朱燕 謝麗 ，2 楊覓 ，2 任偉 ，2 胡靜 ，2 胡文靜 ，2 錢曉萍 ，2# 劉寶瑞 ，2

1南京中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院，南京210008

2南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院腫瘤中心，南京210008

傳統(tǒng)中醫(yī)中藥用于腫瘤治療的原則主要有扶正和祛邪兩方面，其中清熱解毒法是最重要的祛邪手段之一。重樓為清熱解毒類中藥，具有清熱解毒、涼肝定驚、消腫止痛等功效，被廣泛用于抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、止咳平喘等治療中。在中醫(yī)復(fù)方中，重樓組方治療腫瘤的歷史已經(jīng)有幾千年，且主要治療惡性腫瘤的熱證和實(shí)證。

現(xiàn)代研究證實(shí)，重樓對(duì)肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、直腸癌、腎癌、胰腺癌、前列腺癌和宮頸癌等多種實(shí)體瘤均有一定的抑制作用[1]。RPTS是重樓抗腫瘤的主要有效成分，可采用水提和醇提兩種方法提取。Sun等[2]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)重樓醇提物比水提物的抗腫瘤作用更強(qiáng)。孫治國(guó)等[3]報(bào)道，醇提較水提的重樓總皂苷得出率更高，且70%乙醇提取總皂苷的得出率最高。本文對(duì)重樓醇提物及醇提物主要抗腫瘤成分RPTS在體內(nèi)外的抗腫瘤作用予以分析并總結(jié)如下。

1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是大多數(shù)抗腫瘤藥物最主要的作用機(jī)制。細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡，是由細(xì)胞內(nèi)特定基因激活、表達(dá)、調(diào)控的一種細(xì)胞自主性、有序性的死亡方式[4]。重樓醇提物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制包括阻滯腫瘤細(xì)胞增殖周期、影響細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)、影響癌基因和抑癌基因的表達(dá)等幾個(gè)方面。

1.1 阻滯腫瘤細(xì)胞增殖周期

腫瘤細(xì)胞的增殖都需要經(jīng)歷DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）和有絲分裂期（M期）4個(gè)不同的時(shí)期。重樓醇提物能夠作用于腫瘤細(xì)胞增殖周期，使其增殖周期受阻，從而誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。Qian等[5]的體外實(shí)驗(yàn)探究了重樓醇提物抗腫瘤作用的機(jī)制，結(jié)果顯示重樓醇提物能顯著抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，將血管內(nèi)皮細(xì)胞周期阻滯于G0～G1期。李晞等[6]通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，重樓醇提物作用于人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后，細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死，可見(jiàn)大量細(xì)胞壞死凋亡碎片；流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，SW480細(xì)胞在S期的分布比例下降，在G0～G1期和G2/M期的分布比例增高，表明重樓醇提物可能是通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)與DNA的合成、抑制腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，來(lái)實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。

1.2 影響細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)

細(xì)胞內(nèi)外存在著多種類、多途徑的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)途徑。caspase-3是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的關(guān)鍵激酶，caspase-3活性的改變直接影響到細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生[7-8]。江皓等[9]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅰ能抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖，并能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與重樓皂苷Ⅰ降低PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白表達(dá)、增加Bax及caspase-3蛋白表達(dá)有關(guān)。范軍強(qiáng)[10]認(rèn)為，重樓皂苷Ⅰ誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞A549的凋亡可能是通過(guò)多種信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)基因的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這些基因表達(dá)水平的綜合作用決定著腫瘤細(xì)胞的凋亡與否。蛋白印跡法結(jié)果提示重樓皂苷Ⅰ可以抑制AKT（蛋白激酶B）的磷酸化，從而誘導(dǎo)A549細(xì)胞的凋亡。將重樓皂苷Ⅰ作用于A549細(xì)胞后，利用RTPCR法檢測(cè)不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)p53、Gadd45、Gadd45a、JUN等基因表達(dá)的情況，結(jié)果顯示重樓皂苷Ⅰ可能通過(guò)P53/GADD45/JUN信號(hào)通路誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡。Gadd45a基因家族是DNA損傷修復(fù)相關(guān)的重要基因，在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著極其重要的作用。Gadd45a的表達(dá)可以影響細(xì)胞周期，Gadd45a高表達(dá)時(shí)，細(xì)胞被阻滯于G2/M期[11]。孫雨等[12]發(fā)現(xiàn)，呋喃唑酮可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2阻滯于S期，同時(shí)Gadd45a表達(dá)上調(diào)，磷酸化P38表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而抑制JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路。

1.3 影響癌基因和抑癌基因的表達(dá)

李濤[13]發(fā)現(xiàn)，通過(guò)下調(diào)VEGF、MDM2和NFˉκB/p65和上調(diào)p53基因的表達(dá)，重樓醇提物能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)其凋亡。有研究證實(shí)，血小板源性生長(zhǎng)因子B（platelet-derived growth factor B，PDGF-B）是原癌基因cˉsis的編碼產(chǎn)物，是一種重要的血管生成因子，能通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及新生血管的生成，來(lái)促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移[14]。張珂等[15]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，重樓醇提物組移植瘤組織中PDGF-B蛋白的表達(dá)水平顯著低于空白對(duì)照組（p＜0.01），結(jié)合重樓醇提物對(duì)人胃癌裸鼠移植瘤細(xì)胞的增殖能力存在明顯的抑制作用，研究者推測(cè)重樓醇提物可能顯著降低了胃癌細(xì)胞中PDGF-B蛋白的表達(dá)水平，并抑制其血管生成。

2 抑制腫瘤細(xì)胞增殖

腫瘤細(xì)胞增殖是腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖是抗腫瘤的重要手段之一。李晞等[6]采用MTT法證實(shí)，重樓醇提取液對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的增殖具有抑制作用，且其抑制作用具有時(shí)間依賴性和濃度依賴性。即，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，重樓醇提取液對(duì)SW480細(xì)胞增殖的抑制效果越來(lái)越明顯，存在量-效關(guān)系和時(shí)-效關(guān)系。此外，重樓醇提物還對(duì)肺癌、胃癌、肝癌等多種細(xì)胞株的增殖有一定的抑制作用[16-18]。

3 抗新生血管生成

新生血管可以為腫瘤的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧，為腫瘤細(xì)胞的快速增殖和轉(zhuǎn)移提供物質(zhì)基礎(chǔ)，所以抑制腫瘤組織中新生血管的形成可以抑制其生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。林云華等[19]發(fā)現(xiàn)：經(jīng)重樓醇提物作用后，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）可出現(xiàn)變圓、漂浮、數(shù)量減少等表現(xiàn)。重樓醇提物能夠明顯減少HUVEC遷移細(xì)胞的數(shù)量；重樓醇提物對(duì)雞胚絨毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用，能夠明顯減少新生血管的數(shù)目（p＜0.05）。可見(jiàn)，重樓醇提物在體外能有效抑制血管生成，其機(jī)制可能與抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移及管腔形成有關(guān)。胡靜等[20]用重樓醇提物對(duì)肝癌H22荷瘤小鼠進(jìn)行灌胃治療，10天后處死小鼠，觀測(cè)移植瘤微血管的密度，發(fā)現(xiàn)中、高劑量重樓醇提物能夠明顯抑制腫瘤組織微血管的密度，提示其有抗血管生成的作用。

4 調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能

Th1細(xì)胞亞群主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF-β三種細(xì)胞因子，均具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性及抗血管生成作用；而Th2細(xì)胞亞群主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子抑制免疫應(yīng)答。李春江[21]建立乳腺癌移植瘤裸鼠模型，通過(guò)灌胃途徑給予重樓醇提物，對(duì)比相應(yīng)各項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果顯示：與陰性對(duì)照組相比，重樓醇提物高、低劑量組荷瘤裸鼠的胸腺指數(shù)顯著升高（p＜0.01）；重樓醇提物處理組荷瘤裸鼠的TNF-α和IL-4水平顯著低于陰性對(duì)照組，IFN-γ表達(dá)水平顯著高于陰性對(duì)照組，這說(shuō)明荷瘤裸鼠經(jīng)重樓醇提物灌胃后，機(jī)體內(nèi)Thl/Th2平衡向Th1偏移，免疫應(yīng)答增強(qiáng)。

5 抑制耐藥細(xì)胞株

王震等[22]將重樓皂苷Ⅶ作用于對(duì)順鉑耐藥的人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅶ對(duì)該細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用，并呈明顯的濃度、時(shí)間相關(guān)性；與陰性對(duì)照組相比，重樓皂苷Ⅶ有明顯的促細(xì)胞凋亡作用；流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示重樓皂苷Ⅶ將對(duì)順鉑耐藥的人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞阻滯于G2期。

6 小結(jié)

綜上所述，中藥重樓及其有效成分RPTS在抗腫瘤方面發(fā)揮著極其重要的作用，主要通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等機(jī)制來(lái)發(fā)揮抗腫瘤作用，此外它還對(duì)耐藥細(xì)胞株起到一定的抑制作用。盡管關(guān)于重樓抗腫瘤機(jī)制方面的研究已經(jīng)取得了一定的成果，但其在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化機(jī)制方面的研究還有待進(jìn)一步深入探索。

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