辛春艷，付 浩，魏 通，李曉波，王綠林，王付省，赫亞歌，王朝陽，鄧立新

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州450002；2.拜耳（四川）動(dòng)物保健有限公司，四川 成都610225；3、汝州市畜牧局 汝州467500）

作為節(jié)糧型草食家畜，我國肉牛養(yǎng)殖正處于上升期。基于肉牛養(yǎng)殖的國情，“北繁南育”和“北牛南調(diào)”仍將頻繁發(fā)生。頻繁異地運(yùn)輸導(dǎo)致“肉牛運(yùn)輸應(yīng)激綜合征TSSBC”高發(fā)，造成較大經(jīng)濟(jì)損失［1］。目前國內(nèi)使用的肉牛運(yùn)輸車多為普通貨車改制而成，條件簡陋，這是導(dǎo)致TSSBC的重要原因之一。目前國內(nèi)關(guān)于肉牛專用運(yùn)輸車的研發(fā)很少。而外國的運(yùn)輸車價(jià)格較貴，亟需研發(fā)適合我國國情又實(shí)用的肉牛專用運(yùn)輸車。本團(tuán)隊(duì)研發(fā)的肉牛專用運(yùn)輸車，通過各項(xiàng)創(chuàng)新設(shè)施以期在運(yùn)輸工具環(huán)節(jié)降低運(yùn)輸應(yīng)激。為驗(yàn)證肉牛專用運(yùn)輸車降低運(yùn)輸應(yīng)激的效果，本試驗(yàn)通過比較專用車與普通車運(yùn)輸后肉牛血清中離子水平、外周血淋巴細(xì)胞中HSP90水平和運(yùn)輸后15天內(nèi)發(fā)病率以及增重情況，來驗(yàn)證肉牛專用運(yùn)輸車對(duì)TSSBC的實(shí)際防控效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

從吉林一肉牛交易市場(chǎng)選取體重、月齡相近的健康西門塔爾雜交架子公牛（約300kg），在當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)飼養(yǎng)并對(duì)牛群健康狀況觀察3天后，選取71頭參加長途運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

1.2.1 主要試劑 離子試劑，由北京松上技術(shù)有限公司生產(chǎn)；

牛淋巴細(xì)胞分離液（No.LTS－1086），由天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司生產(chǎn)；

牛熱休克蛋白90（HSP90）ELISA檢測(cè)試劑盒，武漢優(yōu)爾科技股份有限公司。

1.2.2 主要儀器設(shè)備

1.2.2.1 運(yùn)輸車輛 肉牛專用運(yùn)輸車1輛（長13 m，寬2.5m，高4.3m）。普通敞篷雙層肉牛運(yùn)輸車1輛（長13m，寬2.5m，高4m）。

1.2.2.2 儀器設(shè)備 IMS－972系列電解質(zhì)分析儀，由深圳市希萊恒醫(yī)用電子有限公司生產(chǎn)；

隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（Q／BKYY10－2000），上海躍進(jìn)醫(yī)療器械場(chǎng)；

分光光度計(jì)（1510－00473C），賽默飛世爾科技公司；

畜牧秤、離心機(jī)、注射器、抗凝采血管、體溫計(jì)、耳號(hào)鉗、牛用耳標(biāo)等。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

從專用車和普通車中各隨機(jī)選取6頭，標(biāo)記、編號(hào)后作為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 運(yùn)輸過程 在購牛前對(duì)所有牛觀察3d，常規(guī)飼養(yǎng)，飲水中添加抗應(yīng)激藥物。專用車和普通車裝牛后同時(shí)從吉林出發(fā)，經(jīng)2200多公里的同樣道路，歷時(shí)49h長途運(yùn)輸后同時(shí)到達(dá)長沙，途中禁食禁水。到達(dá)目的地后將兩車公牛飼養(yǎng)于同一個(gè)圈舍，飼養(yǎng)管理水平一致。運(yùn)輸后15天內(nèi)兩組飼料中添加等量抗應(yīng)激藥物。

1.4.2 采血 在運(yùn)輸前17h、運(yùn)輸后4h、20h、26h、45h、52h以及運(yùn)輸后7d、17d對(duì)實(shí)驗(yàn)牛只頸靜脈采血，分離血清，用淋巴細(xì)胞分離液提取牛外周血淋巴細(xì)胞。血清保存在－20℃，淋巴細(xì)胞保存于液氮中。

1.4.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 用熱休克蛋白HSP90ELISA檢測(cè)試劑盒通過酶標(biāo)儀檢測(cè)牛外周血淋巴細(xì)胞中HSP90蛋白的含量［2］。

通過電解質(zhì)分析儀檢測(cè)血清中Na＋、Cl－、K＋、Ca2＋的含量。

1.4.4 稱重 到場(chǎng)后當(dāng)天及到場(chǎng)后第15d各稱重一次，計(jì)算各組平均增重。

1.4.5 發(fā)病情況記錄 觀察并記錄運(yùn)到15d內(nèi)全群牛的發(fā)病情況，包括呼吸道疾病、消化系統(tǒng)疾?。▍⒖急?呼吸系統(tǒng)評(píng)分表，每天對(duì)每頭牛進(jìn)行打分）。及時(shí)治療病牛。

表1 呼吸系統(tǒng)評(píng)分表

每天采食前1h對(duì)各觀察項(xiàng)目評(píng)分，各項(xiàng)目取當(dāng)日觀察到的最高分，將各項(xiàng)目最高分相加得出該牛當(dāng)天總分。每天9點(diǎn)、18點(diǎn)對(duì)全群測(cè)量體溫。公牛呼吸系統(tǒng)評(píng)分總分≤1時(shí)只進(jìn)行觀察，呼吸系統(tǒng)評(píng)分總分≥2時(shí)給予治療。15d后匯總，統(tǒng)計(jì)運(yùn)到后15d各組各總分的頻數(shù)及所占百分比。兩組的總頻數(shù)為6（頭）×15（天）＝90。百分比＝（各頻數(shù)÷總頻數(shù)）×100%。

1.4.6 數(shù)據(jù)處理 用SPASS17.0軟件處理得到的數(shù)據(jù)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 離子檢測(cè)結(jié)果

血清中離子檢測(cè)結(jié)果見表2。

與運(yùn)輸前17h相比，專用車組血清K＋在運(yùn)輸后4h上升，接著開始下降，并在運(yùn)輸后17d恢復(fù)到正常水平，其中在運(yùn)輸后第26h顯著降低。與運(yùn)輸前17h相比，普通車組血清K＋在運(yùn)輸后先降低，在運(yùn)輸后45h達(dá)到最小值，然后逐漸恢復(fù)到正常水平，其在運(yùn)輸后26h和7d都顯著降低，并且在運(yùn)輸后45h極顯著降低。在運(yùn)輸后17d，普通車組血清K＋水平顯著低于專用車組。普通車組血清K＋水平顯著降低的時(shí)間點(diǎn)多于專用車組。所以，普通車組血清鉀離子降低程度顯著高于專用車組。

與運(yùn)輸前17h相比，專用車組血清Na＋在運(yùn)輸后4h有下降趨勢(shì)，接著開始上升并在運(yùn)輸后52h恢復(fù)到正常水平，Na＋水平運(yùn)輸后變化較小，無顯著性差異。與運(yùn)輸前17h相比，普通車組Na＋水平在運(yùn)輸后4h極顯著升高到峰值，然后開始下降，在運(yùn)輸后7d顯著降至最低值，并在運(yùn)輸后17d恢復(fù)到正常水平。所以，運(yùn)輸后普通車組Na＋變化程度顯著強(qiáng)于專用車組。

與運(yùn)輸前17h相比，專用車組血清Cl－運(yùn)輸后升降并不顯著。與運(yùn)輸前17h相比，普通車組Cl－在運(yùn)輸后4h卻顯著升高到峰值，但接著開始下降并在運(yùn)輸后17d恢復(fù)到正常水平。所以運(yùn)輸后普通車組Cl－變化比專用車顯著。

與運(yùn)輸前17h相比，專用車組血清Ca2＋在運(yùn)輸后4h和運(yùn)輸后20h顯著降低，普通車組血清Ca2＋僅在運(yùn)輸后26h顯著降低，其他時(shí)間點(diǎn)兩組血清Ca2＋與運(yùn)輸前17h相比差異不顯著。所以與運(yùn)輸前相比，專用車組血清Ca2＋顯著降低的時(shí)間長于普通車組。

2.2 HSP90檢測(cè)結(jié)果

牛外周血淋巴細(xì)胞中HSP90含量檢測(cè)結(jié)果見圖1。

如圖1，普通車組運(yùn)輸后外周血淋巴細(xì)胞中HSP90含量的波動(dòng)性明顯強(qiáng)于專用車組。在運(yùn)輸前17h，普通車組HSP90含量顯著低于專用車組，運(yùn)輸后4h，普通車組HSP90含量升高并超過專用車組。在運(yùn)輸后52h，普通車組外周血淋巴細(xì)胞中HSP90含量又降低至最低值，在運(yùn)輸后第7d恢復(fù)到正常水平，而專用車組在運(yùn)輸后26h已恢復(fù)至正常水平。

表2 血清中離子指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）

圖1 兩種運(yùn)輸車對(duì)牛外周血淋巴細(xì)胞中HSP90的影響

2.3 稱重結(jié)果

兩組稱重結(jié)果見表3。

表3 兩組稱重結(jié)果（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，kg）

稱重結(jié)果顯示專用車組從到達(dá)時(shí)至到達(dá)第15平均增重1.8±11.1kg，增重不顯著；普通車組到達(dá)時(shí)體重為298.0±17.1kg，到達(dá)第15天體重為291.5±18.0kg，15天平均減少6.5±8.8kg，體重?fù)p失顯著（P＜0.05）。專用車組比普通車組公牛體重多增8.3kg。結(jié)果表明使用專用車運(yùn)輸對(duì)延緩公牛體重?fù)p失有顯著作用。

2.4 發(fā)病情況

2.4.1 消化道發(fā)病情況 兩組消化道發(fā)病情況見表4。

表4 到達(dá)后15d內(nèi)消化道疾病發(fā)病頭數(shù)及發(fā)病率

到達(dá)15d內(nèi)專用車組33.3%發(fā)生消化道疾病，普通車組66.7%發(fā)生消化道疾病。該結(jié)果表明使用專用車運(yùn)輸有降低消化道發(fā)病率的趨勢(shì)。

2.4.2 呼吸道發(fā)病情況 呼吸系統(tǒng)評(píng)分頻數(shù)及百分比分別見表5、表6。

表5 15d各組呼吸系統(tǒng)評(píng)分頻數(shù)匯總

表6 總分各范圍頻數(shù)及百分比

呼吸系統(tǒng)評(píng)分總分越高病情越重，設(shè)定總分≥2分為發(fā)病牛。專用車組和普通車組呼吸系統(tǒng)評(píng)分總分≥2分的比例均為30.0%，總分≥3的比例分別為13.3%和10.0% ，總分≥4的比例分別為5.6%和2.2%。兩組各呼吸系統(tǒng)評(píng)分各總分范圍百分比差異不顯著（P＞0.05）。所以，本試驗(yàn)顯示用專用運(yùn)輸車并不能降低公牛呼吸道疾病發(fā)病率。

3 討論與分析

3.1 肉牛專用運(yùn)輸車簡介

本團(tuán)隊(duì)研發(fā)的肉牛專用運(yùn)輸車，通過半封閉式的車廂結(jié)構(gòu)、車廂設(shè)有百葉窗和排風(fēng)扇，以及車頂自動(dòng)伸縮篷布的人性化設(shè)計(jì)，以期有效控制肉牛在運(yùn)輸過程中車廂內(nèi)的溫度和濕度，遮風(fēng)擋雨，防雪防曬；車廂雙層中間設(shè)有兩個(gè)穿插孔，可根據(jù)肉牛大小適當(dāng)調(diào)整位置，做到靈活裝運(yùn)［3］；車廂底部墊有防滑性橡膠墊，可有效防止肉?；购捅Ｗo(hù)肉牛蹄部；車尾垂直升降尾板［4］，可以隨時(shí)隨地裝卸肉牛，有效解決不同地區(qū)由于裝卸條件差異導(dǎo)致的裝卸困難，從而減小肉牛應(yīng)激。

3.2 兩種運(yùn)輸車對(duì)血清離子的影響

韓瑾瑾等人報(bào)道與運(yùn)輸前相比，夏南牛血液離子指標(biāo)在運(yùn)輸后 Na＋和Cl－極顯著升高（P＜0.01），K＋顯著降低（P＜0.05），血清 Ca2＋變化不大［5］。本試驗(yàn)中公牛運(yùn)輸后血清 Na＋、Cl－、K＋的變化趨勢(shì)同報(bào)道一致。長途運(yùn)輸后血清Na＋升高和K＋降低，這可能與醛固酮分泌增多、腎臟排鉀保鈉作用加強(qiáng)有關(guān)。但本試驗(yàn)中與運(yùn)輸前相比，兩組Ca2＋均比運(yùn)輸前顯著降低，這可能是由試驗(yàn)季節(jié)不同導(dǎo)致的。離子變化可以作為評(píng)價(jià)運(yùn)輸應(yīng)激大小的指標(biāo)。本試驗(yàn)中普通車組血清中K＋降低水平顯著高于專用車組、Na＋變化顯著強(qiáng)于專用車組、Cl－水平在運(yùn)輸后顯著升高，由這些對(duì)比可以推測(cè)用普通車運(yùn)輸對(duì)肉牛造成的應(yīng)激比專用車大。

3.3 兩種運(yùn)輸車對(duì)HSP90的影響

HSP90是生物體內(nèi)重要的應(yīng)激性蛋白［6］，它在應(yīng)激反應(yīng)時(shí)被迅速合成并激活［7］，在蛋白質(zhì)聚集、折疊、跨膜、運(yùn)輸和轉(zhuǎn)位、穩(wěn)定細(xì)胞骨架以及分子伴侶等方面都發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，能夠抵抗早期應(yīng)激性損傷［8］。HSP90表達(dá)增強(qiáng)，反映機(jī)體適應(yīng)和保護(hù)機(jī)制發(fā)揮作用，同時(shí)也說明應(yīng)激可能造成了細(xì)胞功能受損。有研究報(bào)道牛的外周血淋巴細(xì)胞中HSP90表達(dá)在運(yùn)輸9h、10h、15h時(shí)極顯著升高（P＜0.01），運(yùn)輸后10h仍有升高趨勢(shì)，運(yùn)輸后20h恢復(fù)到正常水平［9］。本試驗(yàn)中與運(yùn)輸前相比，兩組運(yùn)輸后4h外周血淋巴細(xì)胞中HSP90均升高，并且兩組運(yùn)輸后各時(shí)間點(diǎn)HSP90水平并未顯著性升高，這與報(bào)道一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示普通車組運(yùn)輸后外周血淋巴細(xì)胞中HSP90含量的波動(dòng)性明顯強(qiáng)于專用車組，這與普通車運(yùn)輸對(duì)肉牛造成的應(yīng)激高于肉牛專用運(yùn)輸車有很大關(guān)系。

3.4 兩種車對(duì)體重的影響

稱重結(jié)果表明使用專用車運(yùn)輸對(duì)延緩公牛體重?fù)p失有顯著作用，這可能與肉牛專用運(yùn)輸車特有的便于裝卸升降尾板、車廂內(nèi)防滑橡膠板、百葉窗阻擋肉牛視線、可伸縮篷布遮風(fēng)擋雨的抗運(yùn)輸應(yīng)激措施有關(guān)。肉牛長途運(yùn)輸后體重?fù)p失不可避免，加快運(yùn)輸后體重恢復(fù)有重要意義，體重增長也情況能從一定程度反應(yīng)動(dòng)物健康狀況。所以肉牛專用運(yùn)輸車促進(jìn)肉牛運(yùn)輸后體重恢復(fù)具有重大意義。

3.5 兩種車對(duì)消化道病發(fā)病率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示專用運(yùn)輸車有降低消化道發(fā)病率趨勢(shì)，這可能是由于普通車墊料為稻草制作的草簾，長途運(yùn)輸中稻草被糞尿污染，牛只饑餓采食被污染的稻草再加上長途運(yùn)輸瘤胃微生物本已失調(diào)而導(dǎo)致的。而肉牛專用運(yùn)輸車車箱底部為防滑橡膠板，有效避免運(yùn)輸途中牛采食污染的食物。

3.6 兩種車對(duì)呼吸道病發(fā)病率的影響

肉牛專用運(yùn)輸車并沒有降低呼吸道疾病發(fā)病率可能是由于高速行駛中灌入百葉窗的風(fēng)強(qiáng)度仍能對(duì)肉牛造成應(yīng)激。另一方面，和普通敞篷車相比，專用運(yùn)輸車的半封閉車廂內(nèi)空氣質(zhì)量可能比普通車差，具體空氣質(zhì)量還需要進(jìn)一步檢測(cè)。

4 結(jié)論

綜上所述，與普通運(yùn)輸車相比，肉牛專用運(yùn)輸車能減弱肉牛運(yùn)輸后血清K＋、Na＋、Cl－以及外周血淋巴細(xì)胞中HSP90的波動(dòng)，顯著減小肉牛運(yùn)輸后體重?fù)p失、并且有降低肉牛運(yùn)輸后消化道疾病發(fā)病率的趨勢(shì)。所以肉牛專用運(yùn)輸車的抗應(yīng)激效果優(yōu)于普通運(yùn)輸車，有一定的推廣價(jià)值。

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