張壽斌黃呈輝李 濤廖 華肖 藝龍 瑜黃日妹譚慶瑜黃 艷

1.南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳寶安醫(yī)院兒科，廣東深圳 518100；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳寶安醫(yī)院感染內(nèi)科，廣東深圳518100

EV71病毒引起手足口病患兒免疫狀態(tài)變化分析

張壽斌1黃呈輝2李 濤1廖 華1肖 藝1龍 瑜1黃日妹1譚慶瑜1黃 艷1

1.南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳寶安醫(yī)院兒科，廣東深圳 518100；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳寶安醫(yī)院感染內(nèi)科，廣東深圳518100

目的 探討EV71病毒引起手足口病患兒免疫狀態(tài)變化。 方法 收集2013年6月～2014年12月我院收治的手足口病患兒120例，按照病情程度分為輕癥組、重癥組各60例，收集同期來(lái)我院進(jìn)行健康體檢的正常健康體檢兒童60例作為對(duì)照組，測(cè)定三組IL-10水平、體液免疫功能及細(xì)胞免疫。 結(jié)果 輕癥組、重癥組IgM、IL-10水平均高于對(duì)照組，重癥組IgG、IgA、IgM、IL-10水平高于輕癥組（P＜0.05）。輕癥組、重癥組CD16+56+、CD23+、CD19+高于對(duì)照組，CD25+低于對(duì)照組（P＜0.05），重癥組CD19+高于輕癥組，CD16+56+、CD25+低于輕癥組（P＜0.05）；重癥組CD4+、CD8+低于輕癥組及對(duì)照組（P＜0.05）。 結(jié)論EV71病毒引起的HFMD患兒存在細(xì)胞免疫、體液免疫功能紊亂，疾病程度越嚴(yán)重，細(xì)胞免疫、體液免疫功能紊亂程度越嚴(yán)重，應(yīng)提高重視，及時(shí)檢測(cè)，提高患兒的預(yù)后，降低死亡率。

手足口?。籈V71；免疫功能

手足口病（HFMD）是腸道病毒引起的常見(jiàn)傳染病之一，以科薩奇病毒16型（CVA16）和腸道病毒71型（EV71）感染最為常見(jiàn)[1]。患兒以口腔、手心、足底、臀部位散在紅色皰疹，可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等為主要臨床表現(xiàn)[2]。HFMD患兒疾病的預(yù)后隨著病情的不同而有較大的差異，大部分患兒給予及時(shí)有效的對(duì)癥治療后可痊愈，但少數(shù)重癥患兒可并發(fā)心肌炎、肺水腫、肺出血、腦炎、心力衰竭等并發(fā)癥，危及患兒的生命健康[3]。本研究收集我院收治的手足口病患兒，依據(jù)病情程度分為輕癥組及重癥組，并檢測(cè)其免疫狀態(tài)的變化，觀(guān)察與疾病程度的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2013年6月～2014年12月我院收治的HFMD患兒120例，均符合衛(wèi)生部發(fā)布《手足口病診療指南》（2010年版）的HFMD診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，并且確定為EV71病毒引起。按照《手足口病診療指南》（2010年版）的標(biāo)準(zhǔn)將120例HFMD患兒分為輕癥組和重癥組[4]，輕癥組60例，男29例，女31例，年齡10個(gè)月～4.5歲，平均（2.7±0.4）歲，主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱伴手、足、口、臀部皮疹；重癥組60例，男25例，女35例，年齡11個(gè)月～4.3歲，平均（2.9±0.5）歲，均有神經(jīng)系統(tǒng)受累、呼吸或循環(huán)功能障礙等表現(xiàn)；收集同期來(lái)我院進(jìn)行健康體檢的正常健康體檢兒童60例作為對(duì)照組，男27例，女33例，年齡10個(gè)月～5歲，平均年齡（2.5±0.6）歲，三組患兒的年齡、性別等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

表1　三組免疫球蛋白及IL-10水平比較

表1　三組免疫球蛋白及IL-10水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與輕癥組比較，#P＜0.05

組別　n　IgG（g/L）　IgA（g/L）　IgM（g/L）　IL-10（ng/L）對(duì)照組　60　7.67±1.29　0.74±0.12　1.08±0.17　58.97±4.32輕癥組　60　8.12±1.31　0.79±0.15　1.43±0.22*　176.05±6.17*重癥組　60　11.53±1.96#　1.48±0.27#　1.82±0.31*#　294.41±10.04*#F 4.31　3.85　4.06　9.50 P＜0.05　?。?.05　?。?.05　?。?.05

表2　三組淋巴細(xì)胞亞群比較

表2　三組淋巴細(xì)胞亞群比較

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與輕癥組比較，#P＜0.05

組別　n　CD4+　CD8+　CD16+56+　CD23+　CD25+　CD19+對(duì)照組　60　37.91±6.31　26.14±4.37　21.09±3.51　5.98±0.85　7.31±1.25　17.52±2.79輕癥組　60　38.32±6.47　27.58±4.62　26.47±4.38*　14.75±2.63*　5.06±0.87*　21.83±3.64*重癥組　60　28.15±4.73*#　21.46±3.57*#　11.86±1.97*#　17.21±3.19*　3.82±0.64*#　31.59±5.28*#F 6.32　4.59　8.25　10.06　3.97　9.17 P＜0.05　　＜0.05　?。?.05　?。?.05　?。?.05　　＜0.05

1.2研究方法

留取靜脈EDTA抗凝血3mL。（1）IL-10表達(dá)測(cè)定和分析：取靜脈EDTA抗凝血1mL。采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定IL-10的濃度，按照試劑盒（美國(guó)R&D公司生產(chǎn)）說(shuō)明操作。（2）體液免疫功能IgA、IgG、IgM檢測(cè)：采用HITACHI7600型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，采用免疫透射比濁法測(cè)定。（3）細(xì)胞免疫應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)項(xiàng)目包括：CD4+、CD8+、CD16+56+、CD23+、CD25+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，以及CD19+B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。流式細(xì)胞儀（FCM）分析10000個(gè)以上細(xì)胞。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。計(jì)量資料以表示，組間比較用單因素方差分析及t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1三組免疫球蛋白及IL-10水平比較

輕癥組、重癥組IgM、IL-10水平均高于對(duì)照組，重癥組IgG、IgA、IgM、IL-10水平高于輕癥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2三組淋巴細(xì)胞亞群比較

輕癥組、重癥組CD16+56+、CD23+、CD19+高于對(duì)照組，CD25+低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），重癥組CD19+高于輕癥組，CD16+56+、CD25+低于輕癥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；重癥組CD4+、CD8+低于輕癥組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

3　討論

HFMD是由腸道病毒感染導(dǎo)致的傳染性疾病，在各個(gè)年齡均可發(fā)病，但由于小兒免疫系統(tǒng)功能還沒(méi)有發(fā)育完全，且處于較大的變化之中，因此，HFMD多見(jiàn)于5歲以下的嬰幼兒，全年均可發(fā)病，但在夏、秋季節(jié)發(fā)病率相對(duì)較高，傳染性較強(qiáng)，流行速度快，常群體性發(fā)病[5]。HFMD主要的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹，重癥患兒出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，如腦干腦炎、血管神經(jīng)性肺水腫等，使患兒的生長(zhǎng)發(fā)育受到嚴(yán)重影響，嚴(yán)重者甚至危及到生命安全。

HFMD患兒體內(nèi)存在過(guò)度炎癥反應(yīng)現(xiàn)象，IL-10是中性粒細(xì)胞的趨化和活化因子，是重要的免疫調(diào)節(jié)因子之一，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，主要表現(xiàn)在趨化性的作用中，主要為誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)的改變，釋放超氧化物和溶酶體酶，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[6]。輕癥組、重癥組IL-10水平均高于對(duì)照組，重癥組高于輕癥組（P＜0.05）。提示HFMD患兒機(jī)體存在炎癥反應(yīng)，體內(nèi)IL-10存在過(guò)度表達(dá)，并隨著炎癥反應(yīng)進(jìn)展持續(xù)大量產(chǎn)生，患兒免疫狀態(tài)紊亂。IL-10主要是由Th2細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，抑制Th1細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞增殖和活化，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖和活化，可對(duì)Th細(xì)胞免疫平衡進(jìn)行調(diào)節(jié)，使過(guò)度的免疫反應(yīng)受到抑制[7]，IL-10水平較高提示患兒存在細(xì)胞免疫的異常，推測(cè)可能是小兒的免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，對(duì)輕度炎癥刺激反應(yīng)不靈敏導(dǎo)致[8]。

在HFMD發(fā)病過(guò)程中體液免疫具有重要的免疫監(jiān)視及病毒感染預(yù)防作用，體液免疫是機(jī)體特異性免疫的重要組成部分。其中IgG是初級(jí)免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體，僅以單體形式存在，主要用于中和多種病原體及其有害代謝產(chǎn)物[9]。輕癥HFMD患兒IgM與對(duì)照組比較明顯較高，主要由于急性感染期體內(nèi)的體液免疫被激活，產(chǎn)生抗體中和病毒，延緩疾病的進(jìn)展[10]。重癥組IgG、IgA、IgM水平高于輕癥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示隨著手足口病疾病越來(lái)越嚴(yán)重，體液免疫能力增強(qiáng)，該結(jié)果與相關(guān)報(bào)道具有一致性[11]。

在免疫應(yīng)答過(guò)程中，末梢血淋巴細(xì)胞發(fā)育分化成為T(mén)、B、NK細(xì)胞等功能不同的亞群，生理狀態(tài)下T細(xì)胞的多個(gè)亞群相對(duì)平衡、穩(wěn)定對(duì)機(jī)體免疫功能起著調(diào)節(jié)作用，維持著機(jī)體的正常免疫應(yīng)答反應(yīng)[5]。當(dāng)亞群的數(shù)量及功能發(fā)生異常時(shí)，導(dǎo)致機(jī)體免疫紊亂并產(chǎn)生病理變化[12]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞通過(guò)釋放多種細(xì)胞因子參與機(jī)體的免疫應(yīng)答在手足口病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起了重要的介導(dǎo)作用。研究發(fā)現(xiàn)，輕癥組、重癥組CD16+56+、CD23+、CD19+高于對(duì)照組，CD25+低于對(duì)照組（P＜0.05），重癥組CD19+高于輕癥組，CD16+56+、CD25+低于輕癥組（P＜0.05）；重癥組CD4+、CD8+低于輕癥組及對(duì)照組（P＜0.05），說(shuō)明EV71病毒引起的HFMD患兒存在細(xì)胞免疫功能紊亂，紊亂程度隨疾病程度加重。臨床通常根據(jù)T細(xì)胞亞群判定機(jī)體免疫細(xì)胞功能，T細(xì)胞中CD8+、CD4+兩者的比值為機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境指標(biāo)[13]；輕癥組、重癥組CD25+較對(duì)照組明顯降低提示HFMD患兒T淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞均顯著降低，患兒機(jī)體的細(xì)胞免疫功能下降，抵御病毒感染的能力降低，不能將受感染的細(xì)胞有效殺滅，延長(zhǎng)了病程，而機(jī)體的免疫功能又由于病程的延長(zhǎng)而進(jìn)一步受損，導(dǎo)致病情越來(lái)越嚴(yán)重[14]。HFMD患兒CD23+較對(duì)照組升高，但輕癥組和重癥組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，CD23+主要存在于B淋巴細(xì)胞表面，是B淋巴細(xì)胞活化的標(biāo)志之一[15]。有報(bào)道表明，對(duì)腸道病毒感染主要是T淋巴細(xì)胞或NK細(xì)胞參與防御，在機(jī)體有病毒入侵時(shí)，NK細(xì)胞首先參與應(yīng)答，NK細(xì)胞為固有的免疫應(yīng)答細(xì)胞，無(wú)需抗原致敏，可對(duì)病毒感染的靶細(xì)胞直接進(jìn)行殺傷，是機(jī)體防御病毒感染的第一道防線(xiàn)[16]。

綜上所述，EV71病毒引起的HFMD患兒存在細(xì)胞免疫、體液免疫功能紊亂，疾病程度越嚴(yán)重，細(xì)胞免疫、體液免疫功能紊亂程度越嚴(yán)重。提示對(duì)HFMD患兒入院時(shí)應(yīng)對(duì)上述三項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行及時(shí)檢測(cè)并觀(guān)察變化，與患兒的臨床表現(xiàn)相結(jié)合，使重癥患兒在早期就可準(zhǔn)確的識(shí)別并及時(shí)采用相應(yīng)的措施干預(yù)，以延緩疾病的進(jìn)展，以提高患兒的預(yù)后，降低死亡率。

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Analysis on the change of HFMD caused by EV71 virus immune status of children

ZHANG Shoubin1HUANG Chenghui2LI Tao1LIAO Hua1XIAO Yi1LONG Yu1HUANG Rimei1TAN Qingyu1HUANG Yan1
1.Department of Pediatrics，Southern Medical University Affiliated of Shenzhen Baoan Hospital, Shenzhen 518100, China;
2.Department of Infectious, Southern Medical University Affiliated of Shenzhen Baoan Hospital, Shenzhen 518100, China

Objective To investigate the cause of EV71 HFMD child immunization status changes. Methods 120 cases with hand, foot and mouth disease were selected from June 2013 to December 2014 in our hospital, according to severity they were divided into the mild group(n=60), the severe group(n=60), 60 cases of children were collected came to our hospital for normal healthy physical examination as the same period as the mild group and the severe group and considered them as the control group. IL-10 level, humoral and cellular immune function of three groups were measured. Results IgM, IL-10 levels of the mild group, severe group were higher than the control group, IgG, IgA, IgM, IL-10 levels of the severe group was higher than mild group (P＜0.05). CD16+56+, CD23+, CD19+of Mild group, severe group was higher than the control group, CD25+of the Mild group, severe group was lower than the control group (P＜ 0.05), CD19+ of the severe group was higher than the mild group, CD16+56+，CD25+was lower than the mild group (P＜0.05); CD4+, CD8+of the severe group was lower than the mild group and the control group (P＜ 0.05). Conclusion Children with HFMD caused by EV71 virus exists cellular immunity, humoral immune dysfunction, the more severe the disease extent, cell-mediated immunity, humoral immune dysfunction more serious degree, should increase attention to timely detect and improve the prognosis of children and reduce mortality.

HFMD; EV71; Immune function

R725.1

B

2095-0616（2015）09-49-03

廣東省深圳市衛(wèi)生和人口計(jì)生委員會(huì)醫(yī)療衛(wèi)生類(lèi)科研項(xiàng)目（201302164）。

（2015-02-13）