淦 蓓

NF-κ B與早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期的相關(guān)性研究

淦 蓓①

目的：研究早發(fā)型（孕周＜32周）及晚發(fā)型（孕周≥32周）子癇前期患者胎盤(pán)中NF-κB的活性強(qiáng)度。方法：選擇子癇前期患者40例，其中早發(fā)型患者20例為早發(fā)型子癇前期組，晚發(fā)型患者20例為晚發(fā)型子癇前期組；正常足月妊娠孕婦30例為對(duì)照組。用免疫組化法觀(guān)察各組胎盤(pán)NF-κBp65的分布和活性強(qiáng)度的差異。結(jié)果：子癇前期組胎盤(pán)NF-κBp65染色均較正常組明顯增強(qiáng)，且早發(fā)型組較晚發(fā)型組染色明顯增強(qiáng)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：早發(fā)型和晚發(fā)型子癇前期患者胎盤(pán)NF-κB活化增多，活性增強(qiáng)，及其所參與的免疫炎癥反應(yīng)，可能與其發(fā)病機(jī)制相關(guān)。

早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期； 核因子–κB； 胎盤(pán)

子癇前期是妊娠期特有并發(fā)癥，嚴(yán)重影響母嬰健康，基本病理變化是全身小血管痙攣，內(nèi)皮細(xì)胞損傷及局部缺血，至今病因不明，因該病在胎盤(pán)娩出后常很快緩解或自愈，有學(xué)者稱(chēng)之為“胎盤(pán)病”[1]。故近年來(lái)圍繞子癇前期胎盤(pán)病理的研究逐漸展開(kāi)。目前，“炎癥免疫過(guò)度激活”病因?qū)W說(shuō)為多數(shù)學(xué)者認(rèn)可。NF-κB是機(jī)體內(nèi)重要的應(yīng)激反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子，在免疫炎癥等一系列反應(yīng)中扮演著重要的角色。本研究通過(guò)檢測(cè)早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期患者胎盤(pán)組織中NF–κB的表達(dá)，探討其在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年8月-2013年10月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科分娩的孕產(chǎn)婦共70例，分為20例早發(fā)型子癇前期組（early-onset preeclampsia），20例晚發(fā)型子癇前期組（late-onset preeclampsia）（診斷標(biāo)準(zhǔn)參照人衛(wèi)版《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版），30例同期在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科分娩的正常孕婦為對(duì)照組（所有研究對(duì)象均無(wú)其他內(nèi)外科合并癥及并發(fā)癥）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 胎盤(pán)娩出后取胎盤(pán)母體面1.0 cm× 1.0 cm×1.0 cm實(shí)質(zhì)組織，10％福爾馬林固定，24 h后脫水、透明、浸蠟、切片、編號(hào)保存。

1.2.2 免疫組織SP法 一抗為鼠抗人單克隆抗體NF-κBp65濃縮液，使用PV-9000試劑盒和DAB顯色（均購(gòu)于北京中杉生物技術(shù)公司），按試劑說(shuō)明書(shū)操作，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判定 采用Image8000彩色圖像分析儀進(jìn)行圖象采集分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（40倍），以陽(yáng)性區(qū)進(jìn)行平均光密度分析，以平均值表示胎盤(pán)組織內(nèi)NF-κBp65的著色強(qiáng)度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)和方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胎盤(pán)NF-κBp65染色 胎盤(pán)中NF-κBp65主要表達(dá)于滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、少量間質(zhì)細(xì)胞胞漿及胞核內(nèi)。本研究用免疫組化結(jié)果顯示子癇前期患者胎盤(pán)絨毛血管及細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿、胞核NF-κBp65染色較正常妊娠胎盤(pán)組織明顯增強(qiáng)，且早發(fā)型組染色強(qiáng)于晚發(fā)型組，見(jiàn)圖1～3。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，見(jiàn)圖4。

圖1 正常對(duì)照組胎盤(pán)組織中NF-κ Bp65的表達(dá)

圖2 晚發(fā)型胎盤(pán)組織中NF-κ Bp65的表達(dá)

圖3 早發(fā)型胎盤(pán)組織中NF-κ Bp65的表達(dá)

圖4 PBS陰性對(duì)照

2.2 三組胎盤(pán)組織NF-κBp65著色強(qiáng)度比較 正常妊娠組、晚發(fā)型子癇前期組、早發(fā)型子癇前期組胎盤(pán)組織NF-κBp65著色強(qiáng)度分別為（112.670±18.593）、（230.006±26.381）、（364.529±19.546）。子癇前期胎盤(pán)NF-κBp65胞漿染色較正常組增強(qiáng)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；早發(fā)型子癇前期胎盤(pán)NF-κBp65表達(dá)較晚發(fā)型子癇前期增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

子癇前期（Preeclampsia）是妊娠期特有并發(fā)癥，在妊娠中的發(fā)病率為7％～10％，在我國(guó)的發(fā)病率為9.4％[2]。近年來(lái)早發(fā)型子癇前期由于發(fā)病早、距離足月為時(shí)較遠(yuǎn)，母體病情發(fā)展快、并發(fā)癥重、產(chǎn)后出血及腦血管意外發(fā)生率及病死率均增加，胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限、胎兒窘迫，新生兒孕周小、出生后并發(fā)癥多、存活率低成為產(chǎn)科醫(yī)生面臨的難題[3-5]。至今為止，本病的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。有學(xué)者提出子癇前期發(fā)病機(jī)制“兩階段”學(xué)說(shuō)，第一階段為臨床前期，即子宮螺旋動(dòng)脈滋養(yǎng)細(xì)胞重鑄障礙，導(dǎo)致胎盤(pán)缺血、缺氧，釋放多種胎盤(pán)因子；第二階段胎盤(pán)因子進(jìn)入母體血液循環(huán)，則促進(jìn)系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)的激活及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，引起子癇前期各種臨床癥狀[6-8]。

核因子-κB（Nuclear factor–kappaB，NF-κB）是重要的一種廣泛存在于組織和細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在機(jī)體的免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)等生理、病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用[9-11]。典型的NF-κB是由p50和p65亞基形成的異二聚體。p65是其活性亞基，在細(xì)胞靜止時(shí)，p65與IκBs結(jié)合位于細(xì)胞漿中，當(dāng)細(xì)胞接受外來(lái)刺激后，p65與IκBs解聚，活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，啟動(dòng)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄。故NF-κBp65免疫染色可反映NF-κB活性[12-13]。NF-κB可以誘導(dǎo)許多免疫炎癥反應(yīng)相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，在免疫炎癥反應(yīng)中起重要作用。目前發(fā)現(xiàn)多數(shù)免疫炎癥介質(zhì)基因均受NF-κB調(diào)控，如腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-6、極低密度脂蛋白等。而許多學(xué)者認(rèn)為子癇前期患者無(wú)論是母胎界面局部還是全身均存在著炎癥免疫反應(yīng)過(guò)度激活現(xiàn)象。最新的研究顯示，母胎界面局部處于主導(dǎo)地位的天然免疫系統(tǒng)在子癇前期發(fā)病機(jī)制中起重要作用，而TLR4（Toll樣受體4）/NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)在其中扮演著重要的角色[14]。胎兒是一個(gè)半移植物，成功的妊娠要求母體免疫系統(tǒng)對(duì)其充分耐受，現(xiàn)有的證據(jù)表明，子癇前期母體對(duì)胚胎免疫耐受降低，多種炎癥免疫介質(zhì)激活均可影響子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄，造成胎盤(pán)淺著床，進(jìn)而引起局部缺血及血管內(nèi)皮損傷[15-16]。

本研究用免疫組化結(jié)果顯示子癇前期患者胎盤(pán)絨毛血管及細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿、胞核NF-κBp65染色較正常妊娠胎盤(pán)組織明顯增強(qiáng)，且早發(fā)型組染色強(qiáng)于晚發(fā)型組。說(shuō)明子癇前期患者胎盤(pán)NF-κB活化強(qiáng)度與病情嚴(yán)重程度成正相關(guān)，提示NF-κB激活與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。探討其機(jī)制可能系子癇前期胎盤(pán)微小血管壁重構(gòu)、胎盤(pán)血管炎癥等病理過(guò)程與NF-κB的活化具有相關(guān)性：子癇前期胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞淺著床，導(dǎo)致胎盤(pán)長(zhǎng)期處于缺血缺氧狀態(tài)，缺血缺氧信號(hào)促使NF-κBp65亞基與IκBs解聚，胞漿內(nèi)NF-κB活化，進(jìn)而移動(dòng)至胞核內(nèi)啟動(dòng)其下游一系列免疫炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子-α、氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化物、極低密度脂蛋白、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、白細(xì)胞介素-6等的基因轉(zhuǎn)錄，使免疫炎癥過(guò)度激活，形成級(jí)聯(lián)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致胎兒-母體免疫平衡失調(diào)，從而依次引起子宮胎盤(pán)血管的發(fā)育受阻和免疫損傷，胎盤(pán)缺血，胎盤(pán)釋放血漿細(xì)胞毒性因子增加，全身程度不同的血管內(nèi)皮受損和多系統(tǒng)、多臟器的損傷，最終導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生。

綜上所述，NF-κB在子癇前期胎盤(pán)中的顯著激活，及其所形成的后續(xù)免疫炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，可能促進(jìn)子癇前期，特別是早發(fā)型子癇前期的病理發(fā)生與發(fā)展。真正揭示早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期與NF-κB的關(guān)系，還有待大量深入的研究。

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The Relationship Study of NF-κ B with Early-onset and Late-onset Preeclampsia

GAN Bei.//Medical Innovation of China，2015，12（07）：004-006

Objective： To explore the relationship of NF-κB in placenta with early-onset （gestational age ＜32 weeks）and late-onset（gestational age ≥32 weeks）preeclampsia. Method：40 PE women were selected and divided into early-onset PE group of 20 cases and late-onset PE group of 20 cases.The normal control group were 30 healthy normotensive pregnancy.Immunohistochemistry was employed to show the location distribution and quantity of NF-κBp65 in placenta of preeclampsia. Result：NF–κBp65 in placenta of preeclampsia was stronger expression than that of control group，and was stronger expression in early-onset preeclampsia than that in late-onset preeclampsia，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion： It suggests that NF–κB participate in the pathogenesis of preeclampsia.Increasing NF–κB activity in placenta induces the immune inflammatory reaction，which may be related to the etiology of early-onset and late-onset preeclampsia.

Early-onset and late-onset preeclampsia； NF–κB； Placenta

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.07.002

2014-11-10） （本文編輯：周亞杰）

①福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 福建 福州 350005

淦蓓

First-author’s address：The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University，F(xiàn)uzhou 350005，China