邵 萌 王啟瑞 范 欽 孫學(xué)剛 蔡紅兵
(南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院,廣州 51 051 5)
露蜂房的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展※
邵 萌 王啟瑞 范 欽 孫學(xué)剛 蔡紅兵*
(南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院,廣州 51 051 5)
露蜂房作為我國(guó)傳統(tǒng)藥物,臨床主要用于治療腫瘤、殺蟲及多種炎癥。露蜂房的化學(xué)成分以酚酸類、二苯基庚烷類和萜類為主;藥理活性主要體現(xiàn)在抗腫瘤和抗菌等方面。本文通過查閱近十年來的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn),對(duì)露蜂房的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)行總結(jié)。
露蜂房;化學(xué)成分;藥理作用
露蜂房Polistes mandarinus Saussure (Nidus Vespae),又稱蜂房、蜂腸、紫金沙、百穿,為胡蜂科昆蟲果馬蜂Polistes olivaceous、日本長(zhǎng)腳胡蜂P.japonica Saussure或異腹胡蜂P.varia Fabricius的巢。露蜂房藥用歷史悠久,早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載,其性平味甘,歸胃經(jīng),具有消腫散結(jié)、攻毒殺蟲的功效,臨床上多用于治療瘡瘍腫毒、乳癰、牙痛、瘰疬等癥[1,2]。作為動(dòng)物類藥材,露蜂房化學(xué)成分復(fù)雜,以蜂蠟、蜂膠和蜂房油為主,還含有色素、糖類、有機(jī)酸、脂肪酸和昆蟲激素等微量成分。近年來通過系統(tǒng)的化學(xué)成分分離,得到酚酸、二苯基庚烷、萜類及黃酮等多種單體成分;藥理學(xué)研究表明其具有明顯的抗腫瘤、抑菌、抗炎等作用。本文對(duì)露蜂房的化學(xué)成分和藥理活性研究進(jìn)行綜述,以便進(jìn)一步展開對(duì)該種藥物資源的開發(fā)和利用。
露蜂房中化學(xué)成分復(fù)雜多樣,迄今分到的化合物類型有酚酸類、二苯基庚烷類、萜類、含氮類、黃酮類及酯類等[3-7]。
1.1 酚酸和有機(jī)酸類 從露蜂房中得到的多為簡(jiǎn)單酚酸類化合物,分別為對(duì)苯二酚 (1),2-甲氧基對(duì)苯二酚 (2),3-ethoxy-5-methylbenzene-1,2-diol(3),茴香醛 (4),苯甲酸 (5),對(duì)羥基苯甲酸 (6),原兒茶酸(7),atraric acid (8),對(duì)甲氧基苯乙酸 (9),酪醇(10),對(duì)二氫肉桂醇 (11),咖啡酸 (12),異阿魏酸(13),阿魏酸 (14)和3,4-二羥基桂皮酸 (15) (圖1)。
圖1 露蜂房中的酚酸類化合物
1.2 二苯基庚烷類 二苯基庚烷類化合物是露蜂房中較為特征的一類成分,文獻(xiàn)報(bào)道共有6個(gè),分別為centrolobol(16),蜂房酚B (17),hannokinol(18),4-[(5S)-5-Hydroxy-7-(4-hydroxyphenyl)heptyl]benzene-1, 2-diol (19),蜂房酚A (20)和muricarpone B (21) (圖2)。
圖2 露蜂房中的二苯基庚烷類化合物
1.3 萜類 露蜂房中發(fā)現(xiàn)了2個(gè)coriamyrtin型倍半萜成分fengfangin A(22)、tutin(23)和1個(gè)單萜成分vomifoliol(24) (圖3)。
圖3 露蜂房中的萜類化合物
1.4 含氮類成分 從露蜂房中分離得到的含氮類成分結(jié)構(gòu)多樣,主要有胸腺嘧啶 (25),胸腺嘧啶脫氧核苷(26),8-羥基-4-喹啉酮 (27),neoechinulin A (28),N-benzoyl-L-phenylalaninol(29),灰綠曲霉酰胺 (30),2β, 3α-4-乙?;?7-[(2-乙酰氨基)乙基]-3-羥基-2-(3,4-二羥基苯并噁嗪) (31)和 (2R, 3S)-2-(3',4'-dihydroxyphenyl)-3-acetylamino-7-hydroxyethyl-1,4-benzodioxane (32) (圖4)。
圖4 露蜂房中的含氮類化合物
1.5 酯類成分 從露蜂房中分離得到4個(gè)酯類化合物,鄰苯二甲酸雙 (2'-乙基己基)酯 (33),鄰苯二甲酸雙異丁基酯 (34),癸二酸雙 (2'-乙基己基)酯 (35)和二十三烷酸甲酯 (36) (圖5)。
圖5 露蜂房中的酯類化合物
1.6 其它成分 除以上幾類化合物外,還分得alnusone (37),甘油 (38),clemaphenol A (39),烏蘇酸 (40),山柰酚 (41)、蘆丁 (42)、十六烷酸 (43)和β-谷甾醇(44)等成分。
范家佑[8]等通過GC-MS技術(shù)分析了露蜂房中的揮發(fā)性物質(zhì),共分離出68種化合物,鑒定出其中的28個(gè)。其揮發(fā)性成分主要為烴類化合物、高級(jí)脂肪酸及酯類化合物。烴類化合物占檢出成分的71.43%,高級(jí)脂肪酸及酯類化合物占檢出成分的25.0%,其中二十八烷的含量高達(dá)8.94%。
從露蜂房的抗炎活性有效部分純化得到2個(gè)酸性蛋白NV-PP-1和NV-PP-4[9-10],通過親水型分子排阻HPLC測(cè)定分子量分別為7.079和8.711 KD,毛細(xì)管等電聚焦電泳測(cè)定等電點(diǎn)為4.08和1.79, 氨基酸分析表明NV-PP-1含有近56個(gè)氨基酸殘基,其中Gly、Ser和Glu較多,NV-PP-4含有87個(gè)氨基酸殘基,以Gly、Asp、Pro和Glu含量較多。
2.1 抗腫瘤作用 露蜂房的抗腫瘤研究主要集中在幾種露蜂房蛋白對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的作用上。汪長(zhǎng)東[11]等從露蜂房中分到一個(gè)分子量為6.6KD的蛋白質(zhì)NVP(1)。將NVP(1)作用于HepG2細(xì)胞,通過細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮檢測(cè)發(fā)現(xiàn),NVP(1)可使HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡,該作用出現(xiàn)在細(xì)胞周期G1期,此過程抑制了cyclin B,cyclin D1,cyclin E mRNA和cdk2蛋白質(zhì)的表達(dá),并增加了p27和p21蛋白的表達(dá)。將HepG2細(xì)胞提前用ERK的特異性抑制劑處理后,p-ERK蛋白表達(dá)量明顯降低,提示NVP(l)抑制HepG2細(xì)胞增殖可能通過激活ERK信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。將此蛋白作用于大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞,觀察到細(xì)胞的增殖抑制同樣出現(xiàn)在細(xì)胞周期G1期,提示NVP(1)可能是一種能夠有效抑制細(xì)胞增殖的蛋白[12]。
在露蜂房蛋白對(duì)白血病細(xì)胞增殖影響的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)露蜂房蛋白NVP-Ⅱ作用顯著。將該蛋白作用于人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞[13-14]和急性髓系白血病 (AML)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞BMMNC[15]后,這二種細(xì)胞均出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)量減少、增值減弱及明顯的細(xì)胞凋亡特征。免疫組化顯示腫瘤細(xì)胞中的NF-κB、β-catenin表達(dá)降低,在細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)減少,iNOS的表達(dá)也降低。再將一系列蛋白NVP1-4作用于K562細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)NVPs蛋白均能抑制K562細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡,caspase-3表達(dá)明顯增加[16-18]。動(dòng)物在體研究發(fā)現(xiàn)[19-21],露蜂房蛋白NVP具有明顯誘導(dǎo)紅白血病小鼠脾組織和骨髓中白血病細(xì)胞凋亡的作用,并呈劑量依賴關(guān)系,NVP作用下的腫瘤細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)降低,Bax蛋白表達(dá)升高。
除露蜂房蛋白外,其有機(jī)溶劑提取物也表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤作用。賈愛明[22]等采用露蜂房水提醇沉后的上清提取物開展對(duì)H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究。結(jié)果顯示,腹水瘤小鼠生存期明顯延長(zhǎng),高劑量組對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率為38.06%,Histone H1表達(dá)增加,cyclin B1表達(dá)降低。其抑瘤作用機(jī)制可能是通過下調(diào)cyclin B1,影響Cdc2-cyclin B1激酶,阻斷Histone H1磷酸化,從而影響細(xì)胞從G2期進(jìn)入M期得以實(shí)現(xiàn)。張坤[23]等將露蜂房的甲醇提取物作用于人胃腺癌SGC7901細(xì)胞,口腔上皮癌KB細(xì)胞,人宮頸癌Hela細(xì)胞,人非小細(xì)胞肺癌H460細(xì)胞和人肝癌HepG2細(xì)胞上,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,露蜂房甲醇提取物對(duì)五種腫瘤細(xì)胞均具有生長(zhǎng)抑制作用,并存在一定的時(shí)效和量效關(guān)系。
2.2 抗菌作用 體外抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,露蜂房的乙醇提取物及多個(gè)萃取部位對(duì)口腔變形鏈球菌[24]、內(nèi)氏放線菌、粘性放線菌[25]、乳酸桿菌和金黃色葡萄球菌[26,27]的生長(zhǎng)、產(chǎn)酸均有一定的抑制作用,并顯示出抗糖基轉(zhuǎn)移酶、抗粘附和抗生物膜形成的作用,對(duì)變形鏈球菌和血鏈球菌能夠產(chǎn)生水不溶性葡聚糖。露蜂房中的單體成分槲皮素和山柰酚對(duì)6種細(xì)菌 (變形鏈球菌、茸毛鏈球菌、血鏈球菌、粘性放線菌、內(nèi)氏放線菌和鼠李糖乳桿菌)也表現(xiàn)出顯著的抑制作用,最小抑菌濃度在1~4 mg/ml間,最小殺菌濃度在4~16 mg/ml間[28]。在生物膜模型上,露蜂房提取物顯示有較強(qiáng)的抑齲能力,與蔗糖組相比,輕磷灰石片上生物膜黏附的細(xì)菌量顯著減少,提示露蜂房乙醇提取物對(duì)菌斑的致齲化轉(zhuǎn)變有一定抑制作用[29]。此外,莊愛文[30]等發(fā)現(xiàn)蜂房醇提物能逆轉(zhuǎn)銅綠假單胞菌的耐藥性。在蜂房醇提物作用于耐藥菌5天后,耐藥基因TEM和OXA-10的mRNA表達(dá)由陽(yáng)性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?,提示其逆轉(zhuǎn)機(jī)理可能與抑制耐藥基因表達(dá)有關(guān)。
2.3 其它作用 向淋巴細(xì)胞胰島混合培養(yǎng)系統(tǒng)中加入不同濃度的露蜂房水提液,發(fā)現(xiàn)其對(duì)胰島刺激淋巴細(xì)胞激活轉(zhuǎn)化呈濃度依賴性抑制。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,露蜂房有與氫化可的松相似的作用機(jī)理,推測(cè)露蜂房可能是通過抑制炎性介質(zhì),進(jìn)而阻礙抗原遞呈細(xì)胞對(duì)抗原的處理,干擾淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原,阻斷淋巴母細(xì)胞的增殖,從而發(fā)揮免疫抑制功能[31]。
采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型,研究露蜂房水提物的抗炎活性。在濃度為2 mg/ml時(shí),腫脹抑制率達(dá)32.45%,且抑制率呈濃度依賴關(guān)系[32]。
Ahn[33]等人在對(duì)28種動(dòng)物藥的不同提取物進(jìn)行溶栓和抗凝活性評(píng)價(jià)中發(fā)現(xiàn),包括露蜂房在內(nèi)的六種藥材的水提物表現(xiàn)出了顯著地血栓溶酶樣作用,但甲醇和乙酸乙酯提取物都沒有表現(xiàn)出類似效果。
露蜂房作為臨床上的常用中藥,藥用歷史悠久,對(duì)腫瘤及多種炎癥表現(xiàn)出顯著的治療效果。近十年來,針對(duì)露蜂房化學(xué)成分和藥理活性展開了一系列的研究工作,分離得到包括黃酮類、酚酸類、二苯基庚烷類和萜類等化合物,藥理活性研究主要集中在在抗腫瘤、抗菌和免疫抑制等方面。但總體來說,化學(xué)成分和藥理活性的研究還有待深入,露蜂房的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥理活性作用機(jī)制的研究尚不清楚,仍需開展大量的基礎(chǔ)性工作。今后有必要從化學(xué)單體分離、結(jié)構(gòu)鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和指紋圖譜研究、藥理活性及作用機(jī)制等方面展開系統(tǒng)研究,為露蜂房今后的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:249.
[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典·下冊(cè)[S].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1997: 2737.
[3]王偉.蜂房化學(xué)成分研究[D].沈陽(yáng):沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文,2007.
[4]王偉,趙慶春,安曄,等.中藥蜂房的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)藥物化學(xué)雜志,2008,18(1):54-55,63.
[5]何江波,劉光明,程永現(xiàn).蜂房化學(xué)成分研究[J].中草藥,2011,42(10):1905-1908.
[6]何江波.三味中藥的化學(xué)成分研究[D].大理:大理學(xué)院碩士學(xué)位論文,2010.
[7]He J B,Yan Y M,Ma X J,etal.Sesquiterpenoids and diarylheptanoids from Nidus Vespae and their inhibitory effects on nitric oxide production [J].Chemistry&Biodiversity,2011,8:2270-2276.
[8]范家佑,郁建平.露蜂房揮發(fā)性化學(xué)成分分析[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào),2010,29 (4):368-370.
[9]李琳,柳雪枚.露峰房抗炎蛋白中多肽成分的分離、純化及性質(zhì)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,1999,34(4):233-236.
[10]徐偉,肖宣,柳雪枚.中藥露蜂房水溶性蛋白NV-PP-4的分離純化及部分理化性質(zhì)鑒定[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,2000,18(5):284-285.
[11]Wang CD,Chen P,Jin H J,etal.Nidus vespae protein inhibiting proliferation of HepG2 hepatoma cells through extracellular signal-regulated kinase signal ing pathways and inducing G1 cell cycle arrest[J].Acta Biochim Biophys Sin,2008:970-978.
[12]汪長(zhǎng)東,陳鵬,閆旭,等.露蜂房蛋白抑制大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞體外增殖的可能機(jī)制[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,29(7):683-687.
[13]時(shí)彥,張圣明,張雪莉,等.露蜂房純化蛋白對(duì)人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,29(2):111-113.
[14]時(shí)彥,張連雙,趙偉,等.露蜂房純化蛋白對(duì)白血病細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響的研究[J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,32(3):177-180.
[15]時(shí)彥,張圣明,張雪莉,等.露蜂房純化蛋白對(duì)急性髓系白血病患者骨髓細(xì)胞的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2007,23(5):685-687.
[16]王峻清,張圣明,鄭志娟.露蜂房蛋白體外誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制[J].山東醫(yī)藥,2007,47(17):13-15.
[17]辛先貴,張圣明,時(shí)彥,等.中藥露蜂房蛋白對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞增殖的影響[J].解剖學(xué)報(bào),2006,37(1):74-78.
[18]荊旭波,辛先貴.中藥露蜂房蛋白對(duì)人紅白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué),2005,6(12):6-9.
[19]張雪莉,張圣明,王強(qiáng),等.露蜂房蛋白對(duì)紅白血病小鼠脾和骨髓的超微結(jié)構(gòu)的影響[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,30(4):345-346.
[20]張雪莉,張圣明,時(shí)彥,等.MTT比色法檢測(cè)露蜂房蛋白對(duì)白血病細(xì)胞增殖的影響[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2008,21(2):161-162.
[21]張雪莉,張圣明,劉江月.中藥露蜂房蛋白對(duì)紅白血病小鼠脾組織中Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,30(1):58-60.
[22]賈愛明,胡文梅,張紅,等.露蜂房提取物對(duì)H22肝癌小鼠防治作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,7(12):1045-1047.
[23]張坤,魏金榮,關(guān)一夫.蜂房提取物中抗腫瘤成分的活性研究[J].中醫(yī)雜志,2010,51:246-248.
[24]黃正蔚,肖悅,劉天佳,等.蜂房粗提物對(duì)致齲菌影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海口腔醫(yī)學(xué),2002,11(1):50-52.
[25]肖悅,劉天佳,黃正蔚,等.天然藥物對(duì)粘性放線菌生長(zhǎng)和產(chǎn)酸影響的體外研究[J].華西醫(yī)大學(xué)報(bào),2002,33(2):253-255.
[26]Xiao J,Zhou X D,F(xiàn)eng J,et al.Activity of Nidus Vespae extractand chemicalfractions against Streptococcus mutans biofilms[J].Letters in Applied Microbi ology,2007,45:547-552.
[27]Xiao J,Zuo Y L,Liu Y,et al.Effects of Nidus Vespae extract and chemical fractions on glucosyltransferases,adherence and biofilm formation of Streptococcus mutans[J].Archives oforalbiology,2007,52:869-875.
[28]Guan XX,Zhou Y,Liang X,etal.Effectsofcompounds found in Nidus Vespae on the growth and cariogenic virulence factors of Streptococcus mutans[J]. Microbiological Research,2012,167:61-68.
[29]左渝陵.天然藥物防齲的物質(zhì)基礎(chǔ)研究——蜂房防齲有效成分的化學(xué)研究[D].成都:四川大學(xué)博士學(xué)位論文,2005.
[30]莊愛文,饒芳,劉文洪,等.蜂房醇提物逆轉(zhuǎn)銅綠假單胞菌耐藥性的研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2011,18(2):123-124.
[31]吳德全,陳明,黃躍南,等.露蜂房對(duì)淋巴細(xì)胞與胰島混合培養(yǎng)系統(tǒng)中淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響[J].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2007,14(2):168-170.
[32]程茂盛,據(jù)大偉,吳虹,等.意蜂老巢脾與露蜂房抗炎活性研究[J].2011,62:43-45.
[33]Ahn MY,Hahn B S,Ryu K S,etal.Effects of insectcrude drugs on blood coagulation and fibrinolysis system [J].Natural Product Science,2002,8(2): 66-70.
Research Progress in Chemical Constituents of Nidus Vespae and Their Pharmacological Activities
SHAOMeng, GONGXianling,WANGQirui, FAN Qin, CAI Hongbing, SUN Xuegang
(Collegeof traditionalmedicine, southernmedical university, Guangzhou 510515, China)
Nidus Vespae as traditional Chinese medicine has long been mainly used in clinical treatment of cancer,inflammation and a variety of pesticides.Nidus Vespae exposed to the chemical composition of phenolic acids,diphenyl heptanes and terpenes,and is active mainly in areas such as anti-tumor and anti-bacterial pharmacologically.In this paper,a review of the literature over the past decade,the chemical composition and pharmacological effects of Nidus Vespae summarize.
Nidus Vespae;chemical constituents;pharmacologicalactivities
10.3969/j.issn.1672-2779.2015.04.084
1672-2779(2015)-04-0157-03
張文娟 本文校對(duì):湯慶發(fā)
2014-11-04)
國(guó)家自然科學(xué)基金(No:81202430);廣州市科技計(jì)劃(No:2014J2200092)
*通訊作者:sm326111@sina.com