劉曉明雷 蓉,2劉永利王 璐

l.河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，河北石家莊 050011

HPLC同時(shí)測(cè)定益腦膠囊中五味子醇甲和五味子乙素的含量

劉曉明1雷 蓉1,2劉永利1王 璐1

l.河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，河北石家莊 050011

目的 建立使用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定益腦膠囊中五味子醇甲、五味子乙素的含量，完善、提高益腦膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 方法 Dikma RP-C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm；體積流量：1.0mL/min；柱溫：30℃。 結(jié)果 該方法的五味子醇甲線性范圍在0.01577～1.5768μg（r=0.9999），平均回收率為103.1%，RSD 為1.0%。五味子乙素線性范圍在0.004160～0.2080μg （r=0.9999），平均回收率為101.7%，RSD為1.2%。 結(jié)論 該方法可行、重復(fù)性好， 能有效控制益腦膠囊中五味子的質(zhì)量。

益腦膠囊；五味子醇甲；五味子乙素；高效液相色譜

益腦膠囊現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第五冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：WS3-B-1004-91，主要由龜甲膠、遠(yuǎn)志、龍骨、靈芝、五味子、麥冬、石菖蒲、黨參、人參、茯苓10味藥組成。該品種具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，滋腎健腦，益智安神的功效[1-3]。用于神經(jīng)衰弱，腦動(dòng)脈硬化引起的體倦頭暈，失眠多夢(mèng)，記憶力減退等屬于心肝腎不足，氣、陰兩虛患者[4-5]。本實(shí)驗(yàn)使用HPLC法研究了處方中五味子藥材的兩種化學(xué)成分五味子醇甲、五味子乙素的含量測(cè)定方法[6-7]。

1　儀器與試藥

儀器：Agilent 1260 高效液相色譜儀，Ultimate 3000 高效液相色譜儀。對(duì)照品：五味子醇甲（批號(hào)：110857-201211），五味子乙素（批號(hào)：11065-200710）。試劑：乙腈為色譜純，水為去離子水，其它試劑均為分析純。樣品：石家莊科迪藥業(yè)有限公司14批樣品，陰性樣品自制。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Dikma RP- C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），按下表梯度洗脫；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm；進(jìn)樣量：10μL，柱溫：30℃，分析周期：55min。在以上色譜條件下,對(duì)照品溶液與樣品溶液色譜圖見圖1，五味子醇甲、五味子乙素與其他成分分離度較好。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 分別取五味子醇甲對(duì)照品、五味子乙素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL分別含15μg、2μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品10粒內(nèi)容物，研細(xì)，取約2g，精密稱定，精密加入甲醇20mL，稱定重量，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

表1　梯度洗脫時(shí)間表

2.2.3陰性溶液的制備 根據(jù)處方及生產(chǎn)工藝制備缺五味子的陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，制成陰性樣品溶液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性試驗(yàn) 取陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示在與五味子醇甲、五味子乙素對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置無色譜峰，說明樣品中其他成分對(duì)五味子醇甲、五味子乙素的測(cè)定無干擾。對(duì)照品、供試品及陰性樣品色譜圖。見圖1。

圖1　 色譜圖

2.3.2線性關(guān)系考察 取五味子醇甲、五味子乙素對(duì)照品適量，分別配成濃度約為150μg/mL和20μg/mL的溶液作為母液。取配好的母液分別稀釋至其初始濃度的0.01、0.05、0.1、0.15、0.3倍，同母液共同作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。在上述色譜條件下,吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各10μL,注人高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X（μg），峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明五味子醇甲在0.01577～1.5768μg的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=33508119.95；X=1709.09，r=0.9999；五味子乙素在0.004160～0.2080μg的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=28430848.52，X=8796.98，r=0.9999。

2.3.3重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品9份，取樣量分別為1.6g、2.0g、2.4g，各3份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定含量，結(jié)果五味子醇甲平均含量為0.3066mg/g，RSD值0.5%（n=9）五味子乙素平均含量為0.1820mg/g，RSD值1.1%（n=9）。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，于0開始測(cè)定，以后間隔一定時(shí)間測(cè)定1次，記錄峰面積，結(jié)果五味子醇甲R(shí)SD為0.6%（n=5），五味子乙素RSD為0.7%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5回收率試驗(yàn)

2.3.5.1五味子醇甲回收率 精密稱取已知含量的益腦膠囊樣品（五味子醇甲的含量306.6μg/g）1.0g置具塞錐形瓶中，共稱取9份，分別精密加入濃度為52.51μg/mL的五味子醇甲對(duì)照品溶液4、6、10mL，每種濃度各處理三份樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果五味子醇甲的平均回收率為103.1%，RSD值1.0%（n=9）。

2.3.5.2五味子乙素回收率 精密稱取已知含量的益腦膠囊樣品（五味子乙素的含量18.20μg/g）1.0g置具塞錐形瓶中，共稱取9份，分別精密加入濃度為5.2μg/mL的五味子乙素對(duì)照品溶液3、4、5mL，每種濃度各處理三份樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果五味子乙素的平均回收率101.7%，RSD值1.2%（n=9）。

2.4樣品的測(cè)定

共計(jì)測(cè)定10批樣品，精密吸取適當(dāng)濃度的樣品溶液10μL連續(xù)進(jìn)樣2次，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中五味子醇甲、五味子乙素的含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2　樣品含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3　討論

3.1提取方法的選擇

在實(shí)驗(yàn)中比較了超聲提取和加熱回流提取的方法，結(jié)果顯示兩種提取方法所測(cè)含量的RD值＜2%，而超聲處理方法操作簡(jiǎn)單且節(jié)省能源，故本實(shí)驗(yàn)選擇使用超聲作為樣品提取方法。實(shí)驗(yàn)中首先選用了70%甲醇作為溶劑對(duì)樣品進(jìn)行提取，然后將70%甲醇提取液直接進(jìn)行分析，結(jié)果五味子醇甲和五味子乙素在梯度洗脫中分離度良好。于是實(shí)驗(yàn)中又進(jìn)一步考察了用不同濃度的甲醇溶液提取對(duì)樣品含量的影響。實(shí)驗(yàn)對(duì)同一批樣品，分別考察了用甲醇、70%甲醇、50%甲醇超聲提取的樣品進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明三種提取溶劑中以甲醇提取的樣品中五味子醇甲和五味子乙素的含量最高，故選擇甲醇作為樣品的提取溶劑[8-10]。在對(duì)樣品提取溶劑考察的同時(shí)本實(shí)驗(yàn)又對(duì)超聲提取時(shí)間進(jìn)行了考察，在選用同一種提取溶劑的情況下分別考察了30、40、60min的提取時(shí)間對(duì)含量的影響，結(jié)果三個(gè)時(shí)間所得含量無明顯差異，為節(jié)省能源和提取時(shí)間，所以選擇超聲提取時(shí)間為30min。

3.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選取

取五味子醇甲對(duì)照品、五味子乙素對(duì)照品，按正文方法制備對(duì)照品溶液，按正文色譜條件測(cè)定，使用二極管陣列檢測(cè)器在200～400nm范圍內(nèi)掃描光譜，結(jié)果顯示在250nm波長(zhǎng)處兩個(gè)化合物均有最大吸收，且中國(guó)藥典和文獻(xiàn)報(bào)道中五味子醇甲和五味子乙素的含量測(cè)定多選擇250nm，因此以250nm作為測(cè)定波長(zhǎng)[11-12]。

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Determination of schisandrin and γ-Schizandrin in Yinao capsules by HPLC

LIU Xiaoming LEI Rong LIU Yongli WANG Lu
1.Hebei Institute for Drug Control,Shijiazhuang 050011,China;2.School of Pharmacology,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,China

Objective To establish a HPLC method for the determination of schisandrin,γ-Schizandrin in Yinao Capsule. Methods The determination was performed by HPLC on Dikma RP-C18(250mm×4.6mm,5μm) column. The mobile phase consisted of acetonitrile (A)-0.1% phosphoric acid solution (B) with gradient elution at a flow rate of 1.0mL/min.The detection wavelength was 250nm. Results The linear range of schisandrin was 0.01577-1.5768μg, r=0.9999.The average recovery was 103.1%,RSD=1.0%.The linear range of γ-Schizandrin was 0.004160-0.2080μg, r=0.9999.The average recovery was 101.7%,RSD=1.2%. Conclusion The method is convenient,sensitive and accurate.It can be a method for quality control in production of Yinao capsule.

Yinao Capsule;Schisandrin;γ-Schizandrin;HPLC

R284.111,211

B

2095-0616（2015）09-52-03

（2015-02-15）