邱新成 侯新蕊

電化學發(fā)光免疫儀檢測心肌損傷血清標志物的技術(shù)分析*

邱新成①侯新蕊②

目的：研究分析羅氏E601電化學發(fā)光免疫分析儀在檢測心肌損傷血清標志物方面的應(yīng)用。方法：通過臨床研究，分析電化學發(fā)光免疫分析儀檢測心肌損傷血清標志物時的一些關(guān)乎檢驗結(jié)果準確、符合臨床判斷和應(yīng)用的重要技術(shù)環(huán)節(jié)。結(jié)果：結(jié)合心肌損傷血清標志物的臨床意義，規(guī)范選用檢測項目；應(yīng)注意正確的保存、使用試劑，注意合并試劑的使用等技術(shù)環(huán)節(jié)。結(jié)論：在使用其檢測心肌損傷血清標志物時，嚴格控制技術(shù)流程的諸環(huán)節(jié)對保障檢測質(zhì)量具有重要作用。

電化學發(fā)光儀；心肌損傷；血清標志物

DOI∶ 10.3969/J.ISSN.1672-8270.2015.11.002

[First-author’s address] Department of Cardiology, The Second Artillery General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100088, China.

電化學發(fā)光免疫分析儀是繼放射免疫、酶聯(lián)免疫及熒光免疫技術(shù)以后研究出來的新一代標志免疫測定技術(shù)[1]。目前，自動電化學發(fā)光免疫分析儀可檢測的項目很多，主要包括腫瘤標志物、性激素、甲狀腺激素、心肌損傷血清標志物、貧血檢查、傳染性疾病、骨代謝檢查以及免疫肝炎系列等內(nèi)容，極大的滿足了臨床的需求[2]。本研究通過對羅氏E601自動電化學發(fā)光免疫分析儀在檢測心肌損傷血清標志物中的應(yīng)用，分析在檢測時的注意事項及技術(shù)環(huán)節(jié)。

1 心肌損傷血清標志物的臨床意義

全自動電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)在心肌損傷血清標志物的應(yīng)用中有別于傳統(tǒng)生化檢查的心肌酶項目，其主要項目是肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase MB，CK-MB)、肌鈣蛋白(troponin，Tn)以及肌紅蛋白(myoglobin，Mb)。CK-MB在發(fā)病后出現(xiàn)較早，通常在心源性胸痛3～8 h后即可在血液中檢測出，達到峰值時間為9～30 h，而48～72 h后恢復正常。CK-MB若在病程中保持在高水平，通常意味著心肌壞死仍在繼續(xù)，若恢復正常后再次升高，則提示梗塞部位的擴大或者又有新的梗塞。CK-MB也可出現(xiàn)在其他疾病中，如橫紋肌溶解，此時需要結(jié)合其他心肌損傷血清標志物的檢查進行鑒別。Tn是橫紋肌收縮的重要調(diào)節(jié)蛋白，存在于心肌和骨骼肌中，由3個亞基組成：即肌鈣蛋白C(TnC)、肌鈣蛋白T(TnT)和肌鈣蛋白I(TnI)。TnT、TnC和TnI主要以2種形式存在于心肌細胞中，大部分以結(jié)構(gòu)蛋白形式固定于肌原纖維上，小部分游離于胞漿中。在正常人血液中含量很低(＜0.3 ug/L)，當心肌細胞受損時，游離中的Tn先釋放進入血液，隨著損傷的加重，結(jié)合部分的Tn被降解而不斷釋放入血液中，使其不斷地持續(xù)升高[3]。對于TnT而言，心肌細胞內(nèi)的TnT呈復合體狀態(tài)約占94%，6%游離在胞漿中且為可溶性，在心肌細胞膜完整的情況下不能透過，因此正常人血清中幾乎檢測不到，當心肌細胞受損時TnT分子量較小就比較容易透過細胞膜釋放入血液中，使血清中TnT水平迅速增加。在發(fā)生心源性胸痛3～4 h后，即可檢測出TnT，且檢測期長達14 d左右；在不穩(wěn)定型心絞痛中，心肌肌鈣蛋白T(cardiac troponin T，cTnT)也常升高，提示可能有小范圍的心肌梗塞，因此由于其靈敏度高、發(fā)病后出現(xiàn)時間早、持續(xù)時間長及特異性交叉等原因，臨床上檢測cTnT對于診斷心肌缺血，急性心肌梗死，微小面積心肌損傷等均具有重要意義。Mb是橫紋肌細胞的細胞漿蛋白，參與氧的轉(zhuǎn)運及儲留，在癥狀發(fā)生后2 h左右，Mb的濃度就會升高，因此被認為是發(fā)生心肌梗塞后的最早期標志物，心梗發(fā)生后4～12 h濃度達高峰，24 h左右恢復正常水平，因此在臨床檢測肌紅蛋白對于早期診斷急性心肌梗死、再更及施行溶栓治療后是否再灌注均有重要的臨床意義。心肌損傷標志物在血液中出現(xiàn)過程見表1。

表1 心肌損傷標志物在血液中出現(xiàn)的時間(h)

2 心肌損傷血清標志物的檢測

隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，心肌損傷血清相關(guān)標志物的檢查手段越來越豐富，諸如心電圖、負荷試驗、核素心肌顯像、超聲心動圖以及冠脈造影等。血液檢查心肌標志物經(jīng)歷了從谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase，GOT)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)向Mb、肌酸激酶和肌酸激酶-MB型以及TnI和TnT轉(zhuǎn)變的重大變革[4]。心肌損傷血清相關(guān)標志物檢查對于患者而言，即方便快捷，又傷害較小，免除患者花大量的時間配合進行負荷試驗；避免某些檢查有可能對患者造成的傷害等。因此，心肌損傷血清標志物在臨床上的應(yīng)用越來越重要，且臨床對心肌損傷血清標志物檢查的要求越來越高，對檢驗技術(shù)要求越來越先進，對檢驗結(jié)果要求越來越準確，對檢驗時間要求越來越短，因而要求分析、檢測心肌損傷生化標志物時應(yīng)快捷、敏感和迅速。

羅氏E601電化學發(fā)光免疫分析儀以其先進的方法學，快捷迅速的監(jiān)測，以及準確可靠的結(jié)果受到臨床的青睞[5]。但在檢測心肌損傷血清標志物時，仍需嚴格進行質(zhì)量控制，注意以下技術(shù)環(huán)節(jié)，確保其檢驗結(jié)果的準確性。

2.1 CK-MB檢測

CK-MB檢測可以提高發(fā)病后6 h內(nèi)診斷急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的敏感性，采用CK-MB質(zhì)量法檢測其靈敏度可達96.8%，但缺乏心臟絕對的特異性[6]。前列腺或子宮手術(shù)、小腸、舌、膈肌手術(shù)或創(chuàng)傷、橫紋肌損傷、心臟手術(shù)以及慢性腎衰等CK-MB均會升高[7-8]。因此，需要在選擇CK-MB檢測時應(yīng)進行連續(xù)性檢測用以提高檢測特異度，此外標本采集時間同樣很重要，需要熟悉掌握CK-MB在病程中血中的濃度水平變化規(guī)律。

2.2 Mb檢測

雖然由于Mb分子量極小，非常容易釋放入血液中，是目前診斷AMI最早的可測指標。但是Mb廣泛存在于橫紋肌和平滑肌中，診斷心肌梗死的特異性很低，因此Mb在臨床上用于陰性排除價值更高，正因為其特有的臨床意義，也可用于監(jiān)測溶栓治療后再灌注的情況。

2.3 cTnT檢測

由于cTnT有典型的早期升高和較慢降低，因此既可作為MI早期指標，也可作為中期和晚期的診斷指標。同時，由于特異性極強，既可作為“微灶梗死”的指標，也可作為估計梗死面積的指標，還可作為危險分層、判斷預(yù)后的指標[6，9-10]。許之民等[11]報道，在病毒性心肌炎患者的急性期TnI、TnT比傳統(tǒng)的CK、CK-MB、GOT、血清LDH有更好的敏感性，在116例病例中陽性率分別為：TnI64.7%、TnT45.7%、CK10.3%、CK-MB7.8%、GOT6.9%、LDH 12.9%。李亞維等[12]用急性病毒性心肌炎小鼠模型，同時觀察了42例急性病毒性心肌炎患者，認為測定血清cTnT水平探查心肌炎性損傷遠較CK-MB敏感。

2.4 E601殘余試劑的使用

羅氏E601電化學發(fā)光儀器的試劑特點之一，是在使用完其對應(yīng)掃描條碼的可檢測份數(shù)后，試劑盒中仍剩余有大量的殘留試劑，可以將數(shù)盒條碼信息顯示已經(jīng)“用完”的殘留試劑合并為一盒，使用尚未使用過的條碼掃描后可繼續(xù)使用。羅氏E601心肌損傷血清標志物試劑盒通常較為穩(wěn)定，合并試劑后檢測結(jié)果仍然可靠，但在合并試劑時應(yīng)注意所合并的試劑必須為同一批號，嚴禁不同批號合并，如發(fā)生不同批號合并，將對檢驗結(jié)果造成巨大影響。同一批號試劑合并之后，在上機檢查患者標本時必須用羅氏專用質(zhì)控品先進行室內(nèi)質(zhì)量控制后方可檢測，如未進行質(zhì)量控制則不可使用該盒合并試劑。

2.5 檢測試劑保存和使用

羅氏E601電化學發(fā)光免疫分析儀在使用過程中偶爾會出現(xiàn)試劑檢測錯誤，出現(xiàn)實測量與試劑盒的標稱量不符，其原因為：①如發(fā)生在原裝新試劑盒中，有可能是該盒試劑的試劑量不夠，或是試劑盒中存有大量氣泡；②使用合并試劑盒時，在合并時會產(chǎn)生大量氣泡，因此要求在用冰箱冷藏保存試劑盒時要輕拿輕放，盒口朝上。合并試劑時要緩慢注入合并的試劑。

2.6 儀器故障排除方法

(1)羅氏E601電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)在遇到故障時會給出報警信息，此時應(yīng)根據(jù)提示充分利用診斷菜單中的各項功能和數(shù)據(jù)，結(jié)合儀器的工作狀態(tài)，找出故障發(fā)生原因和解決方法；若不能自行解決，需及時和工程師聯(lián)系進行維修[1]。在常見的故障原因分析時，不能夠單從儀器對故障報警的描述分析，應(yīng)該注意是否與報警信息相關(guān)的檢測單元的其他方面出現(xiàn)了故障。如儀器報吸入標本異常，通常該報警原因是吸樣針在吸取血清時發(fā)現(xiàn)了凝塊、氣泡等異常標本。由于抽血后未等血液自然凝固則進行離心導致血清樣本分離不好，或患者的血液中存在高纖維蛋白，造成吸樣時纖維蛋白同時被吸入、凝結(jié)而導致吸樣針不完全堵塞[13]。然而，也有可能是因為吸樣針運動異常，加樣臂加樣位置偏離造成。由此可見，雖然儀器報吸入標本異常，分析原因時還得從加樣標本相關(guān)檢測單元去分析，而不只是考慮樣本堵塞的問題。

(2)原裝試劑出現(xiàn)檢測結(jié)果異常，該種情況通常是試劑在運輸過程中出現(xiàn)問題，可檢測“磁珠”試劑盒蓋口是否附著大量黃色干涸的“磁珠”，若有附著“磁珠”現(xiàn)象則需棄用該試劑盒；除此之外的情況則為試劑盒本身的問題，需要與羅氏公司的工程師聯(lián)系，以排除故障。

3 結(jié)語

電化學發(fā)光免疫分析儀為精密儀器，若要保證其正常運行，得到較為準確的檢測結(jié)果，必須嚴格按照操作規(guī)程操作，不僅使儀器正常運行，更應(yīng)該做好儀器的常規(guī)保養(yǎng)工作[14]。此外，應(yīng)對其進行預(yù)防性維護，保證儀器具有良好的工作狀態(tài)和性能，并減少故障的發(fā)生頻率，延長其使用壽命[15]。

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Roche ECL instrument E601 in inspection serum markers of myocardial injury aspects

QIU Xin-cheng, HOU Xin-rui
China Medical Equipment,2015,12(11)∶5-8.

Objective∶ To discuss the application of Roche ECL instrument E601 in inspection serum markers of myocardial injury aspects. Methods∶ Dependent on the clinical experience of cardiology, the introduction of Roche E601 methodology and the instruments using, and the clinical significance analysis of myocardial injury markers, summarized the important considerations in accurate test results and clinical judgment when using ECL instrument checks serum markers of myocardial injury. Results∶ In order to make better clinical application, people who use Roche ECL instrument E601 should pay attention to proper storage and use reagents, note the use of the combined reagents and the clinically meaningful of detected projects. Conclusion∶ The quality control of technical procedures is very important to assure the testing results. Only understanding some of the important considerations,can we better integrate the device for clinical application.

Electrochemiluminescence instrument; Myocardial injury; Serum markers

邱新成，男，(1982- )，本科學歷，醫(yī)師。第二炮兵總醫(yī)院心內(nèi)科，從事心血管內(nèi)科診療工作。

1672-8270(2015)11-0005-04

R542.2

A

2015-06-09

國家科技支撐計劃(2009BAI86B04)“保健特殊需求關(guān)鍵技術(shù)及設(shè)備研究”

①第二炮兵總醫(yī)院心內(nèi)科 北京 100088

②解放軍總醫(yī)院心內(nèi)科 北京 100853