傅金瑞

目前國外有關(guān)自身抗體的親和力高低與相關(guān)自身免疫性疾病發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸等關(guān)系的研究已有報(bào)道。如Fialová等［1］發(fā)現(xiàn)與年齡、性別等方面相對應(yīng)的疑似神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者對比，多發(fā)性硬化癥患者腦脊液中抗神經(jīng)細(xì)絲低分子量亞基抗體以及抗tau蛋白抗體的親和力顯著增高，提示自身抗體親和力的檢測有助于自身免疫性疾病的診斷。又如Cucnik 等［2］研究了自身抗體抗 β2 糖蛋白 I（anti－β2 glucoprotein I，anti－β2GPI） 的親和力高低與抗心磷脂綜合征（antiphospholipid syndrome，APS）以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupuserythematosus，SLE）臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在SLE組，低親和力antiβ2GPI占多數(shù)；而高親和力 anti－β2GPI在 APS組占優(yōu)勢，同時(shí)該研究結(jié)果顯示，具有高親和力antiβ2GPI的患者多表現(xiàn)為血管栓塞。上述研究均說明某些自身抗體親和力的高低與相關(guān)自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展及臨床表現(xiàn)等方面存在著某種關(guān)聯(lián)。本文研究對抗甲狀腺球蛋白抗體（anti－thyroglobulin antibody，anti－TG Ab）和抗甲狀腺過氧化物酶抗體（anti－thyroid peroxidase antibody，anti－TPOAb）親和力與橋本甲狀腺炎（hashimoto＇sthyroiditis，HT）患者甲狀腺功能的相關(guān)性作初步探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年2月至2014年8月間在我院就診且anti－TG Ab和anti－TPOAb檢測均為陽性，并據(jù)臨床表現(xiàn)、體征、甲狀腺彩超、實(shí)驗(yàn)室檢查及組織病理學(xué)檢查確診的HT患者52例，其中男6例，女 46例，年齡 17～64 歲，平均年齡（38.8±16.3）歲，其中甲狀腺功能異常（減退）患者33例，甲狀腺功能正?；颊?9例。甲狀腺功能異常（減低）判斷標(biāo)準(zhǔn)：促甲狀腺激素升高（＞4.2 mU／L），伴有游離 T4減低（＜10.3 pmol／L）或正常。所有患者均除外心血管、肝、腎、肺等疾病。

1.2 標(biāo)本采集 抽取患者空腹肘靜脈血5 ml，以1200 g離心10 min分離血清，置－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 方法

1.3.1 anti－TG Ab、anti－TPOAb 定 量 檢 測 采 用ELISA 法定量檢測試劑盒檢測 anti－TG Ab、anti－TPOAb水平，兩種抗體檢測試劑盒均由德國ORGENTEC公司提供。

1.3.2 anti－TG Ab和anti－TPOAb 親和力檢測 采用尿素對患者血清樣本處理后，如果患者樣本吸光度值較處理前顯著降低，則表明存在低親和力抗體，通過以下公式計(jì)算其相對親和力指數(shù)（relative avidity index，RAI）。RAI＝經(jīng)尿素處理樣本的濃度值×100／未經(jīng)尿素處理樣本的濃度值［3］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用±s表示，兩組間計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，兩組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)。通過繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC） 曲線評價(jià) anti－TG Ab和anti－TPOAb判斷HT患者甲狀腺功能正常與否的診斷價(jià)值，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HT患者甲狀腺功能正常、異常兩組間anti－TG Ab和anti－TPOAb的RAI結(jié)果比較 甲狀腺功能異常組 anti－TG Ab和anti－TPOAb的 RAI檢測結(jié)果均高于正常組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝3.720，t＝2.840，P＝0.000，P＝0.007），見表1、圖1。

表1 HT患者甲狀腺功能正常、異常兩組間anti－TGAb和anti－TPOAb 的 RAI結(jié)果比較（±s）

表1 HT患者甲狀腺功能正常、異常兩組間anti－TGAb和anti－TPOAb 的 RAI結(jié)果比較（±s）

?

2.2 anti－TG Ab和anti－TPOAb 的 RAI用于判斷HT患者甲狀腺功能正常與否的診斷價(jià)值評價(jià) anti－TG Ab和anti－TPOAb 的 RAI用于判斷 HT 患者甲狀腺功能正常與否的cutoff值分別為39和35，ROC曲線下面積分別為0.779和0.730，靈敏度分別為 84.8%和81.6%，特異性分別為 63.2%和64.1%，其診斷性能評價(jià)指標(biāo)見表2，兩種抗體RAI用于判斷HT患者甲狀腺功能狀況的ROC曲線見圖2、3。2.3 HT患者甲狀腺功能異常組、正常組間anti－TG Ab和anti－TPOAb的RAI異常率比較 在甲狀腺功能異常HT組，兩種抗體同為高RAI的占54.5%（18／33），在甲狀腺功能正常 HT 組僅為15.8%（3／19），兩組間異常率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝7.520，P＝0.007）； 在甲狀腺功能異常 HT組，兩種抗體同為低 RAI的占 6.1%（2／33），在甲狀腺功能正常 HT 組達(dá) 47.4%（9／19），兩組間異常率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝12.330，P＝0.000）；僅一種抗體RAI增高的情形在甲狀腺功能異常HT組占 39.4%（13／33），在甲狀腺功能正常 HT 組占36.8%（7／19），兩組間異常率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.030，P＝0.868），見表3。

圖1 HT患者甲狀腺功能正常、異常兩組間 anti－TGAb和anti－TPOAb的 RAI結(jié)果比較

3 討論

圖2 anti－TGAb 的 RAI用于判斷甲狀腺功能正常與否的ROC曲線

圖3 anti－TPOAb 的 RAI用于判斷甲狀腺功能正常與否的ROC曲線

表2 anti－TGAb和anti－TPOAb的RAI用于判斷HT患者甲狀腺功能正常與否的診斷價(jià)值評價(jià)指標(biāo)

表3 HT患者甲狀腺功能異常組、正常組間anti－TGAb和anti－TPOAb的RAI異常率比較［n（%）］

HT是一種以自身甲狀腺組織為抗原的慢性炎癥性自身免疫性疾病。1912年日本九州大學(xué)Hashimoto首先在德國醫(yī)學(xué)雜志上報(bào)道了4例，為臨床最常見的甲狀腺炎癥。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為HT是自身免疫性疾病，而且是一種有明確遺傳傾向的器官特異性自身免疫性疾病，發(fā)病過程中甲狀腺結(jié)構(gòu)被大量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤，濾泡萎縮，結(jié)締組織增生，最終大多數(shù)病例伴有甲狀腺功能減退。本病多見于中年女性，起病隱匿，發(fā)展緩慢，病程較長，主要表現(xiàn)為甲狀腺腫大，體積約為正常甲狀腺的2～3倍，表面光滑，質(zhì)地堅(jiān)韌有彈性如橡皮，明顯結(jié)節(jié)則少見，無壓痛，與四周無黏連，可隨吞咽運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。多數(shù)為彌漫性，少數(shù)可為局限性，部分以顏面、四肢腫脹感起病。本病發(fā)展緩慢，有時(shí)甲狀腺腫在幾年內(nèi)似無明顯變化，初期時(shí)甲狀腺功能正常，病程中有時(shí)也可出現(xiàn)甲亢，繼而功能正常，甲減，再正常，其過程類似于亞急性甲狀腺炎；部分患者表現(xiàn)為假性甲亢，即可以有明顯甲亢的癥狀，但甲狀腺功能檢查結(jié)果卻不支持甲亢，而 anti－TG Ab和anti－TPOAb 檢測結(jié)果為陽性；還有表現(xiàn)為突眼型的，甲狀腺功能可正常、亢進(jìn)或減退。研究［4］發(fā)現(xiàn)甲狀腺功能減退HT患者的anti－TG Ab和anti－TPOAb水平顯著高于甲狀腺功能正常HT患者。近年研究［5］發(fā)現(xiàn)，人群中使用碘化鹽后結(jié)節(jié)性甲狀腺腫發(fā)病率降低，但自身免疫性甲狀腺炎發(fā)病率增加3倍，過量的碘補(bǔ)充一方面增加了酪氨酸的碘化，導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生增加；另一方面過量碘可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)黏附分子－1的表達(dá)，促使單核細(xì)胞浸潤，而細(xì)胞內(nèi)黏附分子－1在早期的炎性細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng)中起著非常重要的作用，可以通過一系列的作用產(chǎn)生大量的活性氧物質(zhì)，從而引起甲狀腺腺體的破壞。在多種自身免疫性甲狀腺疾病中都可檢測到 anti－TG Ab和anti－TPOAb 的升高，HT 患者尤為突出，其anti－TG Ab和anti－TPOAb水平為Graves病患者抗體水平的4倍以上，陽性率分別高達(dá)84.3%和86.3%。在HT患者中，兩種抗體尤其是anti－TPOAb陽性時(shí)，預(yù)示有發(fā)生自身免疫性甲狀腺疾病的危險(xiǎn)［6］。

親和力檢測技術(shù)最初是由Hedman等［7］建立的，是基于抗原抗體之間的氫鍵在尿素作用下解離的原理而進(jìn)行檢測的。該技術(shù)建立以來沿用兩種方法：一種最簡單的方法是OD值法，樣本不經(jīng)稀釋，直接以O(shè)D值計(jì)算RAI值。主要缺點(diǎn)是不能解決RAI值因受特異性IgG濃度高低的影響而出現(xiàn)的明顯變異問題，高濃度血清其RAI值偏高，而低濃度血清其RAI值又偏低。另一種是較為準(zhǔn)確的由Jenum等［8］建立的終點(diǎn)滴度法，即將樣本血清稀釋，使其所含特異性IgG的OD值處于臨界值附近，在此條件下進(jìn)行該特異性IgG的親和力測定。缺點(diǎn)是需要進(jìn)行繁瑣的樣本血清的稀釋。在此基礎(chǔ)上Prince等［3］發(fā)現(xiàn)利用定量檢測的ELISA法，以尿素作用前后特異性IgG濃度的比值作為RAI值，能夠較好地克服上述兩種方法的缺點(diǎn)。因此本實(shí)驗(yàn)采用這一目前較為準(zhǔn)確而又簡便的方法。

目前國內(nèi)外檢測IgG親和力指數(shù)多用于判別諸如巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、EB病毒、肺炎支原體等的原發(fā)性感染亦或既往感染［9－11］。國外有關(guān)自身抗體IgG親和力與疾病關(guān)系的研究已見報(bào)道。本文研究所用 anti－TG Ab 試劑盒靈敏度為 10 IU／mL，anti－TPOAb試劑盒靈敏度5 IU／mL。若某一RAI較低（如低至10%）的樣本anti－TG Ab濃度低于100 IU／mL或anti－TPOAb濃度低于50 IU／mL時(shí)則可能會因敏感度原因?qū)е翿AI的檢測結(jié)果偏高。本文研究所收集的樣本血清，其兩種抗體均為陽性（anti－TG Ab 最低濃度 212 IU／mL，anti－TPOAb 最低濃度133 IU／mL），因此能夠避免這種檢測誤差的出現(xiàn)。

本文研究為國內(nèi)首次證實(shí)anti－TG Ab和anti－TPOAb親和力對于判斷HT患者甲狀腺功能正常與否有一定的臨床價(jià)值。本文研究結(jié)果顯示，甲狀腺功能異常 HT組 anti－TG Ab和anti－TPOAb的 RAI檢測結(jié)果均高于甲狀腺功能異常HT組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），提示 anti－TG Ab和anti－TPOAb的RAI檢測結(jié)果可用于判斷HT患者甲狀腺功能正常與否。且本文研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，anti－TG Ab和anti－TPOAb的RAI用于判斷甲狀腺功能正常與否的靈敏度分別為84.8%、81.6%，陽性預(yù)測值分別為 90.0%、91.0%，ROC 曲線下面積分別為0.779、0.730，提示 anti－TG Ab和anti－TPOAb 的 RAI對甲狀腺功能正常與否有較好的診斷價(jià)值。本文研究結(jié)果還顯示在甲狀腺功能異常組，兩種抗體均以高RAI占優(yōu)勢，兩種抗體同為高RAI的占54.5%（18／33），而在甲狀腺功能正常組僅占 15.8%（3／19），且兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示高親和力 anti－TG Ab和anti－TPOAb的存在對 HT的發(fā)生、發(fā)展過程起著重要的促進(jìn)作用。由于本文研究所收集的病例資料有待豐富，尚不能判斷HT臨床表現(xiàn)和病情與其中哪一種抗體親和力相關(guān)性更加顯著。因此，在后續(xù)試驗(yàn)中，應(yīng)繼續(xù)增大樣本容量，尤其是對患者兩種抗體親和力動(dòng)態(tài)變化的跟蹤觀察，將會更加客觀地揭示出其親和力高低與HT發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸之間的內(nèi)在聯(lián)系，從而更好地為臨床診斷、治療等提供準(zhǔn)確的參考依據(jù)。

1 Fialová L，varcová J，Bartos A，etal.Avidity of anti-neurocytoskeletal antibodies in cerebrospinal fluid and serum.Folia Microbiol（Praha），2012，57：415－419.

2 Cucnik S，Kveder T，Krizaj I，etal.High avidity anti－beta 2－glycoprotein I antibodies in patients with antiphospholipid syndrome.Ann Rheum Dis，2004，63：1478－1482.

3 Prince HE，Wilson M.Simplified assay for measuring Toxoplasma gondii immunoglobulin G avidity.Clin Diagn Lab Immunol，2001，8：904－908.

4 Thomas T，Sreedharan S，Khadilkar UN，etal.Clinical，biochemical＆ cytomorphologic study on Hashimoto＇s thyroiditis.Indian J Med Res，2014，140：729－735.

5 Burek CL，Rose NR.Autoimmune thyroiditis and ROS.Autoimmun Rev，2008，7：530－537.

6 連小蘭，白耀，孫梅勵(lì)，等.血清抗甲狀腺球蛋白抗體和抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定的臨床診斷意義.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，26：677－681.

7 Hedman K，Seppala I.Recent rubella virus infection indicated by a low avidity of specific IgG.JClin Immunol，1988，8：214－221.

8 Jenum PA，Stray－Pedersen B，Gundersen AG.Improved diagnosisof primary Toxoplasma gondiiinfection in early pregnancy by determination of antitoxoplasma immunoglobulin G avidity.J Clin Microbiol，1997，35：1972－1927.

9 牛向蘭，侯林浦，李欣，等.測定巨細(xì)胞病毒特異性抗體親和指數(shù)的診斷價(jià)值.中國生育健康雜志，2008，19：293－296.

10 程道勝，梁惠強(qiáng)，李時(shí)英.風(fēng)疹病毒特異性IgG抗體親和力測定的臨床意義.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，22：97－98.

11 Vilibic－Cavlek T，Ljubin－Sternak S，Vojnovic G，etal.The role of IgG avidity in diagnosis of cytomegalovirus infection in newborns and infants.Coll Antropol，2012，36：297－300.