陳一峰，曹 琰，譚慶輝，胡仕鳳

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南長沙410128；2.湖南省新化縣畜牧水產(chǎn)局，湖南新化417602；3.湖南省婁底市動物疫病預(yù)防控制中心，湖南婁底417000)

口蹄疫（Aphthae epizooticae,Food-and-mouth disease）是偶蹄動物共患的一種急性、發(fā)熱性、高度接觸性傳染病，是目前危害養(yǎng)豬業(yè)較為嚴(yán)重的一種烈性傳染病。其臨床特征是在口腔粘膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水疤和潰爛。近年來，強(qiáng)制免疫口蹄疫疫苗，效果不理想、應(yīng)激反應(yīng)較大，重復(fù)加強(qiáng)免疫，工作量加大、群眾積極性不高，推行口蹄疫免疫遇到一些困難。鑒于此種情況,我們在婁底市中型養(yǎng)豬場（存欄母豬150頭左右）進(jìn)行的《重大動物疫病豬口蹄疫免疫效果研究》課題試驗中,根據(jù)試驗結(jié)果對影響豬口蹄疫免疫效果的各種因素進(jìn)行分析和研究,以便規(guī)范免疫程序,優(yōu)化免疫效果,為基層畜牧獸醫(yī)工作者在實際操作中提供科學(xué)依據(jù),同時也為疫苗生產(chǎn)廠家研制疫苗提供參考。

1 材料及方法

1.1 試驗豬

在婁底市5個縣（市區(qū)）分別選擇4個中等規(guī)模的豬場，存欄母豬在150頭左右，經(jīng)追溯調(diào)查近2年內(nèi)未發(fā)生過生豬口蹄疫疫情。生產(chǎn)管理規(guī)范、防疫條件較好，依次命名為佳信豬場、寶迪豬場、燕翔豬場、東來豬場。每個場選取約6周齡、口蹄疫O型母源抗體水平基本一致且臨床健康、個體差異不明顯的生長期仔豬30頭。實驗仔豬發(fā)育正常、營養(yǎng)中等、臨床檢查健康。

1.2 疫苗

（1）實驗疫苗：中農(nóng)威特生物科技有限公司生產(chǎn)的O型口蹄疫滅活苗（以下簡稱中農(nóng)威特O型口蹄疫滅活疫苗），批號為：H1311517；生產(chǎn)日期：30131120，有效期至：20141119。

（2）基礎(chǔ)疫苗：山東齊魯動物保健品有限公司生產(chǎn)的豬瘟弱毒（ SP）疫苗，（ 批號：1312006，生產(chǎn)日期：20131231，有效期：20150630）；高致病性藍(lán)耳病弱毒疫苗（江西株），（批號：1310019-1，生產(chǎn)日期：20131031，有效期：20150430）。

1.3 檢測試劑

豬O型口蹄疫抗體間接正向間接血凝試驗試劑盒（HA），購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧獸醫(yī)研究所，包括：FMD陽性血清、FMD陰性血清、FMD正向間接血凝抗原和FMD抗體檢測用稀釋液（批號：2014091904，生產(chǎn)日期：20140910）。

1.4 主要儀器耗材

96孔110 °V型醫(yī)用血凝板、微量移液器(Eppendorf公司)、微量槍頭、水浴鍋、微量振蕩器、一次性注射器、冰箱等實驗相關(guān)試劑和設(shè)備。

1.5 實驗方法

1.5.1 樣品標(biāo)志：用耳號鉗按通用編號方法卡耳號作樣品標(biāo)志。

1.5.2 免疫程序：基礎(chǔ)免疫采用婁底市畜牧水產(chǎn)局春防統(tǒng)一供應(yīng)的豬瘟活疫苗每頭豬1mL(含1頭份)肌肉注射,高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗每頭豬2 mL肌肉注射，O型口蹄疫滅活苗每頭豬2mL(含1頭份)肌肉注射，免疫程序參照疫苗說明書。

表1 試驗豬FMD抗體檢測結(jié)果(平均log2±SD)

圖1 試驗豬FMD抗體消長規(guī)律

1.5.3 樣品采集：分別在初次免疫前1天，初次免疫后30天、60天、90天、150天進(jìn)行前腔靜脈采血3～5mL，室溫靜置2～6h后，離心，取血清置于EP管內(nèi)，記錄編號后，置于-20℃保存?zhèn)錂z。

1.5.4 抗體水平檢測：豬FMD抗體測定采用正向間接血凝試驗(IHA),按《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》附件三中《O型口蹄疫正向間接血凝實驗》的操作方法進(jìn)行。

1.5.5 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：將血凝板放在白紙上傾斜觀察：稀釋液對照為不凝集、陰性血清血凝價不高于1∶8，陽性血清血凝價不低于1∶256，待檢血清出現(xiàn)50%凝集的最高稀釋倍數(shù)為抗體效價。待檢血清血凝價不低于1∶32（5log2）免疫抗體合格，并記錄結(jié)果。

1.6 免疫副反應(yīng)觀察

各實驗豬場于每次免疫當(dāng)天開始,連續(xù)觀察3天試驗豬健康情況。若有異常,如食欲減退、嘔吐、體溫升高等,及時記錄,若有過敏反應(yīng),如焦躁不安、呼吸加快、肌肉震顫、口角白沫、鼻腔出血等,立即救治并記錄，觀察各組豬的飲食狀況，注射疫苗后1～2天,觀察注射部位有無吸收不良現(xiàn)象。

2 結(jié)果與分析

表2 試驗豬各時間點豬FMD抗體合格率（單位：%）

表3 各試驗組免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果（單位：頭）

2.1 抗體檢測結(jié)果

將各試驗豬場實驗豬在初次免疫前1天，初次免疫后30天，60天，90天，150天的抗體進(jìn)行檢測,試驗的陽性和陰性值分別為91og2和0,各試驗組豬FMD抗體水平檢測結(jié)果見表1，抗體消長規(guī)律見圖1，各時間點豬FMD抗體合格率見表2。

2.2 免疫副反應(yīng)結(jié)果

在各實驗組的供試豬中,有少數(shù)豬只出現(xiàn)臨床不良反應(yīng),主要表現(xiàn)為呼吸急促、食欲減退、皮膚發(fā)紅和休克，寶迪豬場組的豬除了1頭出現(xiàn)食欲減退外,均無其他不良反應(yīng),注射部位也無炎性反應(yīng)。

2.2 結(jié)果分析

不進(jìn)行加強(qiáng)免疫不能得到群體免疫保護(hù)水平。從表1和表2可以看出初免后30天，免疫抗體水平最高時4個豬場在平均抗體效價為4.7log2±1.2，平均抗體合格率為60%，最高的寶迪豬場接近群體免疫抗體保護(hù)水平，最低的東來豬場群體免疫抗體合格率僅46.7%；從單個樣品免疫抗體效價可以看出初免后1個月最高血凝價為7log2,60%的合格樣品血凝價為5log2（數(shù)據(jù)未給出）,接近陽性臨界值，隨著時間推移，抗體在動物體內(nèi)逐漸下降，因此，不進(jìn)行加強(qiáng)免疫無法達(dá)到群體免疫抗體合格標(biāo)準(zhǔn)，無法達(dá)到群體保護(hù)。

從圖1可以看出：經(jīng)過加強(qiáng)免疫后30天左右免疫抗體水平最高，以后逐漸下降，經(jīng)加強(qiáng)免疫后30天左右平均免疫抗體效價為7.6log2±1.6，四個豬場在加強(qiáng)免疫后30天左右抗體水平均達(dá)到峰值,分別為 7.51og2±1.4、8.41og2±1.2、7.61og2±1.4和6.81og2±l.8，隨時間延長抗體水平逐漸下降，到第150天其抗體水平為4.2log2±1.8。按免疫程序?qū)嵤┟庖?，生豬的最長免疫保護(hù)期為加強(qiáng)免疫后4個月，即生豬超過7月齡就難以得到群體免疫保護(hù)。

可能是因為不同豬場免疫抑制性疾病危害程度的不同，豬場間免疫抗體水平也存在差異，經(jīng)方差分析佳信豬場、寶迪豬場、燕翔豬場之間差異不顯著(P=0.21＞0.05)，東來豬場與其他三個豬場之間抗體水平差異極顯著(P=0.001＜0.01)。

從4個實驗豬場分析，45～50日齡仔豬母源抗體幾乎為0，說明實驗豬場母豬的免疫抗體水平較低，可能是母豬口蹄疫免疫沒有到位。

3 結(jié)論與討論

本實驗對中農(nóng)威特O型口蹄疫滅活疫苗（批號：H1311517）進(jìn)行評估，其結(jié)果表明該廠家生產(chǎn)的本批次疫苗免疫效果合格。不同豬場因個體差異、免疫抑制性疾病、飼養(yǎng)管理或其他原因，免疫應(yīng)答存在差異，有必要在加強(qiáng)免疫2個月以后進(jìn)行免疫監(jiān)測，根據(jù)抗體水平調(diào)整免疫程序。豬場中如果存在病毒性疾病的病原，導(dǎo)致豬只處于亞健康狀態(tài)，抵抗力不強(qiáng)，也能顯著影響疫苗的效果[1～2]。在實驗過程中我們對豬場中非實驗豬死亡情況進(jìn)行了病原學(xué)檢測，東來豬場存在嚴(yán)重的圓環(huán)病毒和藍(lán)耳病病毒感染，這可能間接導(dǎo)致了豬場內(nèi)口蹄疫疫苗效果的不理想。

由于當(dāng)前豬價不穩(wěn)定，很多養(yǎng)殖戶存在壓欄的情況，平均出欄日齡達(dá)到210日齡。根據(jù)我們的實驗結(jié)果，經(jīng)過加強(qiáng)免疫后豬群最長免疫保護(hù)期不超過4個月。對于飼養(yǎng)周期超過200日齡的生豬必須再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，否則難以達(dá)到群體免疫保護(hù)[3]。

由于個體差異，按程序免疫，規(guī)范操作也難以使所有生豬免疫抗體達(dá)到合格水平，單純依靠免疫無法保證所有生豬具備抗感染能力[4～5]。因此，筆者認(rèn)為應(yīng)該加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，做好環(huán)境衛(wèi)生、消毒工作，提高生豬的營養(yǎng)水平，從而使整個豬群保持良好的健康水平。

[1]李順芳,湯海平．豬O型口蹄疫疫苗免疫效果試驗報告[J].養(yǎng)豬，2012,(3)：113-114.

[2]張作仁,胡成林,熊金洲,等．優(yōu)化豬瘟、口蹄疫免疫效果試驗與研究[J].養(yǎng)殖與飼料，2005,(3)：30-34.

[3]黃文忠,徐志斌,呂粵，等．豬瘟、豬O型口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗聯(lián)合免疫效果評價 [J].云南畜牧獸醫(yī)，2011,(2)：5-7．

[4]代金鳳．豬口蹄疫免疫副反應(yīng)的原因及防治[J].中國畜禽種業(yè),2012,(03)：95.

[5]葉潤全,呂敏芝．豬群口蹄疫免疫效果監(jiān)測分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2013，(21)：121-124.

[6]廖 波,明志友．影響口蹄疫免疫效果的主要因素[J].今日畜牧獸醫(yī).2011,(1)：30-32.