA在循環(huán)中的不穩(wěn)定表達(dá)則造成了內(nèi)參的選擇各異。本研究中應(yīng)用GenEx version 6軟件并運(yùn)行Normfinder和Genorm軟件后發(fā)現(xiàn)，相對表達(dá)穩(wěn)定可作為內(nèi)對照的為miR-34a。miR-16在既往的多項(xiàng)研究中都作為內(nèi)對照，因此，本研究中也將其納入了檢測[22]。本研究中，miR-16在各個(gè)樣本中表達(dá)差異大，并不適合作內(nèi)參基因。且既往研究[23-25]表明，miR-16在白血病、垂體瘤、前列腺癌、肺癌及頭頸部腫瘤等多種腫瘤中存在異常表達(dá)，其調(diào)控的基因主要參與細(xì)胞周期的調(diào)控，包括Cyclin D1、Cyclin E、Bclˉ2等[26-28]。而本研究中，miR-16表達(dá)水平高低與化療療效顯著相關(guān)，miR-16低表達(dá)患者療效較好；但并未發(fā)現(xiàn)miR-16表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系。

表3 3發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者各血漿miRNA化療后表達(dá)水平變化與患者化療療效及生存時(shí)間的關(guān)系（例）

miR-451在正常胃黏膜中表達(dá)明顯高于在胃癌組織中的表達(dá)[29]。在頭頸部鱗癌中的研究[30]發(fā)現(xiàn)，miR-451在術(shù)后無復(fù)發(fā)的患者中表達(dá)較復(fù)發(fā)患者高。同樣，miR-451在低侵襲性的MCF-7乳腺癌細(xì)胞系的表達(dá)較MDB-231等高侵襲性細(xì)胞系中的表達(dá)高[31]。這些研究表明，miR-451在正常組織中發(fā)揮重要作用，而在病情進(jìn)展時(shí)則出現(xiàn)表達(dá)水平下調(diào)。本研究中也發(fā)現(xiàn)miR-451高表達(dá)組的患者傾向于ER或HR表達(dá)陽性（p＜0.05），而既往細(xì)胞系的研究并未發(fā)現(xiàn)miR-451與ER具有調(diào)控關(guān)系[32]，由于本研究未進(jìn)行下一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，尚不能證明miR-451與ER是否存在調(diào)控關(guān)系。在各血漿miRNA化療前表達(dá)水平與患者化療療效的相關(guān)分析中發(fā)現(xiàn)，miR-451低表達(dá)組的PR與高表達(dá)組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008），高表達(dá)組的CBR與低表達(dá)組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002），而ORR兩組無顯著差異。這可能與腫瘤惡性程度低，患者化療的CBR較高有關(guān)。Zhu等[33]的研究也證明了這一點(diǎn)，miR-451在多藥耐藥細(xì)胞系A(chǔ)2780DX5和KB-V1較敏感細(xì)胞系A(chǔ)2780和KB-3-1中顯著上調(diào)，而拮抗miR-451后P-糖蛋白和多藥耐藥蛋白MDR1顯著下降，從而逆轉(zhuǎn)耐藥。

目前的研究[34]表明，miRNA在乳腺癌耐藥及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。癌細(xì)胞在上皮間質(zhì)化過程中獲得了間質(zhì)特性，容易從原位腫瘤中遷移，從而導(dǎo)致腫瘤浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[35]。在乳腺癌中，EMT與乳腺癌干細(xì)胞、三陰表型及基底樣細(xì)胞緊密相關(guān)，也與TGF-β1、Wnt和Notch信號通路相關(guān)，并且與Snail、Slug、Twist和ZEB1/2等轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控相關(guān)[36]。miR-375在EMT中的作用尚不十分明確，Ward等[37]研究發(fā)現(xiàn)他莫西芬耐藥的MCF-7細(xì)胞系中過表達(dá)miR-375可以使細(xì)胞系重新獲得上皮樣特征，這表明miR-375在EMT中具有重要作用。本研究也未發(fā)現(xiàn)miR-375表達(dá)水平與化療療效及生存時(shí)間具有相關(guān)性。

miR-200家族包括 miR-200a、miR-200b、miR-429、miR-200c和miR-141，這5個(gè)成員分為2個(gè)組群，分別位于1號及12號染色體上。miR-200家族參與EMT的調(diào)控，乳腺癌細(xì)胞系中的相關(guān)研究表明，miR-200可通過下調(diào)ZEB1和ZEDB2以抑制鈣黏附蛋白 E（E-cadherin）的轉(zhuǎn)錄[38-39]。miR-200c在乳腺癌干細(xì)胞中通過抑制BMI-1的表達(dá)，從而抑制干細(xì)胞的自我更新，并造成乳腺癌干細(xì)胞體外擴(kuò)增的下降。Hu等[40]報(bào)道卵巢癌miR-200a高表達(dá)患者會出現(xiàn)預(yù)后不良，且高表達(dá)者的中位生存時(shí)間顯著短于低表達(dá)者的，分別為27.5個(gè)月和61個(gè)月。而在乳腺癌的相關(guān)研究[41]中發(fā)現(xiàn)，miR-200a與患者淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，是影響預(yù)后的重要因素。而化生性乳腺癌患者，miR-200a高表達(dá)患者，表型為三陰性的患者及HER2陽性乳腺癌患者較ER陽性患者表達(dá)明顯降低，這些均表明miR-200家族與EMT及乳腺癌亞型相關(guān)[42]。EMT與腫瘤細(xì)胞耐藥性的獲得密切相關(guān)，EMT可以被抗腫瘤藥物、放療或低氧條件誘導(dǎo)發(fā)生，間質(zhì)表型的腫瘤細(xì)胞比上皮表型的腫瘤細(xì)胞更容易獲得耐藥性。本研究中發(fā)現(xiàn)血漿miR-200a化療后表達(dá)水平降低組的PR與升高組相比，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.034），而且化療后表達(dá)變化同樣會顯著影響患者的化療療效（P=0.037），化療后表達(dá)升高組ORR顯著高于降低組（P=0.01）。而進(jìn)一步多因素分析發(fā)現(xiàn)，miR-200a化療后升高患者ORR仍顯著高于降低者（P=0.032）。在生存時(shí)間的分析中發(fā)現(xiàn)，miR-200a化療前低表達(dá)組PFS較高表達(dá)組顯著延長（P=0.038），分別為10.2個(gè)月和5.2個(gè)月。miR-200a化療后表達(dá)變化顯著影響患者PFS（P=0.009），化療后表達(dá)升高組PFS和降低組分別為10.3個(gè)月和5.2個(gè)月?；熀髆iR-200a表達(dá)升高者可能與化療后間質(zhì)性質(zhì)的癌細(xì)胞死亡相關(guān)，從而出現(xiàn)很好的療效及生存獲益率。

表4 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者臨床病理特征與患者化療療效及生存時(shí)間的相關(guān)性的P P值

綜上所述，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌血漿miRNA化療前、后表達(dá)水平對復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者臨床病理特征、化療療效及預(yù)后有一定預(yù)測價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)提示血漿中的miRNA可能為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的診斷和治療開辟了一類新的血液腫瘤標(biāo)志物，有助于判斷復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌臨床病理特征、療效及預(yù)后，更加準(zhǔn)確的結(jié)果還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量及進(jìn)行前瞻性的研究來證實(shí)。

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