歐陵斌

Crohn病唾液中炎癥因子的研究*

歐陵斌①

目的：分析炎癥因子白細(xì)胞介素1β（Interleukin 1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素6（Interleukin 6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor α，TNF-α）與活動(dòng)期CD患者相關(guān)性，為疾病的診斷提供檢測(cè)指標(biāo)。方法：選取本院2011-2013年克羅恩病（Crohn’s disease，CD）患者，其中48例為活動(dòng)期CD組患者和42例非活動(dòng)期CD組患者，并選擇45例正常健康人作為正常對(duì)照組，所有患者抽取靜脈血進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和CRP檢測(cè)，采用 R&D SYSTEMS檢測(cè)唾液中IL-1β、IL-6和TNF-α濃度，比較分析三組患者的差異。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，活動(dòng)期CD組與緩解期CD組患者的BMI、RBC和Hb減低，而WBC、CRP和PLT增高，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；活動(dòng)期CD組和緩解期CD組患者的相關(guān)指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。活動(dòng)期CD組患者IL-1β（282.3±52.1）pg/mL；IL-6（13.1±4.3）pg/mL；TNF-α（32.9±8.6）pg/mL。緩解期CD組患者IL-1β（192.1±42.1）pg/mL；IL-6（7.1±3.1）pg/mL；TNF-α（10.3±6.2）pg/mL；正常對(duì)照組IL-1β（180.0±37.1）pg/mL；IL-6（6.2±1.2）pg/mL；TNF-α（8.6±2.9）pg/mL?；顒?dòng)期CD組患者唾液中IL-1β，IL-6和TNF-α比緩解期CD組患者和正常對(duì)照組顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；但是緩解期CD組患者與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：活動(dòng)期CD組患者口腔特異性損害與血紅蛋白、血小板、CRP、BMI相關(guān)，唾液IL-6和TNF-α與特異性口腔損傷有關(guān)，這些炎癥因子可作為活動(dòng)期CD患者的檢測(cè)指標(biāo)。

克羅恩?。?IL-1β； IL-6； TNF-α； 口腔損害

克羅恩?。–rohn’s disease，CD）是腸道全層的慢性肉芽腫炎癥疾病，病因尚不明確，臨床可表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、發(fā)熱、體重下降和其他腸外表現(xiàn)，并可累及口腔，如口瘡、潰瘍、舌炎，且病情反復(fù)發(fā)作，經(jīng)久不愈[1-2]。由于克羅恩病臨床表現(xiàn)多樣，缺乏特異性，因此其早期診斷率非常低。雖然目前有許多檢測(cè)手段，但均不能很好地解決克羅恩病的診斷問(wèn)題。由此可見(jiàn)，尋找對(duì)克羅恩病早期、快速、準(zhǔn)確的診斷方法具有重要意義。近年來(lái)對(duì)口腔唾液的檢測(cè)逐漸增高，由于口腔唾液檢測(cè)簡(jiǎn)單易行，為非侵入性，特別適用于兒童，并且能反映口腔和胃腸道的分泌功能，因此應(yīng)用于CD[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)在炎癥性疾病里，唾液中許多細(xì)胞因子會(huì)升高，如IL-6，可能是口腔也參與了整個(gè)胃腸道的炎癥反應(yīng)[5]。本文研究了CD患者中的白細(xì)胞介素1β（Interleukin 1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素6（Interleukin 6 ，IL-6）腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor α，TNF-α）水平，并探索了CD的活動(dòng)性和口腔損傷的相互關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院消化內(nèi)科2011-2013年90例CD患者，同時(shí)選取45例非CD患者作為對(duì)照組。CD的診斷符合臨床、放射、內(nèi)鏡和組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)疾病活動(dòng)指數(shù)（Clinical disease activityindex，CDAI）將CD分為活動(dòng)期和緩解期，其中48例為活動(dòng)期CD組，42例為緩解期CD組[6]?；加新匝装Y、心血管疾病、糖尿病、自身免疫性疾病、腫瘤、過(guò)敏以及服用抗生素等其他影響炎癥因子的患者排除在外。三組患者的年齡、性別、病程等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 三組患者一般資料比較

1.2 方法 （1）一般檢測(cè)：所有患者抽取靜脈血進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和CRP檢測(cè)。（2）細(xì)胞因子的檢測(cè)：按照標(biāo)準(zhǔn)方法采集唾液后，4000 rpm離心20 min后收集上清立即進(jìn)行檢測(cè)或凍存于-80 ℃[4]。IL-1β，IL-6和TNF-α采用R&D SYSTEMS試劑盒用ELISA進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用（±s）表示，組間非參數(shù)的差異利用Mann-Whitney檢驗(yàn)， χ2檢驗(yàn)和Kruskal-Wallis單因素方差分析，相關(guān)性分析利用Spearman進(jìn)行檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 三組患者BMI、RBC、Hb等指標(biāo)比較 與正常對(duì)照組比較，活動(dòng)期CD組與緩解期CD組患者體質(zhì)指數(shù)（Body Mass Index，BMI）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（Red Blood Cell Count，RBC）和血紅蛋白濃度（hemoglobin concentration，Hb）減低，而白細(xì)胞計(jì)數(shù)（White blood cell count，WBC）、C反應(yīng)蛋白（C reactive protein，CRP）和血小板計(jì)數(shù)（Platelet count，PLT）增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；活動(dòng)期CD組和緩解期CD組患者的相關(guān)指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 三組患者BMI、RBC、Hb等指標(biāo)比較（±s）

表2 三組患者BMI、RBC、Hb等指標(biāo)比較（±s）

*與正常對(duì)照組比較，P＜0.05；△與活動(dòng)期CD組比較，P＜0.05

012/L）WBC（×109/L）PLT（×109/L）CRP（mg/L）CDAI .3*8.6±2.0*375±60*26.2±4.4*255.3±36.2*緩解期CD組（n=42） 22.7±1.0*△13.8±0.4*△4.3±0.2*△7.1±1.5*△252±35*△5.1±1.0*△105.3±30.4*△正常對(duì)照組（n=45） 24.9±1.314.6±0.34.4±0.26.3±1.2233±314.2±0.80

2.2 三組患者唾液中細(xì)胞因子水平比較 活動(dòng)期CD組患者唾液中IL-1β，IL-6和TNF-α比緩解期CD組患者和正常對(duì)照組均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；但是緩解期CD組患者與正常對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 三組患者唾液中細(xì)胞因子水平比較（±s） pg/mL

表3 三組患者唾液中細(xì)胞因子水平比較（±s） pg/mL

*與活動(dòng)期CD組比較，P＜0.01

組別IL-1βIL-6TNF-α活動(dòng)期CD組（n=48）282.3±52.113.1±4.332.9±8.6緩解期CD組（n=42）192.1±42.1*7.1±3.1*10.3±6.2*正常對(duì)照組（n=45）180.0±37.1*6.2±1.2*8.6±2.9*

2.3 口腔損害比較 Spearman相關(guān)性分析顯示活動(dòng)期CD組口腔特異性損害與Hb、PLT、CRP和BMI相關(guān)，但與RBC、CDAI和WBC無(wú)相關(guān)性，見(jiàn)表4。Spearman相關(guān)性分析顯示活動(dòng)期CD組口腔特異性損害與唾液中IL-6和TNF-α正相關(guān)，而與IL-1β無(wú)相關(guān)性，見(jiàn)表5。

表4 活動(dòng)期CD組口腔特異性損傷與血液檢查和其他因子的相關(guān)性分析

表5 活動(dòng)期CD組口腔特異性損害與唾液IL-1β、IL-6和TNF-α相關(guān)性分析

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，近年來(lái)我國(guó)克羅恩病的發(fā)病率進(jìn)行性增加，但是克羅恩病的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，其病因尚未完全明確。目前有學(xué)者認(rèn)為克羅恩病的發(fā)生可能是感染、飲食等環(huán)境因素作用于具有遺傳易感性的人群，使腸道免疫反應(yīng)異常引起黏膜損傷所致[7-8]。免疫系統(tǒng)的異常在克羅恩病的發(fā)病中具有極為重要的作用，炎癥遞質(zhì)、炎癥因子和免疫調(diào)節(jié)等多個(gè)方面均可以參與其中。而炎癥因子的作用則越來(lái)越受到人們的重視。筆者研究了活動(dòng)期和緩解期CD患者唾液中炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，結(jié)果顯示活動(dòng)期CD組患者明顯高于緩解期CD組患者和正常對(duì)照組，炎癥因子與疾病的臨床表現(xiàn)和疾病嚴(yán)重性相關(guān)聯(lián)。筆者的結(jié)果表明IL-1β、IL-6和TNF-α在胃腸道炎癥中升高，因而可作為CD活動(dòng)性的一個(gè)指標(biāo)，并且IL-6和TNF-α與活動(dòng)期CD相關(guān)聯(lián)，這與以前的結(jié)果相一致[9]。Nielsen等[6]發(fā)現(xiàn)CD患者唾液IL-6明顯升高，并可用來(lái)評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)疾病的活動(dòng)性。一些研究表明CD患者可能會(huì)增加牙周炎的發(fā)生，唾液中炎癥因子發(fā)生了改變，這表明CD改變了細(xì)胞因子的產(chǎn)生，唾液在維持口腔環(huán)境中發(fā)揮了重要作用。

NF-κB依賴的細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6和TNF-α在炎癥性疾病如CD中發(fā)揮了重要作用。NF-κB轉(zhuǎn)錄因子對(duì)一系列炎癥因子可進(jìn)行調(diào)控，其活化可引起炎癥和免疫應(yīng)答。TNF-α和IL-6是由單核細(xì)胞、上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞時(shí)產(chǎn)生的急性時(shí)相蛋白[10]。TNF-α和IL-6聯(lián)合其他炎癥因子通過(guò)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)對(duì)機(jī)體發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，并參與慢性炎癥病理改變?nèi)缪装Y性腸炎、類風(fēng)濕、哮喘等[11]。相關(guān)學(xué)者發(fā)現(xiàn)NF-κB依賴的細(xì)胞因子在某些疾病的唾液中會(huì)升高[6，10]。唾液中炎癥因子的升高可能是局部口腔黏膜或腺體細(xì)胞產(chǎn)生的，亦可能是口腔黏膜屏障的破壞特別是炎癥活動(dòng)期。在筆者的試驗(yàn)中也證實(shí)活動(dòng)期CD患者唾液IL-1β、IL-6和TNF-α升高，胃腸道包括口腔的炎癥可影響唾液中炎癥因子的水平。Nielsen等[6]發(fā)現(xiàn)局部IL-6分泌增高引起唾液中IL-6的升高。IL-6是最主要的炎癥介質(zhì)，聯(lián)合IL-1β和TNF-α可刺激急性時(shí)相蛋白如CRP的產(chǎn)生，并激活骨髓釋放血小板。在筆者的試驗(yàn)中CRP和血小板亦升高，其可能與血液和口腔中炎癥因子升高有關(guān)。筆者試驗(yàn)亦證實(shí)活動(dòng)期CD患者唾液IL-6和TNF-α與口腔的特異性損害正相關(guān)，但I(xiàn)L-1β尚未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)性，這需進(jìn)一步進(jìn)行研究。

綜上所述，筆者研究表明活動(dòng)期CD患者的炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α均升高，具有診斷和預(yù)測(cè)的臨床價(jià)值。此外細(xì)胞因子與口腔損害有相關(guān)性，從而證實(shí)活動(dòng)期CD有口腔損害，因而對(duì)CD患者進(jìn)行口腔檢查和唾液檢測(cè)有助于治療和判斷預(yù)后。

[1] Van Assche G，Dignass A，Panes J，et al.The second European evidence-based consensus on the diagnosis and management of Crohn’s disease：definitions and diagnosis[J].J Crohns Colitis，2010，4（1）：63-101.

[2] Mach T，Szczeklik K，Garlicka M，et al.Oral ulceration in patient with active Crohn’s disease[J].Przegl Gastroenterol，2007，2（2）：210-213.

[3] Michailidou E，Arvanitidou S，Lombardi T，et al.Oral lesions leading to the diagnosis of Crohn disease： report on 5 patients[J].Quintessence Int，2009，40（7）：581-588.

[4] Rowland M，F(xiàn)leming P，Bourke B.Looking in the mouth for Crohn’s disease[J].Inflamm Bowel Dis，2010，16（2）：332-337.

[5] Logan R M.Links between oral and gastrointestinal health[J].Curr Opin Support Palliat Care，2010，4（1）：31-35.

[6] Nielsen A，Nielsen N J，Schmedes A，et al.Saliva Interleukin-6 in patients with inflammatory bowel disease[J].Scand J Gastroenterol，2005，40（12）：1444-1448.

[7]郭健濱.探討多指標(biāo)評(píng)估小腸克羅恩病病變活動(dòng)程度的意義[J].現(xiàn)代消化及介入診療，2013，19（3）：177-179.

[8]袁曉艷，湯浩，姜敏.活動(dòng)期潰瘍性結(jié)腸炎患者血常規(guī)和凝血系列的變化[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，42（3）：267-268.

[9] Stein M，Lammert F ，Zimmer V，et al.Clinical periodontal and microbiologic parameters in patients with Crohn’s disease with consideration of the CARD15 genotype[J].J Periodontol，2010，81（4）：535-545.

[10] Brailo V，Vucicevic-Bores V，Lukac J，et al.Salivary and serum interleukin 1 beta， interleukin 6 and tumor necrosis factor alpha in patients with leukoplakia and oral cancer[J].Med Oral Patol Oral Cir Bucal，2012，17（1）：10-15.

[11] Zhang Y Y，Lin M，Zhang S T，et al.NF-κB-dependent cytokines in saliva and serum from patients with oral lichen planus： a study in an ethnic Chinese population[J].Cytokine，2008，41（2）：144-149.

The Study of Inflammatory Factors in the Saliva of Patients with Crohn’s Disease

OU L ing-bin.//Medical Innovation of China，2015，12（23）：061-063

Objective：To analyze the correlation of immune inflammation factor concentrations of interleukin 1β（IL-1β），interleukin 6 （IL-6） and tumor necrosis factor α （TNF-α） with active CD patients，then provide measurements for the diagnosis of Crohn’s disease （CD）.Method：48 patients with active CD and 42 patients with alleviate CD were selected in our hospital from 2011 to 2013， 45 subjects without CD were selected as the normal control group.All of them were performed blood and CRP tests，the IL-1β，IL-6 and TNF-α of them were tested by R&D SYSTEMS，then compared the differences of them.Result： Compared to normal control group， active CD group and alleviate CD group with body mass index （BMI）， RBC and Hb decreased，the WBC，PLT and CRP increased，the differences were statistically significant（P＜0.05）； compared active CD group and alleviate CD group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.The active CD group of IL-1β was （282.3±52.1）pg/mL， IL-6 was （13.1±4.3）pg/mL，TNF-α was （32.9±8.6）pg/mL；the alleviate CD group was respectively （192.1±42.1）pg/mL，（7.1±3.1）pg/mL and （10.3±6.2）pg/mL；the normal control group was respectively（180.0±37.1）pg/mL，（6.2±1.2）pg/mL and （8.6±2.9）pg/mL. Saliva of IL-1，IL-6 and TNF-α in active CD group increased significantly than alleviate CD group and normal control group，the differences were statistically significant（P＜0.01）；but compared the alleviate CD group and normal control group， the differences were no statistically significance（P＞0.05）. Conclusion：Activity of CD patients oral specificity damage has associate with hemoglobin， platelet， CRP and BMI， saliva IL-6 and TNF-α has associate with specific oral lesions， the inflammatory cytokines can be used as detection indicator of activity in patients with CD.

Crohn’s disease； Interleukin 1β； Interleukin 6； Tumor necrosis factor α； Oral lesions

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.23.021

2015-01-13） （本文編輯：周亞杰）

2012年湖南省職業(yè)院校教育教學(xué)改革研究項(xiàng)目重點(diǎn)項(xiàng)目（ZJA2012007）

①湖南省永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 湖南 永州 425000

歐陵斌

First-author’s address：Yongzhou Vocational Technical College，Yongzhou 425000，China