朱維忠 張興燦 王宏 劉珂 宋超（山東魯抗股份有限公司，山東 濟(jì)寧 272000）

納他霉素(natamycin)是納塔爾鏈霉菌、褐黃抱鏈霉菌等微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是一種多烯烴大環(huán)內(nèi)醋類抗真菌劑，其提取高純度產(chǎn)品為含3分子以上結(jié)晶水的白色無(wú)味結(jié)晶粉末，是一種高效低毒的抗真菌劑、食品防腐劑，在醫(yī)療、食品、養(yǎng)殖等行業(yè)中的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛，有著較好的市場(chǎng)前景。

納他霉素是一種兩性物質(zhì)，等電點(diǎn)為6.5，在發(fā)酵液中呈晶體狀，難溶于pH在2-10之間的水或其他有機(jī)溶劑，易溶于部分堿性或酸性的溶劑，可利用其不同pH值下的溶解性對(duì)納他霉素進(jìn)行提取純化。

1 測(cè)量不同溫度和pH值下納他霉素在水中的溶解度(u/ml)，結(jié)果如下：

納他霉素在水中的溶解度

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，繪制納他霉素在不同溫度及pH 下的溶解度曲線圖

納他霉素的溶解曲線圖

可見(jiàn)，pH 值在2-10 之間納他霉素在水中的溶解度非常低，pH值大于11以上時(shí)，溶解度快速上升。根據(jù)這種情況可以選擇兩種路線從發(fā)酵液中提取納他霉素。路線一：發(fā)酵液pH值控制在2-10之間將納他霉素保留在菌體中，再利用溶劑將其提取出來(lái)。路線二：發(fā)酵液pH值控制在11以上，將納他霉素溶解釋放在水相中，收集濾液將納他霉素進(jìn)一步提取出來(lái)。

2 菌體提取路線

發(fā)酵液預(yù)處理pH調(diào)節(jié)到7-9，納他霉素以晶體狀態(tài)存在發(fā)酵液中，通過(guò)板式過(guò)濾或離心等固液分離設(shè)備將菌體分離，通過(guò)篩選對(duì)比，可選擇乙醇水溶液做菌體提取溶劑，提取率高并且溶劑低毒易回收。

取1000g濕菌體，分別加入不同濃度的乙醇，調(diào)節(jié)不同濃度pH，攪拌提取60min，檢測(cè)提取液效價(jià)，計(jì)算提取收率，結(jié)果如下圖

隨著乙醇濃度的降低，提取收率逐漸提高，但70%以后提取率基本穩(wěn)定，但是進(jìn)入提取液的水溶性雜質(zhì)有所提高，對(duì)后續(xù)提取工藝造成影響，考慮到濕菌體中含有一定量的水分，提取時(shí)乙醇濃度確定為75%，pH 為10-12。為提高提取率，可采用兩次提取套用模式，提取率可在80%以上。提取液經(jīng)濃縮脫色以后，調(diào)節(jié)pH 至等電點(diǎn)將納他霉素結(jié)晶分離可得納他霉素產(chǎn)品。

3 濾液提取路線

根據(jù)納他霉素在水相中的溶解性，發(fā)酵液pH 值調(diào)節(jié)在11以上，將納他霉素溶解釋放在水相中，經(jīng)固液分離收集濾液；濾液調(diào)節(jié)pH值6-7即可將納他霉素結(jié)晶沉淀出，分離后進(jìn)行重結(jié)晶即可得到高純度納他霉素。

4 結(jié)語(yǔ)

利用納他霉素在不同溶劑的溶解性，通過(guò)調(diào)節(jié)pH 值將納他霉素分離提取純化。路線一通過(guò)有機(jī)溶劑從菌體中提取納他霉素，提取物質(zhì)量較好，目前已經(jīng)在工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用；路線二采用水相提取，工藝勞動(dòng)強(qiáng)度低，環(huán)境污染小，有較大的應(yīng)用潛力。

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