旦正措 （青海省貴南縣畜牧獸醫(yī)工作站 813199）

貴南縣牛羊口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析

旦正措 （青海省貴南縣畜牧獸醫(yī)工作站 813199）

為了全面掌握貴南縣牛羊注射口蹄疫疫苗后所產(chǎn)生的免疫抗體效價(jià)情況，于2014年3、6、、9、12月份，對(duì)貴南縣塔秀鄉(xiāng)和過(guò)馬營(yíng)鎮(zhèn)的散養(yǎng)戶(hù)、縣城屠宰場(chǎng)屠宰的90頭牛和90只羊用正向間接血凝實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，免疫抗體效價(jià)第一、二、三、四季度分別為牛78.7%、85.6%、85.7%、86.05%；羊48.75%、84.15%、71%、79.65%。說(shuō)明該縣牛、羊口蹄疫免疫接種工作扎實(shí)有效。

牛羊；口蹄疫；抗體；檢測(cè)分析；散養(yǎng)戶(hù)；屠宰場(chǎng)；貴南縣

1 基本情況

貴南縣位于青海省東南部，地處西傾山與黃河之間。地理坐標(biāo)為東經(jīng) 100°33′～101°33′， 北緯 35°09′～36°08′， 總面積6649.7平方公里，草場(chǎng)總面積為756.6萬(wàn)畝，耕地面積為43.79萬(wàn)畝，林地面積為25.26萬(wàn)畝。隸屬海南藏族自治州，約占海南藏族自治州面積的14.45%。屬于共和盆地，境內(nèi)南部高山連綿，挺拔高聳，為西傾山褶曲高原的一部分，直亥主峰為第一高峰，海拔5011m，中部為高原灘地，地勢(shì)開(kāi)闊。黃河沿岸為河谷地帶，地勢(shì)平坦。拉西瓦黃河沿岸海拔2222m為境內(nèi)海拔最低點(diǎn)。大部分地區(qū)海拔在3000～3500m之間。全縣共有草食畜89.26萬(wàn)頭只，其中牛11.85萬(wàn)頭，羊77.04萬(wàn)只?？谔阋?（FMD）是豬、牛、羊等主要家畜和70多種野生偶蹄動(dòng)物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。該病傳播途徑多、速度快，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大政治、經(jīng)濟(jì)損失，鑒于此，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織 （OIE）將其列為通報(bào)疫病，我國(guó)政府將其排在15個(gè)一類(lèi)動(dòng)物傳染病的第一位。貴南縣2006年、2008因引進(jìn)家畜引發(fā)了2次大的口蹄疫疫情流行，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，鑒此，該縣非常重視家畜口蹄疫苗的免疫接種工作，該監(jiān)測(cè)的目的是為了進(jìn)一步掌握口蹄疫免疫效果。

2 材料和方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

被檢血清、96孔反應(yīng)板、水浴鍋、50～100μl移液器、移液嘴、加樣槽、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的口蹄疫O型間接血凝抗體檢測(cè)試劑盒。試劑批號(hào)2014022084、2014071706、規(guī)格5ml、有效期3個(gè)月、保存溫度2～8℃.

2.2 方法

正向間接血凝實(shí)驗(yàn)。

2.3 實(shí)驗(yàn)步驟

2.3.1 加稀釋液

在血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和第5～7孔，加稀釋液50μl/孔。

2.3.2 稀釋待檢血清

待檢血清使用前，需經(jīng)過(guò)56℃水浴滅活30min，取待檢滅活血清樣品50μl，分別加入反應(yīng)板1～6排的第1孔中，與稀釋液混勻后，吸取50μl，加于第2孔中，依次作2倍系列稀釋至第10孔，第10孔混勻后取出50μl棄去。

2.3.3 稀釋陽(yáng)性對(duì)照血清

在血清板的第7排第1孔加陽(yáng)性血清50μl，2倍系列稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出50μl丟棄。此時(shí)被檢血清和陽(yáng)性血清的稀釋倍數(shù)依次為1.2～1：1024。

在血凝板的第8排第1孔加陰性血清50μl，對(duì)倍稀釋至第4孔，混勻后從該孔取出50μl丟棄。此時(shí)陰性血清的稀釋倍數(shù)依次為 1： 2、 1： 4、 1： 8、 1： 16。 第 5～7孔為稀釋液對(duì)照，每孔僅加入50μl稀釋液。

2.3.4 加血凝抗原

血清稀釋孔和稀釋對(duì)照孔加血凝抗原 （充分搖勻，瓶底應(yīng)無(wú)血球沉淀）25μl/孔。將反應(yīng)板置微型震蕩器上震蕩2～3min或用手依次四邊輕拍，直至血球分布均勻。封板膜封板，室溫下靜置2～3h判定結(jié)果。

2.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

以呈現(xiàn) “++”血凝反應(yīng)的血清最高稀釋度作為該血清的間接血凝抗體效價(jià)。血凝反應(yīng)強(qiáng)度表示如下：

“++++”紅細(xì)胞全部凝集，形成一層均勻膜，布滿(mǎn)整個(gè)孔底。

“+++” 紅細(xì)胞在孔底形成一層薄膜，面積比前者略小。

“++” 紅細(xì)胞在孔底形成薄膜凝集，邊緣松散或呈鋸齒狀。

“+” 紅細(xì)胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圓點(diǎn)。

“±” 紅細(xì)胞沉于孔底，但周?chē)还饣蛑行挠锌瞻摺?/p>

“-” 紅細(xì)胞完全沉于孔底，呈光滑的圓點(diǎn)。

當(dāng)陽(yáng)性血清抗體效價(jià)≥1：256、陰性血清抗體效價(jià)≤1：16、稀釋液對(duì)照孔無(wú)自凝現(xiàn)象時(shí)，實(shí)驗(yàn)成立。接種口蹄疫O型疫苗的豬免疫抗體效價(jià)≥1：128為免疫合格，牛羊免疫抗體效價(jià)≥1：256為免疫合格。

3 結(jié)果與分析

（1）2014年每季度采集貴南縣塔秀鄉(xiāng)、過(guò)馬營(yíng)鎮(zhèn)的牧戶(hù)飼養(yǎng)的牦牛和綿羊以及縣城屠宰場(chǎng)屠宰的牛、羊血清各90份進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，通過(guò)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)第一季度散養(yǎng)戶(hù)飼養(yǎng)的牛、羊抗體合格率分別為82.5%和57.5%；屠宰場(chǎng)屠宰的牛羊抗體合格率分別為75%和40%。第二季度散養(yǎng)戶(hù)飼養(yǎng)的牛、羊抗體合格率分別為85.6%和88.3%；屠宰場(chǎng)屠宰的牛羊抗體合格率分別為78%和80%。第三季度散養(yǎng)戶(hù)飼養(yǎng)的牛、羊抗體合格率分別為91.4%和77%；屠宰場(chǎng)屠宰的牛羊抗體合格率分別為80%和65%。第四季度散養(yǎng)戶(hù)飼養(yǎng)的牛、羊抗體合格率分別為77.1%和74.3%；屠宰場(chǎng)屠宰的牛羊抗體合格率分別為95%和85%，詳見(jiàn)附表。

附表 O型口蹄疫免疫抗體合格率統(tǒng)計(jì)表

（2）通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)貴南縣飼養(yǎng)的牛 “O型”口蹄疫免疫合格率較高，且6、9月份比3、12月份高。這與該縣免疫接種時(shí)間有關(guān)，該縣牛口蹄疫苗免疫時(shí)間為4月底和9月初，這兩個(gè)季度的抗體效價(jià)高于其他季度。

（3）羊口蹄疫免疫合格率較高，且6、12月份比3、9月份高。這與該縣綿羊免疫接種時(shí)間有關(guān)，該縣春季羊口蹄疫苗免疫時(shí)間為5月份，秋季羊免疫接種時(shí)間為10月份，這兩個(gè)季度的抗體效價(jià)高于其他季度。

（4）通過(guò)檢測(cè)說(shuō)明，該縣的口蹄疫免疫接種工作扎實(shí)有效，確保了免疫密度和質(zhì)量。

旦正措 （1979-），女，藏，本科，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作。