葉珩 錢科卿 黃薇

·臨床研究與應用·

肺癌患者血清TK1水平與臨床病理學特點及預后關系的研究

葉珩 錢科卿 黃薇

目的：探討細胞質胸苷激酶1（TK1）在肺癌患者血清中的陽性率及其與肺癌臨床病理學特點及預后的關系。方法：檢測75例肺癌患者血清TK1水平，同時選取56例健康體檢者作為對照。比較分析血清TK1水平與肺癌臨床病理學特點及預后的關系。結果：肺癌患者血清TK1的陽性率（33.3%）高于健康對照組（12.5%），差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006）。有遠處轉移的患者血清TK1陽性率（53.8%）明顯高于無遠處轉移的患者（22.4%），差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006）。TNM分期為晚期的肺癌患者血清TK1陽性率（54.5%）高于TNM分期早期的患者（16.7%），差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。肺癌患者血清中TK1的陽性率與患者性別、是否吸煙、有無淋巴結轉移及肺癌的病理類型無相關性。血清TK1陰性患者的2年生存率（78%）顯著高于TK1陽性患者（28%），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。結論：血清TK1與肺癌遠處轉移相關，是肺癌患者預后不佳的標志之一。

肺癌 細胞質胸苷激酶1 預后

肺癌在全世界的發(fā)病率和死亡率均居于首位［1］。肺癌起病隱匿，臨床上往往缺乏特異性表現，血清學檢查也無高度特異性的腫瘤標志物［2］，70%以上的患者確診時已是晚期。目前，肺癌的治療效果尚不理想，肺癌的5年生存率僅17%左右［3］。早期診斷是提高臨床療效和降低病死率的關鍵。細胞質胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）與細胞的增殖有關，在DNA的合成中將脫氧胸苷轉換為胸苷酸，是嘧啶補救途徑的關鍵酶［4］。在腫瘤細胞中，這種高水平的TK1從S期可以持續(xù)到M期，其水平的增加和DNA的合成相一致，提示TK1可作為腫瘤生長和細胞增殖的一種標志物。本研究通過檢測肺癌患者血清中TK1的水平，分析其與肺癌的臨床病理學及預后的關系。從而探討血清TK1在肺癌診斷、治療和預后等方面的應用價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般資料 收集2012年3月至2013年4月，常州市第二人民醫(yī)院收治的肺癌患者75例，其中男性52例、女性23例，患者年齡34～80歲，中位年齡59歲。其中非小細胞肺癌68例（鱗癌28例、腺癌40例），Ⅰ期28例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例、Ⅳ期25例；小細胞肺癌7例，其中局限期4例、廣泛期3例。另取56例在常州市第二人民醫(yī)院健康體檢者（其中男性34例、女性22例；年齡28～76歲，中位年齡55歲）為正常對照組。

1.1.2 主要實驗試劑 TK1診斷試劑盒、CIS-1型化學發(fā)光數字成像分析儀購自華瑞同康生物技術（深圳）有限公司，數字顯示水浴箱購自上海精宏科學儀器有限公司，超速離心機購自德國Eppendorf公司，脫色搖床購自江蘇省金壇市醫(yī)療器械廠。

1.2 方法

1.2.1 TK1測定步驟 患者及健康查體者早晨空腹抽血3 mL，30 min內經高速離心，取血清備用。TK1測定在本院腫瘤科實驗室進行。制備好抗體稀釋液、洗液、封閉液。將內含硝酸纖維素膜的模板平放在一張干凈的濾紙上，不同濃度的標準品按1號、2號、3號的順序點樣到A1、A2及A3位置上，每孔3 μL；待檢血清按每孔3 μL順序點在后面的膜上，室溫下自然晾干。打開模板，將膜放入反應盒內，用配制后的稀釋液振搖洗膜2次，每次5 min。棄去洗滌液，加封閉液，室溫下振搖封閉l h。加一抗（TK1-IgY），4℃下過夜。棄去反應液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加二抗（生物素化抗IgY二抗），室溫下振搖反應40 min。棄去反應液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加鏈酶親合素-酶復合物，室溫下振搖反應1 h。棄去封閉液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加ECL發(fā)光試劑，過膜浸濕，精確反應1 min。將膜放入CIS-1型化學發(fā)光成像分析系統(tǒng)內進行分析。上述重復3次。取3次測量值均數，測量值波動范圍為均數±0.5 mg。

1.2.2 參考值 依據以往的大樣本臨床試驗研究數據確立血清TK1的參考值：血清TK1水平0～2.0 pmol/L為正常，>2.0 pmol/L為異常［5］。

1.3 統(tǒng)計學處理

所有的數據資料采用SPSS 19.0軟件包處理。兩組間TK1陽性率的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 血清TK1在肺癌患者及健康對照組間的比較

在肺癌組患者的血清中，TK1的陽性率為33.3%，而在健康對照組中的陽性率為12.5%，差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006）。

2.2 肺癌組血清TK1與患者吸煙與否的關系

在肺癌組患者的血清中，吸煙者TK1的陽性率為38.3%，而在不吸煙組中的陽性率為25.0%，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.3 肺癌組血清TK1與患者性別的關系

在肺癌組患者的血清中，女性TK1的陽性率為34.8%，而在男性中的陽性率為32.7%，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.4 肺癌組血清TK1與病理學特點的關系

在肺癌組患者中，淋巴結轉移陽性的患者血清TK1陽性率為40%，淋巴結陰性患者的TK1陽性率為28.9%，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。有遠處轉移的患者血清TK1陽性率（53.8%）明顯高于無遠處轉移的患者（22.4%），差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006）。TNM分期為晚期的肺癌患者血清TK1陽性率（54.5%）高于TNM分期早期的患者（16.7%），差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。另外，小細胞肺癌患者的TK1陽性率（42.9%）明顯高于非小細胞肺癌患者（32.4%），但差異無統(tǒng)計學意義（表1，P>0.05）。

2.5 肺癌患者血清TK1與2年生存率的關系

至2年隨訪截止日，46例患者生存，血清TK1陰性患者的2年生存率為78%，TK1陽性患者為28%，差異具有統(tǒng)計學意義（表2，P<0.001）。

表1 TK1與肺癌臨床病理學特點的關系Table 1 Relationship between TK1 and clinical pathological features of lung cancer

表2 TK1與肺癌患者2年生存率的關系Table 2 Relationship between TK1 and 2 year survival rate of lung can?cer patients

3 討論

細胞質胸苷激酶1（TK1）是細胞S期DNA合成所需的關鍵酶之一，TK1酶是細胞增殖指數的測量標記物之一。TK1在非增殖細胞和健康人血清中含量極微或檢測不到［6-7］，而在增殖細胞及腫瘤細胞G1期→S期→G2期早期升高明顯［8］。研究發(fā)現［9］食管癌、胃癌、結直腸癌患者的血清TK1水平明顯高于對照組，且TK1檢測的陽性率明顯高于CEA、CA199、CA50。因此TK1可用于觀察腫物實體的細胞增殖度，判定其惡性程度，對細胞異常增殖病變的治療效果和預后的判斷有重要意義［10-11］。

有研究［12-13］認為TK1是肺癌患者一項可信的特異性高的腫瘤細胞增殖標志物。結合本研究結果顯示，肺癌組血清TK1陽性率高于對照組（P=0.006）。因此說明TK1檢測可成為肺癌的輔助診斷方法之一。

本研究結果顯示TK1與患者性別無相關性。雖然提示在不同的病理類型中，小細胞肺癌患者血清TK1的陽性率高于非小細胞肺癌患者。有吸煙史的肺癌患者中其血清TK1陽性率比無吸煙史的肺癌患者高，淋巴結轉移陽性的患者血清TK1陽性率高于淋巴結陰性患者，但是差異無統(tǒng)計學意義；有遠處轉移的患者血清TK1陽性率明顯高于無遠處轉移的患者，且差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006）。因此，認為在診斷肺癌轉移過程中，TK1在判斷血行轉移中有一定的臨床價值。本研究發(fā)現TNM分期為晚期的肺癌患者血清TK1陽性率高于TNM分期早期的患者，且差異具有統(tǒng)計學意義，說明血清TK1陽性率與肺癌的發(fā)展程度相關。黃銳等［14］檢測了63例肺癌患者血清TK1的表達情況，發(fā)現其與患者病理學類型相關，而與吸煙、TNM分期，淋巴結轉移、遠處轉移不相關，這可能與樣本量相對較少有一定的關系。

本研究生存率顯示，TK1陽性率與患者的2年生存率顯著相關，證實了TK1還可作為評價肺癌預后的一項新的生物指標。

綜上，發(fā)現血清TK1陽性率與肺癌及其臨床病理特征有一定的相關性，血清TK1檢測可能對于指導肺癌臨床分期和判斷預后有一定的臨床意義。

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（2015-06-24收稿）

（2015-09-22修回）

（編輯：楊紅欣）

Serum TK1 and its relation to the clinicopathological features and prognosis of patients with lung cancer

Heng YE,Keqing QIAN,Wei HUANG

Oncology Department,Changzhou Second People's Hospital affiliated to Nanjing Medical University,Changzhou 213000,China.

Objective:This study investigated the positive detection rate of cytoplasm thymidine kinase 1(TK1)in lung cancer patients and the relationship of TK1 with clinicopathological features and prognosis.Methods:Sensitive chemiluminescence dot-blot assay was used to detect serum TK1 levels in 73 lung cancer patients and 56 normal control subjects.Results:The positive detection rate of TK1 was elevated in the lung cancer patients compared with the controls(P=0.006).The positive detection rate of TK1 was also correlated with distant metastases,but not with other factors,such as smoking,sex,lymph node metastasis,and pathology types.The 2 year survival of the patients with negative TK1 detection was significantly longer than that of the patients positively detected with the marker(P<0.001).Conclusion: Serum TK1,a new tumor marker,has potential applications in the diagnosis and prognosis of lung cancer.

lung cancer,cytoplasm thymidine kinase 1,prognosis

10.3969/j.issn.1000-8179.2015.21.679

南京醫(yī)科大學附屬常州第二人民醫(yī)院腫瘤內科（江蘇省常州市213000）

錢科卿 oncol@foxmail.com

葉珩 專業(yè)方向為惡性腫瘤內科治療。

E-mail：dongyi8816@126.com