王月明，劉宇峰，馬若波，韓秋菊

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱150040；2.黑龍江省科學(xué)院大慶分院，黑龍江大慶163319；3.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，哈爾濱150001；4.黑龍江農(nóng)墾職業(yè)學(xué)院，哈爾濱150025）

黑蒜經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)研究

王月明1,2，劉宇峰2，馬若波3，韓秋菊4

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱150040；2.黑龍江省科學(xué)院大慶分院，黑龍江大慶163319；3.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，哈爾濱150001；4.黑龍江農(nóng)墾職業(yè)學(xué)院，哈爾濱150025）

為研究黑蒜的經(jīng)口急性毒性，按中華人民共和國衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的方法。將黑蒜于24h內(nèi)兩次經(jīng)口灌胃給予昆明種小鼠20 000 mg/kg·BW，對(duì)小鼠的生存狀態(tài)進(jìn)行觀察和記錄14d。在14d觀察期內(nèi)，未見小鼠有任何中毒癥狀，更無死亡，表明黑蒜對(duì)昆明種小鼠的經(jīng)口急性毒性劑量大于20 000mg/kg·BW。說明黑蒜屬實(shí)際無毒物質(zhì)。

黑蒜；小鼠；經(jīng)口急性毒性

黑蒜是采用新鮮的大蒜，通過發(fā)酵制成的具有保健作用的食品。普通大蒜(garlic)本身富含人體所需的氨基酸、蛋白質(zhì)、大蒜烯、活性SOD、多酚類等物質(zhì)，并表現(xiàn)出較強(qiáng)的增進(jìn)健康、預(yù)防疾病的作用［1-2］。近年來，歐美、日本等國的研究證明，經(jīng)過發(fā)酵熟成后的黑蒜不僅具備了普通大蒜的保健效果，更對(duì)預(yù)防癌癥、抗氧化、提高人體免疫功能等防病及保健作用具有明顯的提高。但黑蒜在進(jìn)行發(fā)酵成熟的過程中，在強(qiáng)化了原來所固有的成分的基礎(chǔ)上又產(chǎn)生了全新的成分［6-7］。故對(duì)其經(jīng)口急性毒性進(jìn)行研究，為黑蒜的安全食用提供毒理學(xué)依據(jù)。

1　材料

1.1儀器

MOL-300全自動(dòng)生化分析儀（上海力申科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)），電分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，JY31002型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），101AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(龍口市電爐制造廠)。

1.2樣品

實(shí)驗(yàn)樣品由黑龍江省科學(xué)院大慶分院提供，為帶皮黑蒜，去皮后蒜體表面為黑色，經(jīng)研磨后呈深咖啡色，無特殊氣味，試驗(yàn)時(shí)根據(jù)需要用蒸餾水配制成所需濃度。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用哈藥集團(tuán)制藥總廠提供的清潔級(jí)健康成年昆明種小鼠，體重為18～22g,許可證號(hào)：SCXK(黑) 2008004，試驗(yàn)前檢疫觀察7d，基礎(chǔ)飼料（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。

2　方法

2.1預(yù)試驗(yàn)

取20只小鼠，雌雄各10只。小鼠隔夜禁食8h后，次日于24h內(nèi)按動(dòng)物每100g體重灌胃2mL體積經(jīng)口灌胃2次，總灌胃劑量為20 000mg/kg·BW，末次灌胃后2h開始投以飼料和飲水，連續(xù)14d觀察。觀察期內(nèi)小鼠生命體征良好，無一死亡。因此無法測(cè)定黑蒜的半數(shù)致死量(LD)，故進(jìn)行黑蒜的最大耐受量(MTD)的測(cè)定。

2.2最大耐受量

取40只小鼠，雌雄各20只，隨機(jī)抽取雄鼠10只為黑蒜組，余下10只為空白對(duì)照組，雌鼠同上。各組小鼠隔夜禁食8h后，次日于24h內(nèi)按動(dòng)物每100g體重灌胃2mL體積經(jīng)口灌胃2次，總灌胃劑量為20 000mg/kg·BW，末次灌胃后2h開始投以飼料和飲水，空白對(duì)照組同樣方法灌胃蒸餾水。連續(xù)觀察14d。

2.3觀察行為

觀察灌胃后小鼠的活動(dòng)情況及自主神經(jīng)反應(yīng)，如無斷尾和舉尾現(xiàn)象、聲音異常、身體震顫和抽搐、覓食情況等。第2d起，每天固定時(shí)間觀察1次，稱取體重。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0做ANOVA統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)×(-)±s表示，組間比較采用方差分析t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.5臟器病例剖檢

第14d時(shí)，如有小鼠死亡，將其解剖，觀察小鼠心臟、肝臟、腎臟、脾、胃等主要器官有無病變。如無死亡，處死小鼠，觀察小鼠心臟、肝臟、腎臟、脾、胃等主要器官結(jié)構(gòu)有無病變發(fā)生。

3　結(jié)果

3.1小鼠行為狀況

灌胃后黑蒜組小鼠并未出現(xiàn)斷尾、舉尾、聲音異常、身體震顫、覓食、進(jìn)水、排便異常等生理現(xiàn)象，未見腹瀉、便秘、眼屎分泌、流血、流淚、流鼻涕、呼吸困難和毛色糙亂等異常，在之后14 d內(nèi)，小鼠活動(dòng)自如，反應(yīng)正常，皮毛有光澤，齊整，干凈，進(jìn)食及大小便正常，體重增長(zhǎng)正常。

空白對(duì)照組的小鼠在l～14d內(nèi)，小鼠行為活動(dòng)，生理反應(yīng)正常；皮毛有光澤，齊整，干凈，進(jìn)食及大小便正常，未見任何異常狀態(tài)。

3.2小鼠死亡情況

從灌胃后至14 d內(nèi)，黑蒜組和空白對(duì)照的40只小鼠全部存活，各組小鼠均未出現(xiàn)死亡。

3.3小鼠體重變化

第1～14d的時(shí)間段兩組無顯著差異（P＞0.05）。灌胃黑蒜組小鼠體重正常增長(zhǎng)情況見表1。

表1　灌胃后黑蒜對(duì)小鼠體重變化影響（x±s,n=5）Tab.1Influences on changes of mice's weight after filling their stomaches（x±s,n=5）

3.4病例剖檢分析

黑蒜組和空白對(duì)照組的各項(xiàng)觀察指標(biāo)未見明顯的毒性反應(yīng)，亦未能有相應(yīng)的生理組織、和臟器的病變。第14d解剖小鼠，可見其心臟、肝臟、腎臟、脾、胃等主要器官顏色、外觀形狀、大小比例、表面黏膜附著情況均正常，并無組織結(jié)構(gòu)腫瘤、結(jié)締組織結(jié)節(jié)、壞死、肥大等病理病變；胃形狀、大小正常，胃黏膜無出血點(diǎn)、壞死等，胃內(nèi)容物性狀正常。

4　結(jié)論

結(jié)果表明，14d觀察期內(nèi)，未見小鼠有任何中毒癥狀，更無死亡，表明黑蒜對(duì)昆明種小鼠的經(jīng)口急性毒性劑量大于20 000mg/kg·BW。根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中急性毒性的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，黑蒜小鼠經(jīng)口急性毒性屬實(shí)際無毒物質(zhì)。

［1］周道根，龔千鋒，陳泣.大蒜的研究進(jìn)展［J］.食品與藥品，2006，（08）：21-24.

［2］李福臣，孫建霞，劉洪富.大蒜的功能性質(zhì)及開發(fā)［J］.中國食物與營(yíng)養(yǎng)，2005，（04）：20-22.

［3］祝炳俏，吳海歌，劉媛媛，等.黑蒜抗氧化活性研究［J］.食品研究與開發(fā)，2008，（10）：58-60.

［4］李津，覃永長(zhǎng)，李桂勇，等.薏苡莖、葉提取物的急性毒性［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（5）：178-181.

［5］孫東寧，楊桂青，劉曉旭，等.黑蒜抑制胃癌機(jī)理研究進(jìn)展［J］.實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2013，（09）：789-792.

［6］王鑫，楊柯.黑蒜對(duì)腫瘤防治作用的研究進(jìn)展［J］.實(shí)用醫(yī)藥雜志，2011，（02）：176-178.

［7］CORZO-MARTINEZ M，CORSO N&VILLAMIEL M.Biological properties of onions and garlic［J］.Trends in Food Science&Technology，2007，（18）：609-625.

The Acute Oral Toxicity of Black Garlic

WANGYue-ming1,2,LIUYu-feng2,MARuo-bo3,HANQiu-ju4
(1.College ofFood Science,Northeast Agricultural University,Harbin 150040,China;
2.DaqingBranch ofHeilongjiangAcademyofSciences,Daqing163319,China;
3.School ofPublic Health,Harbin Medical University,Harbin 150001,China;
4.HeilongjiangNongken Vocational College,Harbin 150025,China）

The acute oral toxicity ofblack garlic was tested based on"Health Food Inspection and Evaluation ofTechnical Specifications"by the People's Republic of China Ministry of Health.The Kunming mice was administered intragastrically with black garlic at a dose of 20 000mg/kg twice within 24 hours.Mice had no toxicity symptom and no death within 14 days,the results showed that the MTD of acute toxic test was higher than the dosage of20 000 mg/kg.Conclusion:the black garlic is an actuallynonpoisonous material.

Black garlic;Mice;Acute oral toxicity

R114

A

1674-8646（2015）09-0008-02

2015-06-25

王月明（1985-），女，黑龍江哈爾濱人，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院在讀碩士，從事食品工藝及微生物應(yīng)用研究。

吳非（1968-），女，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事糧食、油脂及植物蛋白工程研究。