劉玉線 劉冬霞 張廣清

廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東清遠(yuǎn) 511500

228例新生兒血培養(yǎng)分離菌及耐藥性分析

劉玉線 劉冬霞 張廣清

廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東清遠(yuǎn) 511500

目的 了解本院新生兒血培養(yǎng)的病原菌構(gòu)成及耐藥性情況，為指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗菌藥物，提供客觀依據(jù)。 方法 采用法國(guó)生物梅里埃公司BacT/Alert 3D血培養(yǎng)儀進(jìn)行血培養(yǎng)，所有菌株采用珠海黑馬生物有限公司DL-96Ⅱ型全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定及藥敏試驗(yàn)。 結(jié)果 送檢的4867例新生兒血培養(yǎng)陽(yáng)性228例，陽(yáng)性率4.68%。其中革蘭陽(yáng)性菌153株，占67.1%，并以表皮葡萄球菌為主，占42.1%；革蘭陰性菌73株，占32.0%。藥敏結(jié)果顯示革蘭陽(yáng)性菌對(duì)青霉素G耐藥率最高，對(duì)萬(wàn)古霉素、利奈唑胺、替考拉寧100.0%敏感；革蘭陰性菌對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物均敏感。 結(jié)論 本院新生兒敗血癥病原菌以凝固酶陰性葡萄球菌為主，臨床醫(yī)生及時(shí)了解血培養(yǎng)的結(jié)果并采取針對(duì)性抗菌治療，提高治愈率和控制交叉感染有重要意義。

血培養(yǎng)；新生兒敗血癥；病原菌；耐藥性

新生兒敗血癥是細(xì)菌或真菌侵入新生兒血液循環(huán)，并在其中生長(zhǎng)、繁殖、產(chǎn)生毒素，進(jìn)而引發(fā)的全身性炎癥反應(yīng)，是新生兒時(shí)期的嚴(yán)重感染性疾病。新生兒期細(xì)菌感染性疾病，其治療成功的關(guān)鍵在于盡早明確病原菌，盡早選用有效的抗生素。本研究通過(guò)對(duì)我院2013年1月～2014年6月228份新生兒敗血癥血培養(yǎng)病原菌和耐藥性的回顧性分析，經(jīng)統(tǒng)計(jì)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

2013年1月～2014年6月來(lái)自我院的新生兒科以及兒科住院送檢的4867例血培養(yǎng)標(biāo)本。

1.2儀器與試劑

采用法國(guó)生物梅里埃公司BacT/Alert 3D血培養(yǎng)儀及配套血培養(yǎng)瓶；珠海黑馬生物有限公司DL-96Ⅱ型全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥物分析儀進(jìn)行菌株鑒定及藥敏試驗(yàn)（采用微生物代謝技術(shù)及雙岐矩陣分析進(jìn)行微生物鑒定，微量肉湯稀釋法進(jìn)行MIC測(cè)定）。

1.3菌種分離與鑒定

4867例患兒在應(yīng)用抗生素之前嚴(yán)格無(wú)菌抽取新生兒靜脈血2～5mL注入BACT/ALERT3D血培養(yǎng)瓶，血液與增菌液1∶10，經(jīng)血培養(yǎng)儀增菌培養(yǎng)，對(duì)儀器報(bào)警為陽(yáng)性者轉(zhuǎn)種血平板、麥康凱平板、沙保羅平板進(jìn)行分離純化，經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24h后，挑取生長(zhǎng)菌落，革蘭氏染色鏡檢，根據(jù)鏡檢結(jié)果選擇相應(yīng)的觸酶或氧化酶試驗(yàn)，按迪爾96-Ⅱ系統(tǒng)操作鑒定和藥敏試驗(yàn)。

1.4質(zhì)控菌株

購(gòu)自廣東省臨檢中心的大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853。

2　結(jié) 果

2.1病原菌分離情況

4867例新生兒敗血癥血培養(yǎng)陽(yáng)性228例，其中革蘭陽(yáng)性菌153例，占67.1%；革蘭陰性菌73例，占32%；真菌2例。革蘭陽(yáng)性菌前三位是表皮葡萄球菌占42.1%，金黃色葡萄球菌占14.0%，溶血葡萄球菌占4.8%；革蘭陰性菌中前三位是大腸埃希氏菌占8.3%，鮑曼不動(dòng)桿菌屬占6.1%，肺炎克雷伯桿菌占5.3%。見(jiàn)表1。

表1　228株病原菌的構(gòu)成情況

2.2228例病原菌的耐藥性分析

葡萄球菌對(duì)米諾環(huán)素、利奈唑胺、替考拉寧和萬(wàn)古霉素的100.0%敏感，對(duì)青霉素、頭胞西丁、紅霉素、復(fù)方新諾明、克拉霉素、諾氟沙星、阿奇霉素耐藥率均大于30.0%，各種抗生素耐藥率見(jiàn)表2。革蘭氏陰性菌對(duì)頭孢哌酮/舒坦、左氧氟沙星，亞胺培南，美羅培南，米諾霉素，阿米卡星的耐藥率均較低，對(duì)氨芐青霉素耐藥率較高（＞89.0%），耐藥率詳見(jiàn)表3。

3　討論

新生兒敗血癥是新生兒期病原菌侵入血液循環(huán)并在其中生長(zhǎng)繁殖及產(chǎn)生毒素而造成的全身感染[1]。尤其是低體重出生兒、早產(chǎn)兒較易感染，它有較高的發(fā)，病率和死亡率。在中國(guó)，雖然新生兒死亡率從1991年的33.1%下降到2001年的21.4%，但仍然保持較高的水平[2]。由于其臨床表現(xiàn)無(wú)明顯特異性，主要表現(xiàn)黃疸加重或退而復(fù)現(xiàn)、反應(yīng)差、拒食、體溫異常、呼吸暫停、腹脹、消化道出血、肺出血、多器官功能衰竭等表現(xiàn)，有時(shí)僅表現(xiàn)為其中1種，例如黃疸出現(xiàn)早，黃疸的程度高等[3]，因此必須盡早明確診斷，才能縮短治療時(shí)間。隨著全自動(dòng)血培養(yǎng)儀的廣泛應(yīng)用，不但提高了血培養(yǎng)的陽(yáng)性率，而且大大縮短了培養(yǎng)時(shí)間，因此血培養(yǎng)檢查是診斷敗血癥的重要方法。

表2　葡萄球菌對(duì)常用抗生素耐藥性[n（%）]

表3　革蘭陰性桿菌對(duì)常用抗生素耐藥性[n（%）]

本研究結(jié)果顯示，引起新生兒敗血癥的病原菌以葡萄球菌為主，其次是腸桿菌屬細(xì)菌[4]。凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）以上升趨勢(shì)成為新生兒血培養(yǎng)的首位菌[5]，其中又以表皮葡萄球菌為主，占42.1%，與國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道一致[6-7]。CNS是棲于皮膚和粘膜表面的條件致病菌，正常情況下不致病，但在免疫力降低或接受侵入性治療如各種靜脈置管、胃腸營(yíng)養(yǎng)時(shí)其感染風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加，有文獻(xiàn)報(bào)道，凝固酶陰性葡萄球菌可通過(guò)靜脈滴注、氣管插管等侵入性操作造成患兒血行感染[8-9]。清遠(yuǎn)市婦幼保健院新生兒科228例血流感染病原菌分析顯示革蘭氏陽(yáng)性菌占67.1%（153/228），CNS112株，占49.1%。以前曾認(rèn)為CNS為污染菌，致病性弱，但最近的研究表明，CNS具有胞外黏液物（ESS）等致病因子，有一定的致病能力[10]。同時(shí)凝固酶陰性葡萄球菌又是最常見(jiàn)的血培養(yǎng)污染菌，區(qū)分血培養(yǎng)中分離到的凝固酶陰性葡萄球菌是否是致病菌，需要結(jié)合實(shí)際情況分析判斷。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，葡萄球菌表現(xiàn)為多重耐藥，對(duì)青霉素、頭胞西丁、紅霉素、復(fù)方新諾明、克拉霉素、阿奇霉素的耐藥率均＞50.0%，葡萄球菌對(duì)左氧氟沙星、莫西沙星有較高的敏感性，未發(fā)現(xiàn)有耐萬(wàn)古霉素、替考拉寧、利奈唑胺、米諾環(huán)素的菌株，即萬(wàn)古霉素類對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌仍然有優(yōu)異的抗菌活性，其安全性也被臨床證實(shí)。但國(guó)外已多次報(bào)道分離出耐萬(wàn)古霉素的菌株[11-12]，隨著萬(wàn)古霉素臨床廣泛應(yīng)用，自然誘導(dǎo)產(chǎn)生耐萬(wàn)古霉素的耐甲氧西林葡萄球菌的可能性越來(lái)越大[13-14]，應(yīng)引起臨床醫(yī)生高度重視。本組調(diào)查資料顯示，新生兒血培養(yǎng)陽(yáng)性的陰性桿菌前三位是大腸埃希氏菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和肺炎克雷伯桿菌，這些菌株對(duì)頭孢哌酮/舒坦、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、亞胺培南、美羅培南、米諾霉素、阿米卡星表現(xiàn)了較低的耐藥率，未檢出對(duì)亞胺培南耐藥的菌株。肺炎克雷伯桿菌對(duì)氨芐西林天然耐藥，不宜選用。本研究雖然對(duì)左氧氟沙星耐藥率低，因哇諾酮類藥物對(duì)新生兒骨骼生長(zhǎng)不利，不宜采用，米諾霉素、慶大霉素都不適宜于新生兒治療。因此，在對(duì)革蘭陰性菌引起的血行件感染患者進(jìn)行治療時(shí)，碳青霉烯類是應(yīng)對(duì)B-內(nèi)酰胺酶（ESBIs）菌株最穩(wěn)定的抗菌藥物。由于臨床大量使用抗菌藥物，特別是3代頭孢菌素的濫用，腸桿菌產(chǎn)超廣譜B-內(nèi)酰胺酶菌株日益增加，造成多重耐藥株檢出率不斷升高，因此及時(shí)進(jìn)行病原菌的耐藥檢測(cè)，對(duì)指導(dǎo)臨床合理用藥、延緩細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生十分重要[15]。

調(diào)查顯示本院以凝固酶陰性葡萄球菌為常見(jiàn)致病菌，并呈多重耐藥性。凝固酶陰性的葡萄球菌既是主要的病原菌，也是最常見(jiàn)的血培養(yǎng)污染菌，臨床上要引起重視，注意鑒別。微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)血培養(yǎng)中細(xì)菌的分布及藥物敏感性試驗(yàn)的特點(diǎn)及時(shí)報(bào)告給臨床醫(yī)生，這將給臨床的早期診斷及合理用藥提供試驗(yàn)依據(jù)，有利于減少耐藥率的增加，提高患兒治愈率。同時(shí)，新生兒室應(yīng)注意室內(nèi)凈化與消毒，在對(duì)新生兒進(jìn)行各種治療和護(hù)理時(shí)，尤其是侵入性治療時(shí)，更要增強(qiáng)無(wú)菌操作觀念，嚴(yán)格管理種種導(dǎo)管的清潔和消毒，清除感染灶，預(yù)防和減少新生兒敗血癥的發(fā)生，減少抗菌藥物的使用，減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

[1] 戴自英，劉裕昆，汪復(fù).實(shí)用抗菌藥物學(xué)[M].第2版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1998：299.

[2] 鄭望春，葉曉濤，黃衍鋒.凝固酶陰性葡萄球菌致新生兒敗血癥的病原學(xué)及耐藥性分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2007，7（10）：1911-1912.

[3] 黎新桂，成霖.新生兒血培養(yǎng)的病原菌分布及耐藥分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（l6）：1976-1977.

[4] 金漢珍，黃德珉，官希吉.實(shí)用新生兒學(xué)[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：342-343.

[5] 胡紅兵，楊勞榮，夏維，等.凝固酶陰性葡萄球菌致新生兒敗血癥的病原學(xué)及體外耐藥監(jiān)測(cè)[J].中華醫(yī)學(xué)感染學(xué)雜志，2006，16（2）：227.

[6] 林茂銳，李明友，游楚明，等.新生兒血培養(yǎng)的病原菌及耐藥狀況分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（17）：1812-1813.

[7] 周曉兵，鄭雪輝，陳麗萍，等.新生兒敗血癥血培養(yǎng)中病原菌的分布及其耐藥性分析[J].中國(guó)醫(yī)師雜志，2010，12（6）：837-839.

[8] 王進(jìn)，梁軍，肖永紅.2008年Mohnarin血流感染病原菌構(gòu)成及耐藥性[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20（16）：2399-2404.

[9] SingletonRJ，WirsingEA，HaberlingDL，et al.Risk Factors for Lower respiratory tract infection death among infants in the United States，1999-2004[J].Pediatrics，2009，124（4）：e768-776.

[10] AmmendoliaMG，DiRosaR，MontanaroL，et a1.Slime production and expression of the slime-associated antigen by staphylococcal clinical isolates[J].J Clin Microbiol，1999，37（10）：3235-3238.

[11] 陳敏，周陶友，陳文昭，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染的臨床和耐藥性[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2004，l4（2）：223-225.

[12] 廖旭東.新生兒血流感染病原菌分布及耐藥性新趨勢(shì)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014,11（11）：109-111.

[13] 余加林，賈惠群，母燦榮，等.新生兒感染耐甲氧西林葡萄球菌的藥敏分析[J].兒科藥學(xué)，2001，7（1）：35-37.

[14] 徐會(huì)榮.87例新生兒敗血癥的主要病原菌及耐藥性分析[J].現(xiàn)代診斷與治療，2014,25（6）：1310.

[15] 郭清蓮，周新.醫(yī)源性感染革蘭陰性桿菌的耐藥性變遷[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2004，14（1）：89-90.

Pathogens and antibiotic resistance of lsolates from 228 cases newborn septicemia biood cultures

LIU Yuxian LIU Dongxia ZHANG Guangqing
Department of Laboratory,Qingyuan City Maternal and Child Health Hospital,Qingyuan 511500,China

Objective To investigate the pathogen constitutes of neonatal blood culture and drug resistance,provide an objective basis for clinical rational use of antimicrobial drugs. Methods France bioMérieux BacT/Alert 3D blood culture instrument was used for Blood culture,and DL-96Ⅱ-automatic bacterial identification system was used for bacterial identification and susceptibility testing. Results A total of 228 cases neonatal blood culture positive,the positive rate of 4.68%(228/4867).Gram-positive bacteria accounting for 67.1%(153/228),including staphylococcus epidermidis accounting(42.1%);Gram-negative bacteria(32.0%);Susceptibility results showed Gram-positive bacteria has the highest resistant rate to penicillin G,and has 100.0% sensitive rate for vancomycin,linezolid,teicoplanin;Gramnegative bacteria were sensitive to carbapenems antibiotics. Conclusion Hospital coagulase-negative staphylococci as the principal for our hospital neonatal septicemia pathogenic bacteria,clinicians keep abreast of the results of blood cultures and take appropriate antimicrobial therapy,is important for improve the cure rate and control of cross infection.

Blood culture;Neonatal sepsis;Pathogens;Resistance

R446.5

B

2095-0616（2015）09-123-04

（2015-01-30）