王淑霞

山東省萊西市城東醫(yī)院，山東萊西 266600

變異血紅蛋白對(duì)糖化血紅蛋白兩種檢測(cè)方法的干擾

王淑霞

山東省萊西市城東醫(yī)院，山東萊西 266600

目的 探討變異血紅蛋白對(duì)兩種基于HPLC方法測(cè)定糖化血紅蛋白結(jié)果的干擾。 方法 選取我院診斷的6種不同類型血紅蛋白變異者血液及嬰兒臍帶血共60份作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)選取我院體檢健康者血液60份作為對(duì)照組，分別使用AC-HPLC和IE-HPLC系統(tǒng)對(duì)兩組HbA1C進(jìn)行檢測(cè)，探討7種不同變異血紅蛋白對(duì)糖化血紅蛋白兩種檢測(cè)方法的干擾并分析其原因。 結(jié)果 在AC-HPLC檢測(cè)中，各變異血紅蛋白，與對(duì)照組相比，均無(wú)明顯差異，其HbA1C均與受測(cè)人員血糖濃度呈正相關(guān)。而在IE-HPLC檢測(cè)中，HbD、E、G、J、Q、S均明顯高于AC-HPLC和對(duì)照組中HbA1C水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但HbF變異蛋白檢測(cè)中未檢出HbA1C。 結(jié)論 IE-HPLC系統(tǒng)檢測(cè)糖化血紅蛋白時(shí)容易受變異血紅蛋白干擾，而AC-HPLC系統(tǒng)則不受其影響，值得推廣。

變異血紅蛋白；糖化血紅蛋白；檢測(cè)方法；干擾

糖尿病是全世界主要的公共健康問(wèn)題，已經(jīng)影響了數(shù)億人，在中國(guó)同樣情況嚴(yán)重[1]。其主要檢測(cè)指標(biāo)為空腹血糖、餐后2h血糖及OGTT。2010年美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)（ADA）將糖化血紅蛋白（HbA1C）檢測(cè)作為篩選和診斷糖尿病指標(biāo)[2]。國(guó)內(nèi)臨床檢驗(yàn)的主管部門也提倡重視HbA1C測(cè)定技術(shù)及量值溯源[3]。目前，離子交換-高效液相色譜法（IE-HPLC）檢測(cè)HbA1C被認(rèn)為是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)方法[4-5]。近年來(lái)，親和層析-高效液相色譜（AC-HPLC）受到廣泛認(rèn)同，為此，我院選用6種不同類型變異血紅蛋白和嬰兒HbF，探討其對(duì)糖化血紅蛋白兩種檢測(cè)方法的干擾，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)組 選取2014年1～8月于我院確診為存在異常血紅蛋白（HbD、E、G、J、Q、S、F）的患者60例為實(shí)驗(yàn)組，將實(shí)驗(yàn)組按血紅蛋白異常機(jī)制分為兩個(gè)亞組，A組35例，包括變異HbD、E、G、J、Q、S患者血液6、11、6、3、6、3份，共35份；B組25例，為正常嬰兒臍帶血，其中包含人變異血紅蛋白F（HbF濃度約為70%[6]）。納入者存在異常血紅蛋白、無(wú)嚴(yán)重肝腎疾病、無(wú)腫瘤、無(wú)血液系統(tǒng)其他疾病、無(wú)糖尿病或妊娠期糖尿病史。

1.1.2 對(duì)照組 選取2014年1月～2014年8月于我院體檢健康者60例，抽取血液60份作為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)為電泳法測(cè)定無(wú)異常血紅蛋白、無(wú)嚴(yán)重肝腎疾病、無(wú)血液系統(tǒng)疾病、無(wú)糖尿病史。

1.2 方法

收集實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各60份血液，所有受測(cè)人員均取空腹靜脈血，儲(chǔ)存于-80℃環(huán)境下，分別使用AC-HPLC和IE-HPLC系統(tǒng)測(cè)定兩組人員HbA1C，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較。AC-HPLC系統(tǒng)工作原理是葡萄糖和血紅蛋白穩(wěn)定結(jié)合后都會(huì)產(chǎn)生順位二醇官能團(tuán)， 后者能與硼酸鹽特異性結(jié)合，進(jìn)而分離測(cè)定HbA1C。IE-HPLC系統(tǒng)工作原理是利用HbA1C與其他Hb電荷的不同分離HbA1C。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 A組異常血紅蛋白對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾

對(duì)照組兩種方法檢測(cè)結(jié)果相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；A組兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)采用AC-HPLC時(shí)，A組與對(duì)照組無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；同時(shí)采用IE-HPLC時(shí)，A組與對(duì)照組有明顯差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在各型異常血紅蛋白的HbA1C檢測(cè)中，AC-HPLC所得結(jié)果與患者空腹血糖呈明顯正相關(guān)性，而IEHPLC檢測(cè)結(jié)果與空腹血糖相比有增有減，無(wú)明顯相關(guān)性。詳見表1、2。

2.2 B組血紅蛋白對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾

使用AC-HPLC檢測(cè)時(shí)，B組與對(duì)照組差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且各型與對(duì)應(yīng)受測(cè)人員的血糖相近，而使用IE-HPLC檢測(cè)時(shí)未檢出HbA1C。詳見表3、4。

表1 A組與對(duì)照組HbA1C檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

表2 A組患者各異常血紅蛋白HbA1C檢測(cè)結(jié)果比較

表3 B組HbA1C檢測(cè)結(jié)果

3 討論

HbAlC是監(jiān)測(cè)糖尿病血糖控制的金標(biāo)準(zhǔn)[7]。其量與血糖濃度呈正相關(guān)，由于紅細(xì)胞在血循環(huán)中的壽命約為120d，因此HbA1C可反映患者近8～12周平均血糖水平。但HbA1C易受檢測(cè)方法、貧血和血紅蛋白異常疾病等諸多因素影響。異常Hb主要源自變異Hb和珠蛋白生成障礙[8]。而大部分血紅蛋白變異體不會(huì)產(chǎn)生任何臨床癥狀[9]。因此，異常血紅蛋白會(huì)對(duì)HbA1C的檢測(cè)產(chǎn)生不同程度的干擾而可不被發(fā)現(xiàn)。不同的檢測(cè)方法，異常Hb會(huì)導(dǎo)致HbA1C值的假性升高或降低[10]。主要是因?yàn)椴煌淖儺怘b峰值與糖化血紅蛋白達(dá)到峰值的時(shí)間順序有關(guān)。本研究中兩種不同系統(tǒng)原理不同，其中，IE-HPLC主要是利用糖化血紅蛋白的帶電性不同于其他蛋白將其分離出，而與糖化血紅蛋白帶電性相近的異常血紅蛋白也會(huì)隨之分離出來(lái)，AC-HPLC分離血紅蛋白是基于其表面的糖基，糖基化的血紅蛋白可與硼酸鹽特異性結(jié)合而析出，具有良好的特異性。我國(guó)最常見的異常血紅蛋白為HbG、D、Q、J和E[11]。因此，我院選取常見異常血紅蛋白HbG、D、Q、J、E、S和嬰兒HbF對(duì)兩種檢測(cè)方法進(jìn)行分析.結(jié)果顯示，在AC-HPLC檢測(cè)中，所有變異血紅蛋白均與HbA1C無(wú)明顯差異，且HbA1C與相應(yīng)受試人員血糖呈正相關(guān)，而在IE-HPLC檢測(cè)中，HbD、E、G、J、Q、S雖均可與糖化血紅蛋白分離開，但因分離峰值先后順序不同，從而使HbA1C值升高或降低，而HbF與HbA1C峰值重合，無(wú)法分辨兩種蛋白。另外，有規(guī)律地定期檢測(cè)HbA1C，可有效地預(yù)防糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生[12]。國(guó)內(nèi)臨床檢驗(yàn)的主管部門也提倡重視GHb測(cè)定技術(shù)及量值溯源[13-14]。因此我們得出，AC-HPLC對(duì)于糖化血紅蛋白的分離優(yōu)于IE-HPLC，不受變異血紅蛋白的影響，特異性強(qiáng)，值得臨床推廣。

表4 B組具體HbA1C檢測(cè)結(jié)果

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Interference study of variability hemoglobin in the two detection methods of glycosylated hemoglobin

WANG Shuxia
East Hospital of Laixi City, Shandong, Laixi 266600, China

Objective To study the interference of variability hemoglobin in the detection results of glycosylated hemoglobin of the two HPLC methods. Methods 60 patients with 6 kinds of different types of variability hemoglobin and infant umbilical cord blood who were diagnosed in our hospital were selected as the experimental group, while the other 60 cases of healthy blood were selected as the control group. To study and analyze the interference causes of 7 kinds of variability hemoglobin in the two detection methods. Results Of the AC-HPLC detection, all kinds of variability hemoglobin between the two groups were no significant differences, HbA1C of tested personnel was positive correlation with blood glucose concentration. HbA1C levels of HbD、E、G、J、Q、S in IE-HPLC detection were higher than which in AC-HPLC, the difference had statistical significance(P＜0.05), but HbA1C wasn’t detected in HbF variability hemoglobin. Conclusion Glycosylated hemoglobin of IE-HPLC detection could easily be interfered by variability hemoglobin, while AC-HPLC detection is not affected and is worthy of popularization.

Variability hemoglobin; Glycosylated hemoglobin; Detection methods; Interference

R446.1

B

2095-0616（2015）07-143-03

2014-12-02）