王增輝（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局 262200）

犬冠狀病毒病的診斷與治療

王增輝（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局 262200）

近年來(lái)，隨著寵物飼養(yǎng)量的迅速增加，類似犬瘟熱、犬細(xì)小病毒等傳染性疾病也日趨增多。如何快速準(zhǔn)確診斷治療患病動(dòng)物是目前基層獸醫(yī)工作者面臨的亟待解決的難題。在工作期間，遇到犬冠狀病毒病病例，對(duì)其進(jìn)行了診療，效果良好，現(xiàn)將對(duì)患犬犬冠狀病毒的診斷和治療方法作一總結(jié)，以期為從事獸醫(yī)工作的同行能準(zhǔn)確診斷和有效治療該病提供參考。

1 犬冠狀病毒病的基本特點(diǎn)

犬冠狀病毒（CCV）屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，病毒呈圓形或橢圓形，直徑在50～150nm左右，有囊膜，囊膜表面有長(zhǎng)約20nm的纖突，病毒核酸為單股正鏈RNA，病毒囊膜內(nèi)含有不分段的正股RNA，基因組大小為27～32kb，基因5′端的2/3是兩個(gè)大的開(kāi)放閱讀框（ORF）la和lb，編碼兩個(gè)多聚蛋白誘導(dǎo)病毒復(fù)制酶的形成。ORFlb的下游有8～10個(gè)小ORF，表達(dá)完整的mRNA，并編碼結(jié)構(gòu)蛋S（ORF2）、E（ORF4）、M（ORF5）、核蛋白（N）以及大量的假定非結(jié)構(gòu)蛋白。核衣殼呈絲狀，直徑為9～13nm，螺旋對(duì)稱。電鏡負(fù)染可清楚地看到病毒粒子的冠，表面突起。衣殼由糖蛋白（S），膜蛋白（M），小膜蛋白（E）和核蛋白（N）4種結(jié)構(gòu)蛋白組成。作為三聚體的棘突（S）蛋白，分子量180～220kD，主要誘導(dǎo)產(chǎn)生病毒的中和抗體（Gebauer等，1991），形成特有的病毒膜粒，其上有同細(xì)胞受體結(jié)合的病毒附件，使病毒-細(xì)胞融合。

犬冠狀病毒不耐熱，對(duì)乙醚、氯仿、苯酚、去氧膽酸鹽、次氯酸鹽及β-內(nèi)酯敏感，易被福爾馬林、紫外線等滅活；反復(fù)凍融和長(zhǎng)期存放易導(dǎo)致纖突脫落，使病毒感染性喪失。但在20～22℃的酸性環(huán)境（pH3.0）中不被滅活。在冬季其傳染性可持續(xù)數(shù)月。

病毒可在犬或貓的多種細(xì)胞上增殖，包括犬原代腎或胸腺細(xì)胞以及犬胸腺、滑液及纖維肉瘤（A72）的細(xì)胞系、貓腎原細(xì)胞系（CrFK）及胎貓成纖維細(xì)胞。通常在感染后2～3d產(chǎn)生細(xì)胞病變，但也有不產(chǎn)生者。A72細(xì)胞最為穩(wěn)定，且可產(chǎn)生空斑，細(xì)胞病變主要為出現(xiàn)腫大的異形細(xì)胞，有的可產(chǎn)生大合胞體。

2 犬冠狀病毒病的流行特點(diǎn)

犬冠狀病毒感染是由犬冠狀病毒引起犬急性胃腸炎的重要原因之一。既可單獨(dú)致病，也可與犬細(xì)小病毒、輪狀病毒和魏氏梭菌等病原混合感染，混合感染死亡率大大高于單獨(dú)感染。犬糞中的病毒是主要傳染源，發(fā)病率隨犬群的密度增加而增加，呈現(xiàn)急性胃腸炎綜合癥，表現(xiàn)為劇烈嘔吐、腹瀉、精神沉郁和食欲廢絕。

所有品種及年齡的犬都易感，還包括犬科的野生動(dòng)物，如：郊狼、狐。其他非犬科動(dòng)物未見(jiàn)感染CCV的報(bào)道，有些毒株可感染豬和貓。幼齡警犬（德國(guó)牧羊犬）最易感，而成年犬多為無(wú)癥狀感染。2～4月齡發(fā)病率最高，2～3日齡仔犬常成窩死亡。CCV感染的發(fā)病率較低，據(jù)報(bào)道，約為30%，其發(fā)生和嚴(yán)重程度常與斷乳、運(yùn)輸、氣溫驟變、飼養(yǎng)條件惡化等應(yīng)激因素和年齡及混合感染有關(guān)。病犬和帶毒犬的糞便中含有大量CCV，同時(shí)也有證據(jù)證明顯示CCV存在垂直傳播的可能性。

病犬和帶毒犬是本病的主要傳染源。經(jīng)呼吸道、消化道隨口涎、鼻液、糞便等排毒，污染飼料、飲水、籠具和周圍環(huán)境，直接或見(jiàn)接地傳給易感動(dòng)物。Keenan等（1976年）的實(shí)驗(yàn)表明，CCV在糞便中可存活6～9d，在水中也可保持?jǐn)?shù)日的傳染性，因此，一旦發(fā)病，很難制止傳播流行。CCV主要存在于感染犬的糞便，腸內(nèi)容物、腸上皮細(xì)胞和腸系膜淋巴結(jié)內(nèi)，但在健康犬的心、肺、肝、脾、腎及淋巴結(jié)中也發(fā)現(xiàn)有冠狀病毒樣粒子。

病毒非經(jīng)腸接種并不引致腸道感染，且不排毒，盡管其血清抗體滴度較高，但并不能抵抗經(jīng)口感染。經(jīng)口感染的康復(fù)犬對(duì)同型毒株的再次感染有免疫力，但其血清抗體滴度可能不高，主要靠腸道IgA的保護(hù)作用。幼犬經(jīng)母乳獲得的抗體可維持4～5周，一般滴度不高，但可阻斷病毒的感染。豬傳染性胃腸炎病毒及貓傳染性腹膜炎病毒人工感染的犬，并不能獲得保護(hù)免受本病的感染。

早期病例可見(jiàn)小腸局部發(fā)炎臌氣，后期病例出現(xiàn)整個(gè)小腸炎性壞死，腸系膜淋巴結(jié)出血水腫，腸系膜血管呈樹(shù)枝樣淤血，漿膜紫紅；腸粘膜脫落，腸內(nèi)容物呈果醬樣，胃粘膜也見(jiàn)有出血；小腸常套疊；脾腫大；多數(shù)病犬不發(fā)熱，白細(xì)胞數(shù)略有降低，通?？稍?～10d內(nèi)康復(fù)。有些犬，特別是幼犬在發(fā)病的24～36h死亡。

3 犬冠狀病毒病的診斷方法

采用犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙（Antigen Rapid CCV Ag Test Kit）檢測(cè)CCV。該方法的原理：能以免疫色譜分析法定性地檢測(cè)犬糞便中的犬冠狀病毒抗原。試紙條表面有字母“T”和“C”作為測(cè)試紙的控制線。在提供任何樣品前，測(cè)試線和控制線在結(jié)果窗中都不顯示?？刂凭€被用作程序控制。如果測(cè)試正常地完成，控制線試劑會(huì)工作，而且控制線會(huì)始終顯示。如果在樣品中含有足夠的犬冠狀病毒抗原，1條紫色的測(cè)試線會(huì)在結(jié)果窗中顯示。在測(cè)試線處綁定了特異性的犬冠狀病毒抗體用來(lái)捕捉和檢測(cè)該抗原。這些能使Antigen犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙以高準(zhǔn)確度地識(shí)別犬糞便中的犬冠狀病毒抗原。

試驗(yàn)所用的試紙，迅速、簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確。準(zhǔn)確率在98%以上。CCV抗原快速檢測(cè)試紙是定性地檢測(cè)，不分品種和年齡差異。避開(kāi)了電鏡的負(fù)染、病毒的培養(yǎng)等過(guò)程，而且也節(jié)約了檢測(cè)用的時(shí)間和材料，在臨床上應(yīng)用較廣。

3.1 檢測(cè)試紙

犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙。

3.2 患病寵物犬

前來(lái)就診的12只寵物犬。品種包括：可卡、哈士奇、德國(guó)牧羊犬、博美、雪納瑞、金毛。

3.3 診斷方法

臨床檢查病犬的精神、體溫、呼吸、有無(wú)嘔吐及腹瀉等臨床癥狀，詢問(wèn)了解病犬年齡、是否免疫等情況，對(duì)病犬進(jìn)行初步診斷。

實(shí)驗(yàn)室診斷利用犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙進(jìn)行檢測(cè)。

測(cè)試步驟：用棉簽收集犬類的糞便作為樣品→將棉簽浸入裝有1ml反應(yīng)緩沖液的樣品收集管→將棉簽上的樣品和反應(yīng)緩沖液充分混勻→取出試紙，將它平放于寬敞和干燥的表面→用提供的滴管取出收集管中的混合液→用滴管向樣品孔中緩慢并且精確地加入4滴混合液→當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行時(shí)，會(huì)看到紫色的條帶在試紙中間的結(jié)果窗中移動(dòng)。如果1分鐘以后仍然沒(méi)有條帶移動(dòng)，請(qǐng)?jiān)偻鶚悠房字屑尤?滴混合液→5～10min后判斷結(jié)果。不要超過(guò)20min，測(cè)試過(guò)程圖解見(jiàn)圖1。

結(jié)果判定：如果在結(jié)果窗的左面出現(xiàn)1根條帶說(shuō)明測(cè)試是正常的。這條是控制線。結(jié)果窗的右面顯示測(cè)試結(jié)果。如果在結(jié)果窗的右面出現(xiàn)另1根條帶，這條是測(cè)試線。

陰性結(jié)果：如果在結(jié)果窗中只出現(xiàn)1根條帶說(shuō)明是陰性結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1 犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙步驟

圖2 犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙陰性結(jié)果

圖3 犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙陽(yáng)性結(jié)果

陽(yáng)性結(jié)果：如果在結(jié)果窗中出現(xiàn)兩根條帶（“T”“C”），無(wú)論哪條先出現(xiàn)都表明陽(yáng)性結(jié)果見(jiàn)圖3。

無(wú)效的結(jié)果：如果在反應(yīng)開(kāi)始后紫色條帶看不見(jiàn)，結(jié)果可被認(rèn)為是無(wú)效的?？赡苁褂梅椒ú划?dāng)或者試紙已經(jīng)變質(zhì)。推薦重新測(cè)試樣品見(jiàn)圖4。

4 治療方法

對(duì)于犬冠狀病毒病，一旦發(fā)生本病，按傳染病的規(guī)定防治措施進(jìn)行，無(wú)特效藥物，以對(duì)癥治療為主，對(duì)患病犬進(jìn)行靜脈輸液、止吐、消炎等以防脫水或繼發(fā)感染引起死亡。根據(jù)各患病犬的癥狀不同，分別對(duì)癥下藥，采用不同的處方，具體見(jiàn)表1。

表1 治療方法

圖4 犬冠狀病毒抗原快速檢測(cè)試紙無(wú)效結(jié)果

輸液治療療程一般7～10d，可以控制腹瀉和嘔吐等基本癥狀。以后，口服抗生素，一般為Marbocyl片劑，2mg/kg體重，連用10～25d。待飲食欲和大便正常時(shí)，可以口服驅(qū)蟲藥（汽巴或普沙）。

5 診斷結(jié)果

本病的臨床癥狀和流行病學(xué)與輪狀病毒感染相似，而且長(zhǎng)于輪狀病毒，犬細(xì)小病毒等混合感染，診斷較為困難。因此，運(yùn)用實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，如糞便病料的電鏡檢查，病毒分離或熒光抗體檢查對(duì)本病的確診具有重要意義。

臨床診斷結(jié)果，該病的發(fā)生物品種、年齡之分，患病犬幼犬較成年犬癥狀劇烈。嘔吐和腹瀉是本病的主要癥狀，初期先嘔吐未消化的食物，后吐黃色酸味粘液。繼而出現(xiàn)急性胃腸炎性腹瀉。糞便先稠后稀，最后成水樣。橙黃色，灰色或綠色。?；煊姓骋夯虬岛谏骸＞癯劣?，臥地懶動(dòng)，強(qiáng)行趕走，步態(tài)搖擺。食欲大減或無(wú)食欲。鼻鏡干燥，迅速消瘦，眼球下陷，脫水癥狀明顯。成年犬癥狀輕微。見(jiàn)表2。

實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，對(duì)12只CCV病犬進(jìn)行糞便鏡檢和試紙檢測(cè)，診斷結(jié)果糞便鏡檢一般無(wú)明顯變化，試紙檢測(cè)CCV均呈陽(yáng)性。具體見(jiàn)表3。

6 治療結(jié)果

12只CCV病犬，經(jīng)過(guò)治療，死亡6只，成活6只，死亡率為50.0%；單獨(dú)感染6只，成活4只，死亡率為25%；混合犬細(xì)小病毒感染及繼發(fā)其它疾病的犬有7只，成活3只，死亡率為66.7%。其中（序號(hào)9～12）的4只犬是成窩發(fā)病，癥狀很典型。

7 治療與預(yù)后

目前沒(méi)有犬冠狀病毒病的特效藥，所以其治療現(xiàn)在仍以對(duì)癥和支持療法為主，主要是進(jìn)行補(bǔ)液、抗菌、消炎、止吐止瀉和維持酸堿平衡等。同時(shí)對(duì)患病犬要求禁食禁水，防止食物等對(duì)胃腸道的進(jìn)一步刺激而造成病情的惡性循環(huán)。治療過(guò)程中，若病犬同時(shí)出現(xiàn)嘔吐和腹瀉癥狀時(shí)，應(yīng)先以治療嘔吐為主。在應(yīng)用抗生素進(jìn)行消炎的同時(shí)，應(yīng)注意不要長(zhǎng)時(shí)間地使用同一種抗菌素，也不應(yīng)該從一開(kāi)始就用最好的抗菌素，否則很容易產(chǎn)生抗藥性和依賴性?？股匾话憧山ㄗh使用2～3周左右。若病犬脫水極其嚴(yán)重及血常規(guī)指標(biāo)很低時(shí)，采取輸入犬血的方法是十分有效的。

表2 臨床診斷結(jié)果

表3 實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果

表4 治療及預(yù)后

在病犬的基本癥狀控制后的恢復(fù)階段要注意：不要飼喂太多或是腐敗的食物，以防止其消化道癥狀復(fù)發(fā)，特別是幼犬。最好在醫(yī)生的建議下選擇一些專門對(duì)犬胃腸道具有保護(hù)和調(diào)節(jié)功能的處方類罐頭（i/d），同時(shí)食用一些提高免疫力的藥物（IgY）。溫度盡量保持在26～29℃。病犬未完全康復(fù)以前最好不要洗澡，盡量減少出門，以防止繼發(fā)其他疾病。成年犬的治愈率很高，一般不出現(xiàn)死亡，以上治療的兩只（6、8號(hào)）成年犬全部成活，而且預(yù)后良好。