馮杰 涂軍榮 王焱

(1.云南省食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證中心 云南昆明 650101;2.佛上市三水區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科 廣東佛山 528527;3.廣東食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校 廣東廣州 510500)

缺血性心臟病患者外周血中EPCs數(shù)量減少、功能受損,與血管內(nèi)皮功能障礙密切相關(guān)[1、2]。腦心清片是廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產(chǎn)的柿葉提取物制劑。有研究表明,腦心清片具有良好的防治動(dòng)脈硬化癥作用[3],并可以抑制高血壓引起的頸動(dòng)脈重構(gòu)[4]。本文旨在研究腦心清片對(duì)缺血性心臟病患者外周血中EPCs數(shù)量及功能的影響。

1 材料與方法

(1)臨床資料:選取2013年9月～2013年12月在本院住院的被確診為IHD患者40例,其中男17例、女23例,年齡(64.0±5.5)歲,入選者均伴有胸痛,冠脈造影顯示至少一支冠脈狹窄>50%,其中單支病變13例,2支病變17例,3支病變10例。將入選患者按照電腦隨機(jī)數(shù)字表的方法隨機(jī)分為腦心清組30例和貝那普利組10例。腦心清組給予腦心清片4片Tid(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司)貝那普利組給予貝那普利10mg/d(北京諾華公司),治療12周。兩組性別(男/女)比例是腦心清組13/17,貝那普利組4/6,無顯著差異。其他基本資料如年齡、吸煙、血脂、糖尿病等亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表1)。

(2)EPCs的分離、培養(yǎng)和鑒定:患者的靜脈血樣取至治療開始前和治療結(jié)束后,采用密度梯度離心法分離單核細(xì)胞,置于涂有人HFN的24孔培養(yǎng)板中,用EBM-2培養(yǎng),4d后換培養(yǎng)液,至d7時(shí)將貼壁細(xì)胞用DiLDL(2.4ug/ml)在37℃溫育1h,然后用2%多聚甲醛固定10min,再用FITC-UEA-I(10ug/ml)溫育1h。雙染色陽性者為正在分化的EPCs,每孔隨機(jī)選取3個(gè)視野(200倍)計(jì)數(shù)EPCs。

(3)粘附能力的檢測(cè):用0.1%胰酶消化后收集EPCs,懸浮于500ulEBM-2培養(yǎng)液中計(jì)數(shù)。將同密度的EPCs接種在涂有人HFN的24孔培養(yǎng)板中,37℃下培養(yǎng)30min,計(jì)貼壁細(xì)胞數(shù)。

(4)EPCs遷移能力檢測(cè):用0.1%胰酶消化后收集EPCs,懸浮于500ulEBM-2培養(yǎng)液中計(jì)數(shù)。在Boyden小室的下室中注入500ul EBM-2培養(yǎng)液,在上室中注入含有2×104EPCs懸浮細(xì)胞的EBM-2培養(yǎng)液50ul。在37℃培養(yǎng)24h,去除上室和濾膜未移動(dòng)的細(xì)胞,將底層細(xì)胞用甲醇固定后進(jìn)行Giemsa染色,計(jì)數(shù)。

(5)體外血管生成能力的檢測(cè):在倒置顯顯微鏡下計(jì)數(shù)小血管生成細(xì)胞,EPCs細(xì)胞長度超過寬度的4倍以上即可被認(rèn)為形成小血管。

(6)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:各組計(jì)量資料均以(x±S)表示,計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn),計(jì)量資料用t檢驗(yàn),單因素相關(guān)性分析,P< 0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

(1)治療前后兩組EPCs數(shù)量比較:在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)雙染色陽性者,即正在分化的EPCs數(shù)量,腦心清組治療前為(162±33)個(gè)/視野,治療后為(219±48)個(gè)/視野,治療前后比較有顯著差異(P<0.05)。

(2)治療前后EPCs的功能比較:兩組治療后,EPCs粘附、遷移、血管生成細(xì)胞比較,EPCs功能顯著提高,腦心清組相比貝那普利組的血管生成細(xì)胞略低,但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,見表2。

3 討論

外周血中的內(nèi)皮祖細(xì)胞EPCs可參與出生后的新生血管形成和損傷血管的再內(nèi)皮化過程,對(duì)內(nèi)皮修復(fù)、維持血管穩(wěn)定的功能具有重要作用[5]。IHD患者的EPCs數(shù)量減少及功能損傷會(huì)導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈自身修復(fù)能力降低與缺血心肌新生血管減少[1]。前期研究發(fā)現(xiàn)腦心清片改善冠心病患者的內(nèi)皮功能可能與調(diào)節(jié)血脂、抗血小板聚集和抗氧化的綜合作用有關(guān)[6]。

表1 兩組患者基本資料比較(x±S)

表2 兩組治療前后各參數(shù)比較(x±S)

本研究首次發(fā)現(xiàn),腦心清片可以提高IHD患者外周血中EPCs數(shù)量并改善其粘附能力、遷移能力和體外生成血管能力。這可能是腦心清片改善血管內(nèi)皮功能的機(jī)制之一。至于腦心清片提高EPCs數(shù)量和功能是否與上調(diào)SDF-1水平和CXCR4的表達(dá)有關(guān),有待進(jìn)一步的研究。

[1]陳海波,張淑霞.缺血性心臟病患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的變化[J].河北醫(yī)學(xué),2007,13(6):689-691.

[2]Yao EH,Fukuda N,Matsumoto T,et al.Losartan improves the impairedfunction of endothelial progenitor cells in hypertension via an antioxidanteffect[J].Hypertens Res,2007;30(11):1119-28.

[3]李楚源,貝偉劍,劉昌孝,等.腦心清片防治腦動(dòng)脈硬化研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2010,33(4):296-301．

[4]吳玉玲,張銳,黃美蘭.腦心清對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓、血小板聚集及頸動(dòng)脈重構(gòu)的影響[J].中藥材,2013,36(6):982-5.

[5]崔斌,黃嵐,宋耀明,等.冠心病患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與相關(guān)危險(xiǎn)因素及冠狀動(dòng)脈病變的關(guān)系[J].中華心血管病雜志,2005,33:785-788.

[6]梁斯碧,萬貞.腦心清片治療冠心病變異型心絞痛臨床療效及內(nèi)皮功能的影響[J].廣東藥學(xué),2004,14(6):39-41.