胡小倩 王素霞 曹明善

054001 邢臺(tái)市，邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科（王素霞）

054001 邢臺(tái)市，邢臺(tái)市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科（曹明善）

肺癌是當(dāng)今世界上對(duì)職業(yè)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。肺癌的發(fā)病率和病死率不斷上升，但其發(fā)病機(jī)制尚不明確，因此肺癌的早期診斷尤為重要。研究［1］發(fā)現(xiàn)，機(jī)體抗腫瘤的主要免疫方式是細(xì)胞免疫，T淋巴細(xì)胞及其亞群是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞。雙陰性T淋巴細(xì)胞（double－negative T－cell，DNT）已經(jīng)被證實(shí)是一種免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，其抗腫瘤作用是目前研究的熱點(diǎn)課題［2］。本文研究收集我院2013年7月至2014年7月共120例肺癌患者及80例健康體檢者的外周血樣本，采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)其T淋巴細(xì)胞亞群及DNT的表達(dá)水平，通過分析肺癌患者與健康對(duì)照者的細(xì)胞免疫功能狀況，為患者選擇手術(shù)、放化療、生物治療等臨床方案提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年7月至2014年7月我院收治的肺癌患者120例，均經(jīng)過病理確診，且沒有進(jìn)行手術(shù)及放化療，其中，男性65例，女性55例。年齡 32～74 歲，平均年齡（48.32±9.65）歲。選取同期健康體檢者80例作為對(duì)照組，其中男性44例，女性36例，年齡 25～72 歲，平均年齡（45.19±8.26）歲。兩組間性別、年齡經(jīng)平衡檢驗(yàn)，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 采用四色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD3＋、CD4＋、CD8＋T 淋巴細(xì)胞和DNT 細(xì)胞（CD4－CD8－），儀器購(gòu)自貝克曼－庫(kù)爾特公司，型號(hào)為FC500，熒光標(biāo)記單克隆抗體均購(gòu)自貝克曼－庫(kù)爾特公司。

1.3 方法 所有研究對(duì)象均采集空腹靜脈血2 ml置于含有乙二胺四乙酸抗凝劑的真空采血管中。標(biāo)本在采集后6 h內(nèi)處理。按照檢測(cè)要求，分別向編好號(hào)的流式試管中加入20μl單克隆抗體，隨后加入混勻的100μl抗凝血，混勻，避光，室溫孵育15 min，分別加入溶血?jiǎng)芙馕礃?biāo)記細(xì)胞及紅細(xì)胞。按操作程序上機(jī)檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌患者與對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較 肺癌患者外周血CD3＋T淋巴細(xì)胞、CD4＋T 淋巴細(xì)胞及 CD4＋／CD8＋T 細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組均明顯下降，而CD8＋T淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），見表1。

表1 肺癌組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

表1 肺癌組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

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2.2 肺癌患者與對(duì)照組外周血DNT細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較 120例肺癌患者DNT細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

3 討論

表2 肺癌組與對(duì)照組外周血DNT細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

表2 肺癌組與對(duì)照組外周血DNT細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

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近年來，研究人員試圖從遺傳、環(huán)境、生活習(xí)慣以及基因等角度解釋肺癌的發(fā)病機(jī)制，同時(shí)也在不斷努力開發(fā)更準(zhǔn)確、更快速的診斷技術(shù)以及更高效的治療藥物。腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體免疫狀態(tài)密切相關(guān)，惡性腫瘤患者免疫功能低下，而淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和比例是衡量機(jī)體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。

細(xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤免疫的主要方式。T淋巴細(xì)胞亞群是細(xì)胞免疫的主要免疫應(yīng)答形式，在免疫應(yīng)答過程中起抗原識(shí)別、細(xì)胞免疫和免疫調(diào)節(jié)的作用［3］。其缺陷或功能不良會(huì)引起細(xì)胞免疫功能異常，而且也會(huì)影響其調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的功能，導(dǎo)致抗體缺陷，患者經(jīng)常表現(xiàn)一系列臨床癥狀，如容易反復(fù)感染，自身免疫病或惡性腫瘤的發(fā)病率增加等。CD3＋T細(xì)胞的數(shù)量代表了機(jī)體總的細(xì)胞免疫狀態(tài)，CD3＋T 淋巴細(xì)胞包括 CD4＋和CD8＋兩個(gè)亞群，CD4＋T淋巴細(xì)胞為輔助性T細(xì)胞，輔助機(jī)體完成抗腫瘤免疫；CD8＋T淋巴細(xì)胞為抑制性T細(xì)胞，其功能為抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答［4］。兩個(gè)亞群之間有著相互制約和相互輔助的關(guān)系，任何一方的增多和減少都會(huì)造成機(jī)體免疫功能的紊亂。若CD4＋／CD8＋比值降低，則患者的免疫功能低下，容易引起腫瘤的增殖［5］。

本文研究結(jié)果顯示，肺癌患者外周血CD3＋T淋巴細(xì)胞、CD4＋T 淋巴細(xì)胞和CD4＋／CD8＋T 淋巴細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組明顯下降，而CD8＋T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。這說明肺癌患者機(jī)體抗腫瘤免疫水平低下，且機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)。

DNT細(xì)胞是最近研究學(xué)者們非常感興趣的免疫細(xì)胞，雖然對(duì)于其來源還沒有定論，但其在維持自身免疫耐受和下調(diào)各種免疫應(yīng)答中的作用已經(jīng)被證實(shí)。有資料［6］表明，DNT細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)、器官移植、排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病及腫瘤免疫耐受過程中發(fā)揮重要作用，是當(dāng)前免疫學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。有研究［7］發(fā)現(xiàn)DNT細(xì)胞在體外經(jīng)過非己抗原刺激后可以特異性抑制同種同源CD4＋和CD8＋T淋巴細(xì)胞的增殖。因此，DNT細(xì)胞是一種抑制性的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞。本文研究結(jié)果顯示，肺癌患者DNT細(xì)胞比例顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這與吳曉蓮［8］的研究結(jié)果相一致。說明肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中存在有DNT細(xì)胞的異常表達(dá)。其可能通過抑制同種同源性的CD8＋T淋巴細(xì)胞對(duì)機(jī)體抗腫瘤起抑制性免疫調(diào)節(jié)作用，但其具體機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，肺癌患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂及DNT細(xì)胞的高表達(dá)，這可能會(huì)影響治療和預(yù)后。因此，深入研究肺癌患者免疫機(jī)制可為其治療開拓新思路，提供新依據(jù)。

1 陳筱凡.肝癌患者DNT細(xì)胞和T細(xì)胞亞群檢測(cè)的臨床意義.浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2012，17：398－399.

2 董進(jìn)浪，譚煒煒.胃癌患者DNT細(xì)胞和T細(xì)胞亞群變化及臨床意義.檢驗(yàn)與臨床，2012，50：88－91.

3 時(shí)瑛，李薇.消化道惡性腫瘤患者外周血免疫細(xì)胞的檢測(cè).繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2013，27：23－24.

4 陳派強(qiáng).外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在惡性腫瘤中的價(jià)值.醫(yī)藥論壇雜志，2012，33：118－119.

5 任林廣，張健，徐廣偉，等.肺癌患者外周血T細(xì)胞亞群與NK、NKT細(xì)胞檢測(cè)的臨床意義.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2013，10：1873－1874.

6 劉坤，楊亞萍，刁青，等.慢性重型乙型肝炎患者外周血DNT細(xì)胞及 T 細(xì)胞亞群的表達(dá)及意義.河北醫(yī)藥，2014，36：2248－2250.

7 趙雪，吳麗娟，劉毓剛.外周血雙陰性T細(xì)胞升高與臨床疾病的關(guān)系.重慶醫(yī)學(xué)，2012，41：3702－3706.

8 吳曉蓮.肺癌患者DNT細(xì)胞、T細(xì)胞亞群檢測(cè)及臨床意義.放射免疫學(xué)雜志，2013，26：84－85.