楊 歡 張美華 蘇忠蘭

Sox10單抗免疫組化檢測脂溢性角化病和皮膚纖維瘤中黑素細胞的增殖

楊 歡 張美華 蘇忠蘭?

目的: 明確脂溢性角化病和皮膚纖維瘤中黑素細胞增殖情況及透明細胞的性質。方法:收集脂溢性角化病52例，皮膚纖維瘤20例，對其皮損進行Sox10(黑素細胞核特異性染色抗體)免疫組化染色。結果: 與正常皮膚比較，脂溢性角化病基底層黑素細胞增多34例，棘層39例和皮膚纖維瘤基底層黑素細胞增多16例，棘層12例。結論: 脂溢性角化病和皮膚纖維瘤中黑素細胞有不同程度增多，部分胞漿透明細胞為黑素細胞。

脂溢性角化??； 皮膚纖維瘤； 黑素細胞； 免疫組化

脂溢性角化病和皮膚纖維瘤是皮膚科常見的良性病變，有的脂溢性角化病和皮膚纖維瘤皮損顏色較深，其表皮內會有較多的色素和胞漿透明細胞，本文選取皮損顏色較深的脂溢性角化病和皮膚纖維瘤患者，對石蠟切片進行Sox10(黑素細胞核特異性染色抗體)染色，明確以上兩種病變中黑素細胞增殖情況及胞漿透明細胞的性質。

1 資料與方法

1.1 臨床標本采集 收集表皮內有較多色素沉著及胞漿透明細胞且臨床色素較深的皮膚纖維瘤20例；脂溢性角化病52例，包括:棘層肥厚型、角化型各20例、激惹型、腺樣型各5例，扁平型和克隆型各1例。

1.2 試劑 抗體:Sox10抗體(從美國Santa cruz公司購買)。Sox10為黑素細胞核染色的抗體，陽性為細胞核顯示褐黑色。復合痣作為陽性對照(圖1)，正常皮膚作為陰性對照(圖2)。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化方法 取本院病理科已制備的脂溢性角化病、皮膚纖維瘤及正常皮膚組織石蠟切片，按免疫組化DAB試劑盒步驟操作。

1.3.2 計數(shù)方法(人工計數(shù)) 每張組化片中，病變部位和相鄰正常皮膚的基底層選取10個高倍視野(40倍)，計總數(shù)后，求平均數(shù)；病變部位平均數(shù)高于正常部位，計為增多；棘層選取10個高倍視野(40倍)，有Sox10陽性即有黑素細胞。

2 結果

2.1 脂溢性角化病黑素細胞增生情況，見表1。

表1 脂溢性角化病黑素細胞增生情況

(1)角化過度型20例，基底層黑素細胞增多12例(平均每個高倍視野3.73個黑素細胞，正常部位2.29個黑素細胞)，13例在棘層有黑素細胞(平均每個高倍視野0.44個黑素細胞)(圖3)。(2)棘層肥厚型20例，基底層黑素細胞增多14例(平均每個高倍視野3.58個黑素細胞，正常部位2.27個黑素細胞)，20例棘層有黑素細胞(平均每個高倍視野3.52個黑素細胞)(圖4)。(3)腺樣型5例，基底層黑素細胞增多

3例(平均每個高倍視野3.23個黑素細胞，正常部位2.13個黑素細胞)(圖5)。(4)激惹型5例，基底層黑素細胞增多4例(平均每個高倍視野3.65個黑素細胞，正常部位2.03個黑素細胞)，5例在棘層有黑素細胞(平均每個高倍視野4.08個黑素細胞)(圖6)。(5)克隆型1例，棘層10個高倍視野中表皮巢內有38個黑素細胞(圖7)。(6)扁平型1例，基底層10個高倍視野中32個黑素細胞(圖8)，正常部位10個高倍視野中19個黑素細胞(平均每個高倍視野3.2個黑素細胞，正常部位1.9個黑素細胞)。

2.2 皮膚纖維瘤 20例皮膚纖維瘤中，16例(80%)基底層有黑素細胞增加(平均每個高倍視野3.78個黑素細胞，正常部位2.29個黑素細胞)，12例(60%)棘層有黑素細胞(平均每個高倍視野0.42個黑素細胞)(圖9、10)。

圖1 復合痣皮損中黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖2 正常皮膚無黑素細胞處無染色(ELPS法，×400)圖3 角化過度型脂溢性角化病基底層及棘層黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖4 棘層肥厚型脂溢性角化病棘層黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖5 腺樣型脂溢性角化病基底層黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖6 激惹型脂溢性角化病基底層及棘層黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖7 克隆型脂溢性角化病表皮形成的巢中黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖8 扁平型脂溢性角化病基底層黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)

圖9 皮膚纖維瘤基底層黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)圖10 皮膚纖維瘤棘層黑素細胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)

3 討論

Sox10是細胞核轉錄因子Sox(Sty－related HMB－box)超家族的一員，細胞核染色的免疫標記，是神經嵴衍生細胞中發(fā)現(xiàn)的一種轉錄因子，對黑素細胞的分化、成熟有重要作用，1在黑素瘤中的表達為97%～ 100%，2是標記黑素細胞腫瘤非常敏感的指標。3Sox10與S－100相比較，敏感性更好，特異性更強，4表皮內常見的胞漿透明細胞包括黑素細胞和朗格漢斯細胞，由于朗格漢斯細胞來源于骨髓，Sox10在其中不表達，而且Sox10為細胞核染色的指標，相比其他如S100、HMB－45等對細胞漿內黑素顆粒染色的抗體，容易辨認。5－7在背景中有大量色素，包括細胞漿都著色的情況下，不需要脫色，也可以確定黑素細胞，有利于表皮內黑素細胞的準確診斷。

脂溢性角化病切片進行Sox10單抗染色，結果表明，角化過度型、棘層肥厚型、激惹型在基底層和棘層均有不同程度的黑素細胞增多，腺樣型在基底層有黑素細胞增多；克隆型的增多主要在表皮形成的巢內；扁平型在基底層有黑素細胞增多。有報道除了腺樣

型以外，在激惹型，非激惹型，克隆型中均有黑素細胞的增殖，8與本次結果基本一致，但是銀浸染色法主要染色黑素顆粒，即便染色陽性，也不一定就是黑素細胞，如果在有色素沉著的時候，預先脫色素，會破壞抗原的完整性，脫色不干凈，陽性染色結果判斷不明確，Sox10抗體為細胞核染色的抗體，在表皮內有色素沉著的情況下，也可以辨認黑素細胞，準確率高。

查閱文獻，關于皮膚纖維瘤表皮內色素沉著的可能機理是:增殖的成纖維細胞樣的細胞能分泌干細胞因子(SCF)及肝細胞生長因子(HGF)，這些因子對黑素細胞產生刺激，從而引起表皮內色素沉著。9有學者發(fā)現(xiàn)成纖維細胞樣的細胞可以刺激黑素細胞增殖，該作用與SCF和HGF相關。10，11。本研究選用的標本表皮內均有色素，20例皮膚纖維瘤中，16例基底層有黑素細胞增多，12例棘層有黑素細胞。曾有關于皮膚纖維瘤伴有雀斑樣黑素細胞增多的報道。12美國學者2005年發(fā)現(xiàn)了14例皮膚纖維瘤伴有黑素細胞增生性痣，其中雀斑樣痣2例，皮內痣3例，復合痣8例，淺表擴散的原位惡性黑素瘤1例。13本研究中僅見到黑素細胞的增多，并無雀斑樣痣、皮內痣和復合痣的改變，可能與我們選取標本數(shù)量少有關。

本研究預定位基底層及以上胞漿透明細胞對應的Sox10免疫組化中同一個細胞，確定是否為黑素細胞。但由于蠟塊切片過程及實驗操作的影響，實際操作中不能定位同一個細胞。由于Sox10為細胞核染色，Sox10陽性染色下，在基底層不僅可以看到黑褐色的核，也可以看到胞核周圍透亮的暈；在脂溢性角化病中在棘層除腺樣型外，其他型均有黑素細胞；在皮膚纖維瘤中，棘層也有黑素細胞增多，因此，基底層及以上胞漿透明的細胞部分為黑素細胞。

本次實驗的創(chuàng)新之處，在于使用新的黑素細胞核特異性抗體，該抗體的特點:(1)特異性強，敏感性高，它針對神經嵴來源的細胞標記，朗格漢斯細胞是骨髓來源細胞，因此不會被標記，可以用在表皮內與朗格漢斯細胞區(qū)別；(2)由于該抗體特異性地染色黑素細胞的細胞核，可以在相鄰的細胞，如角質形成細胞包膜或胞漿有著色或有色素沉著的情況下，不需脫色，也可以區(qū)分黑素細胞，避免了脫色操作對于抗原完整性的破壞，而且免疫組化操作方便，顯色明顯，辨認簡單，準確，可以用于其它色素性疾病的研究中。

查閱國內相關文獻，尚無關于脂溢性角化病及皮膚纖維瘤中黑素細胞增生情況的研究，本研究樣本數(shù)量較少，具體的機制還需進一步擴大樣本量及進行相關基礎研究。

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(收稿:2014－09－21 修回:2014－12－05)

Detection of the proliferation of melanocytes in the patients w ith sebor rheic keratosis and dermatofibroma by immunohistochem istry w ith Sox10 antibody

YANG Huan，ZHANG Mei-hua，SU Zhong-lan.Department of Dermatology，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing，210029

Objective:To determine the proliferation ofmelanocytes andwhether the transparent cytoplasm cells aremelanocytes or not in the patientswith seborrheic keratosis(SK)and dermatofibroma(DF).M ethods:The lesions from 52 patients with SK and 20 patientswith DF were treated with immunohistochemistry with Sox10 antibody.Results:Compared with the normal skin，the number ofmelanocytes was increased in the basal layer in 34 patientswith SK and in 16 patientswith DF.The number ofmelanocyteswas increased in spinous layer in 39 patientswith SK and 12 patientswith DF.Conclusion:There aremelanocytes proliferation in the lesions of patients with SK and DF and some of the transparent cytoplasm cells aremelanocytes.

seborrheic keratosis；dermatofibroma；melanocyte；immunohistochemistry

南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，南京，210029?通信作者