李正學(xué)

B淋巴細(xì)胞刺激因子對慢性特發(fā)性蕁麻疹患者產(chǎn)生抗Fcε RI抗體和抗IgE抗體的影響

李正學(xué)①

目的：探討慢性特發(fā)性蕁麻疹患者血清B淋巴細(xì)胞刺激因子（BlyS）對抗IgE抗體和抗FcεRI抗體的影響。方法：選取慢性特發(fā)性蕁麻疹患者100例作為疾病組，選取同期體檢健康者100例作為健康組。檢測兩組受試者血清BlyS、抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平；分離培養(yǎng)疾病組患者外周血中的B淋巴細(xì)胞，分為兩份保存，在其中一份培養(yǎng)液中加入有效水平的BlyS，檢測抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平，作為試驗組，將另一份作為空白對照組。分析血清BlyS與抗IgE抗體及抗FcεRI抗體之間的關(guān)系。結(jié)果：疾病組血清BlyS、抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平明顯高于健康組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。試驗組培養(yǎng)液中抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；試驗組中抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平與BlyS呈正相關(guān)（r=0.765、0.722，P＜0.05）。結(jié)論：慢性特發(fā)性蕁麻疹患者血清BlyS可刺激B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗IgE抗體和抗FcεRI抗體，這可能與慢性特發(fā)性蕁麻疹的發(fā)病機制有關(guān)。

慢性特發(fā)性蕁麻疹； 免疫反應(yīng)； B淋巴細(xì)胞刺激因子； 抗IgE抗體； 抗FcεRI抗體

慢性蕁麻疹（Chronic urticaria，CU）是一種常見的皮膚病，由各種因素致使皮膚黏膜血管發(fā)生暫時性炎性充血與大量液體滲出，造成局部水腫性的損害。慢性特發(fā)性蕁麻疹（Chronic idiopathic urticaria，ICU）是病因和發(fā)病機制不明的慢性蕁麻疹。研究發(fā)現(xiàn)，ICU屬于自身免疫性蕁麻疹，患者體內(nèi)存在抗IgE抗體和抗高親和力IgE受體（FcεRI）抗體是其發(fā)生的重要原因。B淋巴細(xì)胞刺激因子（B lymphocyte stimulator，BlyS）一種重要的腫瘤壞死因子（TNF）超家族成員，能夠特異性地刺激B淋巴細(xì)胞增殖分化，在不需抗原的條件下產(chǎn)生抗體，有報道稱BlyS水平升高ICU患者癥狀加重，原因可能與其刺激B淋巴細(xì)胞生成抗IgE抗體和抗FcεRI抗體有關(guān)。本研究分析ICU患者血清BlyS與抗IgE抗體和抗FcεRI抗體的關(guān)系，旨在了解血清BlyS能否刺激B淋巴細(xì)胞生成抗IgE抗體和抗FcεRI抗體，導(dǎo)致ICU發(fā)病，希望能為明確ICU患者發(fā)病機制提供一定的幫助，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取慢性特發(fā)性蕁麻疹患者100例作為疾病組，其中男64例，女36例；年齡24～64歲，平均（45.82±13.29）歲；病程1.2～8.6個月，平均（4.73±3.22）個月。選取同期體檢健康者100例作為健康組，其中男61例，女39例；年齡27～70歲，平均（46.64±14.93）歲。兩組在性別、年齡方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）ICU診斷符合《皮膚病學(xué)》相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）自體血清皮膚試驗陽性；（3）風(fēng)團反復(fù)發(fā)作，病程超過6周；（4）過敏性特異性IgE檢測陰性；（5）既往無哮喘、特應(yīng)性皮炎、鼻炎等過敏性疾病及自身免疫性疾病史；（6）入選前1個月未使用糖皮質(zhì)激素，1個周內(nèi)未使用抗組胺藥物者。排除標(biāo)準(zhǔn)：蕁麻疹性血管炎、皮膚劃痕癥、遺傳血管性水腫、膽堿能性蕁麻疹、藥物或感染等引起的蕁麻疹及其他能找到過敏源和物理因素等確切病因的蕁麻疹。

1.2 方法 抽取所有受試者空腹肘靜脈血10 mL，置于不加抗凝劑的試管內(nèi)，室溫靜置15 min，以3000 r/min高速離心15 min，取上層血清，置于-30 ℃的冰箱中待測。（1）采用溫控全自動定量酶標(biāo)儀（奧地利Anthos公司型號：ZA23-Zenyth 340ST），以酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法測定血清BlyS、抗IgE抗體、抗FcεRI抗體，試劑盒由美國強生公司提供，按說明書進(jìn)行操作。（2）疾病組患者中取新鮮抗凝血2 mL，采用密度梯度離心法和尼龍毛柱法分離提取外周血中的B淋巴細(xì)胞。將分離提取的B淋巴細(xì)胞計數(shù)后，接種于含小牛血清的培養(yǎng)基中，置于37 ℃的CO2培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)72 h，待細(xì)胞增長至對數(shù)生長期，取第4～6代細(xì)胞，分為兩份，一份中分別加入濃度為2、4、6、8 ng/mL的BlyS（美國強生公司），作為試驗組；另一份中不加BlyS作為空白對照組，檢測培養(yǎng)液中抗IgE抗體和抗FcεRI抗體的水平（試劑盒由美國強生公司提供）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0版統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，計量資料采用（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 疾病組和健康組血清BlyS、抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平比較 疾病組血清BlyS、抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平明顯高于健康組，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 疾病組和健康組血清BlyS、抗IgE抗體及抗Fcε RI抗體比較（±s）

表1 疾病組和健康組血清BlyS、抗IgE抗體及抗Fcε RI抗體比較（±s）

抗FcεRI抗體（IU/mL）疾病組（n=100）3.76±0.69113.45±12.425.11±1.19健康組（n=100）0.68±0.1442.43±5.391.23±0.78 t值2.3272.9512.579 P值0.0210.0190.018組別Blys（ng/mL）抗IgE抗體（IU/mL）

2.2 試驗組和對照組B細(xì)胞培養(yǎng)液中抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平比較 加入BlyS后，試驗組培養(yǎng)液中抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平明顯高于空白對照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；試驗組中抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平與BlyS呈正相關(guān)（r=0.765、0.722，P＜0.05），見表2～3。

表2 加入不同濃度BlyS后兩組B細(xì)胞培養(yǎng)液中抗IgE抗體水平比較（±s）

表2 加入不同濃度BlyS后兩組B細(xì)胞培養(yǎng)液中抗IgE抗體水平比較（±s）

組別2 ng/mL4 ng/mL6 ng/mL8 ng/mL試驗組（n=100）1.16±0.351.38±0.461.86±0.642.26±0.76對照組（n=100）0.64±0.140.63±0.150.64±0.150.49±0.14 t值2.1732.2692.5772.890 P值0.0430.0370.0320.026

表3 加入不同濃度BlyS后兩組B細(xì)胞培養(yǎng)液中抗Fcε RI抗體水平比較（±s）

表3 加入不同濃度BlyS后兩組B細(xì)胞培養(yǎng)液中抗Fcε RI抗體水平比較（±s）

組別2 ng/mL4 ng/mL6 ng/mL8 ng/mL試驗組（n=100）1.04±0.251.23±0.321.45±0.471.74±0.56對照組（n=100）0.54±0.140.56±0.150.54±0.170.53±0.15 t值2.2682.3522.5152.734 P值0.0410.0360.0320.024

3 討論

BLyS屬腫瘤壞死因子（TNF）家族，是Shu等學(xué)者首先發(fā)現(xiàn)并克隆的一種新的細(xì)胞因子，隨后多位學(xué)者對BLyS進(jìn)行了進(jìn)一步的研究[5]。BLyS主要由嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，其作為一種B淋巴細(xì)胞的刺激因子，能專一地刺激B細(xì)胞增殖分化，在維持生發(fā)中心B細(xì)胞的增殖和抗原特異性IgM的分泌，調(diào)控機體免疫應(yīng)答中起著重要的作用，研究發(fā)現(xiàn)其在體內(nèi)的過量表達(dá)與自身免疫性疾病關(guān)系密切[6]。Maraso?lu等[7]研究發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和紅斑狼瘡患者血清BLyS水平明顯高于健康對照組人群，并且相關(guān)免疫指標(biāo)和病情與BLyS水平相關(guān)。

CIU的發(fā)病機制目前尚未完全明確。盡管CIU與急性蕁麻疹（AU）在臨床表現(xiàn)上非常相似，但是兩者的發(fā)病機制完全不同[8]。AU是由IgE介導(dǎo)的一種Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)；而CIU卻是一種自身免疫性疾病[10]。Morgan等[11]報道CIU的發(fā)病主要與體內(nèi)自身抗體引起的自身免疫反應(yīng)有關(guān)，如甲狀腺抗體、抗HP抗體、抗IgE抗體及抗FcεRI抗體，尤其與后兩種自身抗體關(guān)系密切。B淋巴細(xì)胞在自身抗體和自身免疫反應(yīng)的產(chǎn)生中起著關(guān)鍵作用，而BLyS能刺激B細(xì)胞增殖分化，其與B細(xì)胞表面的成熟分子結(jié)合，通過激活激酶和磷酸化酶誘導(dǎo)活化的B細(xì)胞增殖分化成漿細(xì)胞并分泌各型抗體[12]。Magen等[13]報道BLyS可能對CIU患者體內(nèi)的抗IgE抗體及抗FcεRI抗體的產(chǎn)生具有一定的影響。Sun等[14]認(rèn)為CIU患者體內(nèi)可能存在針對IgE受體的記憶性B細(xì)胞，其在高水平BLyS刺激下產(chǎn)生抗IgE抗體及抗FcεRI抗體可能是導(dǎo)致CIU遷延難治的重要原因。本研究通過體內(nèi)和體外實驗分析CIU患者BLyS與抗IgE抗體及抗FcεRI抗體的關(guān)系，探討B(tài)LyS在CIU發(fā)病中的作用。筆者分別抽取100例CIU患者和100例健康人群的靜脈血，分離血清后進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示：CIU患者血清BLyS、抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平明顯高于健康人群，并且血清BLyS水平越高，血清抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平越高，血清BLyS水平分別于血清抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平呈正相關(guān)；在體外實驗中筆者分離培養(yǎng)CIU患者外周血中的B淋巴細(xì)胞，分別加入不同濃度的BLyS后檢測抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平，結(jié)果顯示：加入BLyS的B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中的抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平明顯高于沒有加BLyS的空白對照組，并且隨著加入BLyS濃度的升高，抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平也不斷升高，BLyS濃度分別與抗IgE抗體及抗FcεRI抗體水平呈正相關(guān)。以上結(jié)果提示：BLyS能夠刺激CIU患者體內(nèi)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗IgE抗體及抗FcεRI抗體，并且兩種自身抗體的產(chǎn)生與BLyS水平有關(guān)。

綜上所述，BLyS與CIU發(fā)病機制中起著重要作用，與其通過刺激B淋巴細(xì)胞參與抗IgE抗體及抗FcεRI抗體等自身抗體的產(chǎn)生有關(guān)，以BLyS為靶點的藥物研發(fā)可能為難治性CIU提供新的有效治療手段。

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The Affect of the Serum B Lymphocytes Stimulating Factor（BlyS） on the Anti-IgE Antibody and Anti-Fcε RI Antibody of the Patients with Chronic Idiopathic Urticaria/

LI Zheng-xue.//Medical Innovation of China，2015，12（11）：032-034

Objective：To investigate the affect of the serum B lymphocytes stimulating factor（BlyS） on the anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibody of the patients with chronic idiopathic urticaria. Method： 100 cases of patients with chronic idiopathic urticaria were selected as disease group， 100 cases of healthy people in the same period were selected as the healthy group. The serum level of the BlyS， anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibodies were detected；the B lymphocytes from the peripheral blood of the disease group patients were isolated and cultured， and divided into two shares， add BlyS in one share as the experimental group，another share as blank control group，the level of the anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibodies were detected. The relationship among the BlyS，anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibodies were analyzed. Result：The serum levels of the BlyS，anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibodies of the disease group were significantly higher than the healthy group，the differences had statistical significance （P＜0.05）. The levels of the BlyS，anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibody of the experimental group were significantly higher than the control group， the differences had statistical significance（P＜0.05）. The levels of the anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibodies of the experimental group were positively correlated with the BlyS （r=0.765，0.722，P＜0.05）. Conclusion：BlyS can stimulate B lymphocytes to produce the anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibodies of patients with chronic idiopathic urticaria， this may be related to the pathogenesis of chronic idiopathic urticaria.

Chronic idiopathic urticaria； Immune response； B lymphocyte stimulating factor； Anti-IgE antibody； Anti-FcεRI antibody

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.11.011

2014-12-16） （本文編輯：周亞杰）

①日照市衛(wèi)生學(xué)校 山東 日照 276826

李正學(xué)

First-author’s address：Rizhao City Health School，Rizhao 276826，China