扎木則仁,魏文平,吳騰,其布勒哈斯,常建軍,趙桂榮

（內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司質(zhì)量安全管理系統(tǒng)中心實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特011517）

0 引言

甜蜜素（Sodium Cyclamate），化學(xué)名稱為環(huán)己基胺基磺酸鈉,分子式為C6H12NNaO3S，是一種人工合成的食品添加劑[1]。甜蜜素易溶于水，在光、熱、空氣中穩(wěn)定，是一種高甜度、無(wú)熱值、安全衛(wèi)生，并能代替蔗糖的新型食品添加劑[2]。甜蜜素甜度約為蔗糖的30～50倍，風(fēng)味較自然，后苦不明顯，熱穩(wěn)定性高，是不被人體吸收的低熱能甜味劑[3]。目前乳制品產(chǎn)品多樣化，純牛奶、乳飲料等蛋白含量高的樣品在前處理過程中容易乳化導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定，而國(guó)標(biāo)方法只適用于果汁飲料、蜜餞類樣品，國(guó)標(biāo)方法無(wú)法滿足乳制品中甜蜜素檢測(cè)。本研究在國(guó)標(biāo)方法的基礎(chǔ)上，加入亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白，避免提取過程中產(chǎn)生的乳化現(xiàn)象，提高了方法的精密度和準(zhǔn)確度。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料與試劑

本實(shí)驗(yàn)所使用的樣品均為市場(chǎng)上購(gòu)買；環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品：DR.Ehrenstorfer純度99.0%、正己烷色譜純，其他藥品均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

硫酸水溶液質(zhì)量濃度100 g/L，亞硝酸鈉水溶液質(zhì)量濃度50 g/L，亞鐵氰化鉀水溶液質(zhì)量濃度92 g/L，乙酸鋅水溶液質(zhì)量濃度183 g/L

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜儀：VARIAN GC-450,氫火焰離子化檢測(cè)器。

氣相毛細(xì)管色譜柱：VF-1ms（30 m,0.32 mm,0.25 um）。

IKATM MS 3 basic旋渦混和器，Heal Toledo離心機(jī)，MettlerToldeo XP205萬(wàn)分之一電子天平。

1.3 測(cè)定方法

樣品用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅水溶液沉淀蛋白，冰水中用硫酸和亞硝酸鈉水溶液衍生，正己烷提取樣品中的甜蜜素；氣相毛細(xì)管色譜柱分析，外標(biāo)法定量[5]。

1.4 方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.25 g（精確至0.0001 g），25.00 mL容量瓶中用水溶解定容至刻度。2～8℃冰箱內(nèi)保存2個(gè)月。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：使用前從標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中取0.1，0.2，0.4，0.8，1.6 mL至50 mL離心管中再加10 mL水，其他按照樣品預(yù)處理步驟進(jìn)行操作。

1.4.2 樣品預(yù)處理

稱取10.0 g（精確至0.0001 g）樣品到50 mL離心管中依次加1 mL亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液、5 mL水蝸旋5 min；再5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min。上清液轉(zhuǎn)移到另一個(gè)離心管中，沉淀物用5 mL水蝸旋溶解按上一步再提取一次合并上清液。

1.4.3 衍生及提取

上清液中依次加入5 mL亞硝酸鈉溶液和硫酸溶液，在冰水中衍生30 min每隔5 min搖一次；衍生完后取出冰水加10 mL正己烷上下?lián)u80次，如果要乳化現(xiàn)象的樣品進(jìn)行5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min自然分層的樣品不用離心，取上清液及時(shí)上機(jī)；甜蜜素衍生物易揮發(fā)不太穩(wěn)定[6]。

1.4.4 結(jié)果計(jì)算

外標(biāo)法定量，按下式進(jìn)行計(jì)算

式中：X為待測(cè)樣品環(huán)已基氨基磺酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（g/kg）；A為樣品測(cè)定液中環(huán)已基氨基磺酸鈉的質(zhì)量濃度（g/L）；V為樣品定容體積（mL）；f為樣液的稀釋因子；m為樣品稱量質(zhì)量（g）。

1.5 色譜條件

氣相毛細(xì)管色譜柱VF-1ms（30 m,0.32 mm,0.25 um）或同等性能的色譜柱。

進(jìn)樣口溫度260℃，檢測(cè)器溫度300℃。色譜柱程序升溫步驟：初始溫度50℃保持1 min再10℃/min到120℃保持3 min；分流比20∶1，載氣流速2.0 mL/min，進(jìn)樣量1.00 L。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同極性色譜柱對(duì)比

儀器參數(shù)相同的條件下選擇VF-1和VF-5不同極性的色譜柱進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖1和圖2所示。由圖可以看出，VF-5的色譜柱有明顯的拖尾現(xiàn)象，VF-1的色譜柱峰型比較好，因此本研究選擇VF-1的色譜柱。

圖1 甜蜜素VF-1 0.4 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品色譜

圖2 甜蜜素VF-5 0.4g/L標(biāo)準(zhǔn)品色譜

2.2 準(zhǔn)確度和精密度

在純牛奶、乳飲料樣品中加入4個(gè)濃度水平的甜蜜素進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，回收率范圍在82.37%～109.15%之間、RSD范圍在2.43%～5.02%之間（K=6），如表1所示。

表1 不同樣品的準(zhǔn)確度和精密度分析

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

標(biāo)準(zhǔn)曲線質(zhì)量濃度點(diǎn)為：0.01，0.02，0.04，0.08，0.16 g/L，5個(gè)梯度質(zhì)量濃度點(diǎn)為橫坐標(biāo)相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)做一條曲線方程：Y=1.0246×105X-11.962，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2在0.9966～0.9992之間，表明線性良好，符合準(zhǔn)確度要求。

使用20次空白基質(zhì)樣品進(jìn)行檢出限驗(yàn)證（S/N＞3），檢出限計(jì)算公式為

XL=Xb+K×Sb，

式中：Xb為空白多次測(cè)得信號(hào)的平均值；Sb為空白多次測(cè)得信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差；K為根據(jù)一定置信水平確定的系數(shù)。

當(dāng)K=3時(shí)，XL對(duì)應(yīng)的樣品濃度即為90%置信度的方法檢出限（LOD90%）

按以上公式計(jì)算得到的檢出限為0.004 g/kg。

3 結(jié)論

本文建立了乳與乳制品中環(huán)已基氨基磺酸鈉的檢測(cè)，使用亞鐵氰化鉀水溶液和乙酸鋅水溶液沉淀蛋白減少乳化現(xiàn)象，不同極性色譜柱對(duì)比VF-1的毛細(xì)管色譜柱檢測(cè)樣品峰型比較好，回收率范圍在82.37%～109.15%之間、RSD范圍在2.43%～5.02%之間方法的精密度和準(zhǔn)確度比較好，此方法可以快速、高效、準(zhǔn)確檢測(cè)乳與乳制品中環(huán)已基氨基磺酸鈉的檢測(cè)，同時(shí)方法還可以擴(kuò)充到其他食品中甜蜜素的檢測(cè)。

[1]汪鐵軍,陳國(guó)烽.毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定果凍中甜蜜素[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào).2010（3）：208-210.

[2]張霞，王錫寧，張萍.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定含奶油類冰淇淋等樣品中甜蜜素[J].預(yù)防學(xué)論壇2010（16）：248-250.

[3]魯秋宏，曹葉中.食品中甜蜜素檢測(cè)方法改進(jìn)[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技.2010（1）：62-63.

[4]許冬云，謝宏斌，李芳，等HP-5毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定甜蜜素的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010（20）：1036-1037

[5]曹祥英.氣相色譜法測(cè)蛋白飲料中甜蜜素的試樣前處理方法探討[J].科技資訊，2007（4）：35-36.

[6]GB/T5009.97-2003食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉檢測(cè)方法[S].