曾建偉 ，李春燕 ，陳敏健 ，黃水珍 ，林忠寧 ，謝善松 ，陸 烝

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院，福建 福州 350122；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，福建 福州 350013；3.南平市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，福建 南平 353000）

薏苡仁為禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.meyuan （Romen.） Stapf的干燥成熟種仁，具有利水滲濕除痹、健脾止瀉、排膿解毒散結(jié)之功效，用于水腫、腳氣、小便不利、脾虛泄瀉、濕痹拘攣、肺癰、腸癰、贅疣、癌腫等治療［1］。薏苡仁是藥食兩用植物，一方面含有蛋白質(zhì)、脂肪、多糖、氨基酸、脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)成分［2-3］；另一方面含有類脂類、甾醇、木脂素、黃酮類和生物堿等成分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、鎮(zhèn)痛、降血糖、降血鈣、降血壓等方面的藥用價(jià)值［4-7］。薏苡仁在全國(guó)大部分地區(qū)均有分布，但未見(jiàn)有關(guān)臺(tái)灣與大陸薏苡仁的質(zhì)量比較。產(chǎn)地環(huán)境影響薏苡仁的品質(zhì)，薏苡仁中甘油三油酸酯和薏苡素常作為其品質(zhì)評(píng)價(jià)的指標(biāo)

［8-13］。本文建立HPLC-ELSD法測(cè)定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量，比較閩臺(tái)品種的含量差異，為從臺(tái)灣引種優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)藥食兩用品種提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵，G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，Alltech 3300蒸發(fā)光檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）；LK-1000A搖擺式中藥粉碎機(jī) （上海隆拓儀器設(shè)備有限公司）；MS105DU十萬(wàn)分之一電子天平 （瑞士梅特勒-托利多公司）；AR2130千分之一電子天平（美國(guó)奧豪斯儀器有限公司）；KQ-500型超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q超純水機(jī)（法國(guó)Millipore公司）。

1.2 試藥 甘油三油酸酯對(duì)照品 （批號(hào)：111692-201203，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；二氯甲烷（色譜純，批號(hào)：D116146，美國(guó)阿拉丁工業(yè)公司）；乙腈（色譜純，批號(hào)：201310726，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；薏苡仁，采自臺(tái)灣花蓮及福建浦城、寧化、建甌和建陽(yáng)，經(jīng)林忠寧副研究員鑒定為薏苡Coix lacryma-jobi L.var.meyuan （Romen.） Stapf的種仁。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－二氯甲烷（60∶40）；流速：1.0 mL ／min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃；ELSD 檢測(cè)器參數(shù)：氮?dú)饬魉?1.5 L／min，漂移管溫度70℃，增益4。在此色譜條件下，甘油三油酸酯對(duì)照品色譜圖見(jiàn)圖1，樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

圖1 甘油三油酸酯對(duì)照品HPLC圖

圖2 薏苡仁樣品HPLC圖

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取甘油三油酸酯對(duì)照品15.43 mg，置10 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，配成濃度為1.543 mg／mL對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取4 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，置10 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即得濃度為0.617 mg／mL對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末 （過(guò)60目篩）約2.0 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相50 mL，稱定重量，浸泡2 h，超聲（功率 300 W，頻率50 kHz）提取 30 min，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25 μL 依次注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（X），峰面積對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 得回歸方程為：Y＝1.317X＋3.298，r＝0.9993。甘油三油酸酯在3.086～15.43 μg范圍內(nèi)，峰面積對(duì)數(shù)與進(jìn)樣量對(duì)數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度考察 取對(duì)照品溶液，重復(fù)連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD為0.69%。

2.5 穩(wěn)定性考察 取臺(tái)灣供試品溶液，按“2.1”色譜條件下，每隔2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD為1.54%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性考察 取臺(tái)灣薏苡仁粉末約2.0 g，共5份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算甘油三油酸酯的含量平均值為0.94%，RSD為2.34%。

2.7 回收率考察 取臺(tái)灣薏苡仁約1.0 g，共5份，分別置具塞錐形瓶中。另精密稱取甘油三油酸酯對(duì)照品81.62 mg，置25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容至刻度，分別精密吸取3 mL置上述具塞錐形瓶中，按 “2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算甘油三油酸酯的平均回收率為99.76%，RSD為1.32%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 甘油三油酸酯回收率考察

2.8 含量測(cè)定 稱取閩臺(tái)兩地薏苡仁樣品約2.0 g，每個(gè)產(chǎn)地樣品平行取3份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，記錄各樣品峰面積，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 閩臺(tái)薏苡仁中甘油三油酸酯的含量測(cè)定（n＝3）

3 討 論

3.1 提取方法 參考2010版《中華人民共和國(guó)藥典》［1］，薏苡仁粉碎過(guò)60目篩，以流動(dòng)相為提取溶劑，采用超聲法提取藥材中甘油三油酸酯，經(jīng)驗(yàn)證切實(shí)可行。

3.2 流動(dòng)相的確定 流動(dòng)相曾用分析純二氯甲烷，發(fā)現(xiàn)ELSD噪音特別大，嚴(yán)重干擾了信號(hào)峰，導(dǎo)致無(wú)法正常檢測(cè)。后改用進(jìn)口色譜純的二氯甲烷，解決了ELSD噪音太大的問(wèn)題，保證ELSD的正常檢測(cè)?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》規(guī)定流動(dòng)相的比例為乙腈-二氯甲烷（65∶35），結(jié)果發(fā)現(xiàn)保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，峰形較鈍。經(jīng)摸索，流動(dòng)相修定為乙腈-二氯甲烷（60∶40），甘油三油酸酯出峰時(shí)間控制在10 min以內(nèi)，峰形改善，分離度亦能滿足要求。

3.3 含量分析 從表2可知，閩臺(tái)兩地薏苡仁中甘油三油酸酯的含量差異明顯，臺(tái)灣薏苡仁中甘油三油酸酯的含量最高，福建浦城的次之。如何提高福建省薏苡仁的品質(zhì)，從臺(tái)灣引種栽培不失為一條捷徑。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：353-354.

［2］王穎，趙興娥，王微，等.薏苡不同部位營(yíng)養(yǎng)成分分析及評(píng)價(jià)［J］.食品科學(xué)，2013，34（5）：255-259.

［3］李澤鋒，郝云良.薏苡營(yíng)養(yǎng)成分及綜合利用［J］.農(nóng)業(yè)科技與裝備，2012（5）：74.

［4］TATSUMI S，MABUCHI T，ABE T，et al.Analgesic effect of extracts of Chinese medicinal herbs Moutan cortex and Coicis semen on neuropathic pain in mice［J］.Neurosci Lett，2004，370（2）：130-134.

［5］黃鎖義，李容，潘勇，等.薏苡研究的新進(jìn)展［J］.食品研究與開(kāi)發(fā)，2012，33（11）：223-227.

［6］周愛(ài)芬，朱虹，葉挺梅，等.薏苡藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8（4）：188-190.

［7］袁建娜，張小華，郭明曄，等.薏苡生藥學(xué)研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，12（27）：5385-5389.

［8］李厚聰，劉圓，袁瑋，等.HPLC測(cè)定薏苡中薏苡素的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2009，24（5）：530-532.

［9］李厚聰，劉圓，袁瑋，等.RP-HPLC法測(cè)定薏苡中薏苡素的含量［J］.西南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，31（11）：154-157.

［10］任江劍，俞旭平，張斌，等.不同種源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比較［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13（4）：15-17.

［11］陳勇，陳碧蓮，何云珍，等.高效液相色譜法測(cè)定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量［J］. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2005，22（3）：246-247.

［12］袁桂平，姜軍華，眭榮春.HPLC法測(cè)定薏苡仁飲片中甘油三油酸酯的含量［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，25（1）：52-54.

［13］李楠，盧亞婷，宋娟娜，等.HPLC法測(cè)定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量［J］.陜西科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，31（4）：101-104.