于青海 李玉杰 孔祥華 姜秀云 陳靜 馬慧玲 藺曉月 劉麗平 徐鴻 孫圣福 田夫林

（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250022）

牛結(jié)核病PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和ELISA檢測(cè)方法對(duì)比分析

于青海 李玉杰 孔祥華 姜秀云 陳靜 馬慧玲 藺曉月 劉麗平 徐鴻 孫圣福*田夫林*

（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250022）

本試驗(yàn)采集了2個(gè)牛場(chǎng)的10頭疑似結(jié)核病的血清，采用ELISA方法進(jìn)行牛結(jié)核病抗體檢測(cè)，同時(shí)對(duì)該10份樣品進(jìn)行了PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，通過(guò)兩種檢測(cè)方法的比較，以期篩選出切實(shí)可行牛結(jié)核病的檢測(cè)方法，為牛結(jié)核病的凈化提供基礎(chǔ)。

牛；結(jié)核??；PD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)；ELIS；檢測(cè)方法

牛結(jié)核病 （Bovine tuberculosis）是由牛結(jié)核分支桿菌（Mycobacterium bovis） 和結(jié)核分支桿菌 （Mycobacterium tuberculosis）所引起的一種人畜共患的傳染病，主要引起組織器官的肉芽腫性結(jié)核結(jié)節(jié)和化膿性或干酪樣或鈣化的壞死病灶為特征，牛結(jié)核病在世界各國(guó)均有發(fā)生，在我國(guó)是常見(jiàn)的多發(fā)性疫病，牛結(jié)核病的流行嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的健康發(fā)展，更嚴(yán)重威脅著人身安全。世界衛(wèi)生組織 （OIE）將其列為必須通報(bào)疫病，農(nóng)業(yè)部將其列為二類(lèi)動(dòng)物傳染病，列為檢疫撲殺對(duì)象[1]。

目前，結(jié)核病的監(jiān)測(cè)主要采取PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)進(jìn)行，PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)需要現(xiàn)場(chǎng)操作，操作過(guò)程繁瑣，通量小，需要有人保定、剪毛、測(cè)皮厚，操作者有一定的風(fēng)險(xiǎn)，時(shí)間長(zhǎng)，需要120h才能完成。因此亟需一種簡(jiǎn)便易操作的方法替代該方法，我們引入了IDEXX的結(jié)核桿菌ELISA檢測(cè)試劑盒，采集牛血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，比較兩種方法的一致性、敏感性和特異性。

1 材料和方法

1.1 被檢血清及被檢牛

2014年秋季山東省2個(gè)養(yǎng)牛場(chǎng)的疑似結(jié)核牛血清樣品10份。

1.2 試劑

牛結(jié)核菌素由黑龍江生物制品一廠提供；牛結(jié)核分支桿菌抗體ELISA檢測(cè)試劑盒由IDEXX公司提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 ELISA

按照IDEXX牛分支桿菌抗體檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.2 PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)

將牛只頸側(cè)中部上三分之一處剪毛，直徑約10cm，用游標(biāo)卡尺測(cè)量中央皮皺厚度，記錄；測(cè)量完畢，用75%酒精消毒術(shù)部，皮內(nèi)注射0.1m l提純結(jié)核菌素；觀察反應(yīng)：皮內(nèi)注射72h后判定，觀察局部有無(wú)熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并用游標(biāo)卡尺測(cè)量皮皺厚度，做好記錄，疑似牛和陰性牛，96h和120h再分別觀察一次，并記錄皮厚。

2 結(jié)果

2.1 牛結(jié)核病不同檢測(cè)方法結(jié)果

2.1.1 ELISA監(jiān)測(cè)結(jié)果

對(duì)2個(gè)養(yǎng)牛場(chǎng)的10頭牛采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，根據(jù)IDEXX的試劑盒說(shuō)明書(shū)的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，S/P值≥0.3判定為陽(yáng)性，10份樣品全部為陽(yáng)性。

表1 ELISA監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.1.2 PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)結(jié)果

對(duì)2個(gè)養(yǎng)牛場(chǎng)的10頭牛進(jìn)行PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，每頭牛頸部注射0.1ml結(jié)核菌素，72h后觀察結(jié)果，有3頭牛皮厚差≥4mm，96h后觀察結(jié)果，有6頭牛皮厚差≥4mm，120h后觀察結(jié)果，有6頭牛皮厚差≥4mm。

3 結(jié)論

（1）通過(guò)采用IDEXX的牛分支桿菌抗體檢測(cè)試劑盒與傳統(tǒng)PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)兩種結(jié)核病的監(jiān)測(cè)方法的比較，發(fā)現(xiàn)兩種方法存在一定的差異，本試驗(yàn)采用ELISA方法篩選的陽(yáng)性樣品進(jìn)行PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，10份樣品中PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)有6份樣品為陽(yáng)性，陽(yáng)性符合率為60%。

表2 PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)結(jié)果

（2）ELISA方法試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，進(jìn)行94份樣品的檢測(cè)，只需要不到3h的時(shí)間即可檢出結(jié)果，而PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)需要120h才可出具結(jié)果，而且操作復(fù)雜，需要輔助人員保定，剪毛、測(cè)量皮厚等過(guò)程。從檢測(cè)方法的便捷程度以及通量來(lái)看，ELISA方法較PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)有很大的可操作性。

（3）從兩種方法的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，ELISA方法可以用來(lái)結(jié)核病的篩查，而篩查的陽(yáng)性樣品可以用PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)來(lái)確診。兩種方法相結(jié)合，對(duì)于牛場(chǎng)的結(jié)核病的凈化消除具有較高的可操作性。楊顯超等人建議采用變態(tài)反應(yīng)PPD皮內(nèi)結(jié)合ELISA方法進(jìn)行牛結(jié)核病的監(jiān)測(cè)凈化[2]。李金嶺等采用PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和ELISA結(jié)合的方式進(jìn)行牛結(jié)核病的監(jiān)測(cè)，建議ELISA監(jiān)測(cè)陽(yáng)性的進(jìn)行撲殺，監(jiān)測(cè)陰性而PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性的觀察，隔離、淘汰[3]。

[1]王曲直,劉佩紅,沈素芳,等.牛結(jié)核病診斷方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2015,51(2)：56-59.

[2]楊顯超,吳秀娟,李凱航,等.皮試法與ELISA法結(jié)核病檢測(cè)中的對(duì)比試驗(yàn)[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2015(2)：10-12.

[3]李金嶺,郭宏軍,高明輝,等.歐盟皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)比較試驗(yàn)法結(jié)合ELISA檢測(cè)牛結(jié)核病的研究[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2007,24(7)：28-29.

山東省動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)防治項(xiàng)目。

于青海 （1957-），男，山東省濟(jì)南市人，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與工作。*

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