蘇貞文 姚吉龍 姜艷華

1.南方醫(yī)科大學，廣東廣州 510515；2.廣東省深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，廣東深圳 518000

維生素D3及其受體與稽留流產(chǎn)的免疫學相關(guān)性研究

蘇貞文1，2姚吉龍2姜艷華1

1.南方醫(yī)科大學，廣東廣州 510515；2.廣東省深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，廣東深圳 518000

目的分析維生素D3及其受體與稽留流產(chǎn)的免疫學相關(guān)性。 方法選擇2013年3月～2014年9月在深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科接受治療的稽留流產(chǎn)患者60例作為觀察組，選擇同期接受人工流產(chǎn)的正常女性60名作為對照組，比較兩組受試者的血清維生素D3水平、Th1和Th2細胞含量、Th1和Th2細胞因子水平，分析維生素D3與稽留流產(chǎn)的免疫相關(guān)性。 結(jié)果觀察組患者的血清維生素D3水平[（12.89±1.56）nmol/L]明顯低于對照組[（19.96±2.78）nmol/L]，差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；觀察組患者Th1含量、Th1/Th2比例高于對照組[（11.41± 1.34）比（7.64±0.87），（2.11±0.28）比（0.96±0.11）]，Th2含量低于對照組[（5.42±0.62）比（7.95±0.91）]，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；觀察組患者的Th1因子IL-2、IFN-γ水平高于對照組[（78.12±9.14）比（28.65±4.22）ng/L，（56.67± 6.91）比（29.45±4.68）ng/L]，Th2因子IL-4、IL-10水平低于對照組[（66.48±7.92）比（109.54±13.16）ng/L，（18.31± 2.14）比（33.46±5.13）μg/L]，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；維生素D3水平與Th1因子IL-2、IFN-γ水平呈負相關(guān)（β=-1.712，r2=0.452，t=12.122，P＜0.05；β=-1.083，r2=0.509，t=14.632，P＜0.05），與Th2因子IL-4、IL-10水平呈正相關(guān) （β=1.452，r2=0.551，t=9.329，P＜0.05；β=1.228，r2=0.474，t=11.417，P＜0.05）。 結(jié)論稽留流產(chǎn)孕婦存在維生素D3缺乏、Th1/Th2細胞向Th1偏移，且維生素D3含量與Th1、Th2細胞因子存在良好的相關(guān)性。

稽留流產(chǎn)；維生素D3；細胞免疫；輔助性T細胞

稽留流產(chǎn)（missed abortion）是指死亡胚胎或胎兒仍滯留于宮腔內(nèi)沒有及時自然排出者。近代生殖免疫學研究認為，除染色體異常、內(nèi)分泌異常、環(huán)境因素、解剖因素等因素外，稽留流產(chǎn)還與免疫因素有關(guān)[1]。T淋巴細胞作為機體免疫系統(tǒng)最重要的細胞群，維持機體正常的免疫功能[2]。當各T淋巴細胞亞群出現(xiàn)數(shù)量變化或功能發(fā)生異常時，機體免疫功能將會出現(xiàn)一系列的病理變化。CD4+T細胞亞群介導的細胞免疫增強可能誘發(fā)稽留流產(chǎn)的發(fā)生發(fā)展[3]。目前，關(guān)于稽留流產(chǎn)患者體內(nèi)CD4+T細胞含量和功能紊亂的機制仍未闡明，維生素D3被認為與機體免疫耐受的維持有關(guān)[4]。本研究采取隨機對照的方法，分析維生素D3及其受體與稽留流產(chǎn)的免疫學相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年3月～2014年9月在深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院（以下簡稱“我院”）接受治療的60例稽留流產(chǎn)患者為觀察組，均符合樂杰《婦產(chǎn)科學》第7版[5]稽留流產(chǎn)診斷標準：①有停經(jīng)史，妊娠早期有妊娠反應(yīng)史，妊娠初期懷孕征象逐漸消退；②陰道出血，且伴有暗紅色；③子宮停止增長，宮頸口閉合；④實驗室檢查尿妊娠試驗呈陰性；排除患者器質(zhì)性病變和生殖器官解剖畸形，排除生殖道感染性疾病，如霉菌、支原體、衣原體等感染。平均年齡（27.24±3.14）歲，平均孕次（1.32±0.14）次。選擇同期在我院接受自然流產(chǎn)的正常產(chǎn)婦60名作為對照組，所有產(chǎn)婦均無家庭遺傳史、自身免疫性疾病史、自然流產(chǎn)與死胎史，無內(nèi)分泌異常癥狀，平均年齡（27.89±3.36）歲，平均孕次（1.34± 0.16）次。兩組患者年齡、孕次等資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準，且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 觀察指標及檢測方法

1.2.1 血清維生素D3水平 采集空腹靜脈血5 mL，于3000 r/min速度下離心10 min，使用Applied Biosystems公司高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）儀，試劑為美國和德國原裝進口試劑，采用試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測維生素D3水平。

1.2.2 細胞免疫水平 采集晨起空腹靜脈血5 mL，于3000 r/min速度下離心10 min，密度梯度離心后獲得單個核細胞，孵育標志抗體后采用流式細胞儀測定免疫細胞Th1、Th2的含量。

1.2.3 Th1/Th2細胞因子含量 采集晨起空腹靜脈血5 mL，于3000 r/min速度下離心分離10 min，檢測Th1細胞因子白細胞介素-2（IL-2）、干擾素（IFN-γ），Th2細胞因子白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-10（IL-10）水平。檢測方法為ELISA法，試劑購于深圳晶美生物工程有限公司（美國Genzyme公司）。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 血清維生素D3水平

觀察組維生素D3含量為（12.82±1.65）nmol/L，對照組維生素D3含量為（19.46±2.64）nmol/L。觀察組產(chǎn)婦維生素D3含量低于對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（t=16.5219，P＜0.01）。

2.2 細胞免疫水平

觀察組患者Th1細胞含量、Th1/Th2比例明顯高于對照組，Th2細胞含量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 觀察組與對照組細胞免疫指標水平比較（，n=60）

表1 觀察組與對照組細胞免疫指標水平比較（，n=60）

11.41±1.34 7.64±0.87 5.985＜0.05 5.42±0.62 7.95±0.91 5.049＜0.05 2.11±0.28 0.96±0.11 6.995＜0.05

2.3 Th1/Th2細胞因子含量

觀察組患者的Th1因子IL-2、IFN-γ水平高于對照組，Th2因子IL-4、IL-10水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 觀察組與對照組Th1/Th2細胞因子含量比較（，n=60）

表2 觀察組與對照組Th1/Th2細胞因子含量比較（，n=60）

注：IL：白細胞介素：IFN-γ：干擾素

組別 Th1細胞因子IL-2（ng/L） IFN-γ（ng/L）Th2細胞因子IL-4（ng/L） IL-10（μg/L）觀察組對照組t值P值78.12±9.14 28.65±4.22 17.351＜0.05 56.67±6.91 29.45±4.68 9.145＜0.05 66.48±7.92 109.54±13.16 8.109＜0.05 18.31±2.14 33.46±5.13 7.578＜0.05

2.4 維生素D3與稽留流產(chǎn)的免疫相關(guān)性

經(jīng)單因素回歸分析，維生素D3水平與IL-2、IFN-γ水平呈負相關(guān)，與IL-4、IL-l0水平呈正相關(guān)（均P＜0.05）。見表3。

3 討論

稽留流產(chǎn)是婦產(chǎn)科常見疾病，我國稽留流產(chǎn)的發(fā)生率在13.4%左右[6]?；袅鳟a(chǎn)增加宮腔操作率，可能誘發(fā)盆腔感染、不孕等，危害廣大婦女身心健康與家庭和諧，同時也導致醫(yī)療資源浪費。生殖免疫學研究認為，患者免疫功能的低下可能影響著稽留流產(chǎn)的發(fā)生發(fā)展[7]。在妊娠維持過程中，父方異性抗體的胚胎需要母體免疫系統(tǒng)進行識別認同，并形成免疫耐受、產(chǎn)生保護性免疫應(yīng)答[8]。CD4+T細胞介導的細胞免疫決定了母體對胎兒的免疫耐受。已知CD4+T細胞又可分為Th1和Th2兩類亞型，兩者相互作用以維持免疫平衡；當母體免疫功能異常、Th1和Th2細胞的平衡被打破時，會導致免疫耐受無法形成，進而造成稽留流產(chǎn)的發(fā)生[9]。

表3 維生素D與稽留流產(chǎn)的免疫相關(guān)性情況

目前研究表明，稽留流產(chǎn)的發(fā)生與CD4+T細胞介導的細胞免疫增強有關(guān)，具體表現(xiàn)為Th1和Th2細胞的平衡被打破[10]。本次研究中，觀察組患者的Th1含量、Th1/Th2比例高于對照組，Th2含量低于對照組。提示Th1/Th2細胞功能向Th1漂移與稽留流產(chǎn)的發(fā)生有關(guān)。Th1細胞表現(xiàn)為細胞免疫[11]，Th2細胞促進體液免疫[12]。在正常妊娠過程中，Th1/Th2細胞比值如偏向Th2細胞，將抑制母體細胞免疫功能，增強體液免疫功能；當Th1細胞功能增強時，將破壞免疫耐受，導致流產(chǎn)的發(fā)生[13]。本研究進一步對血清中Th1和Th2細胞因子含量進行了比較，結(jié)果顯示觀察組患者的Th1因子IL-2、IFN-γ水平高于對照組，Th2因子IL-4、IL-10水平低于對照組，國內(nèi)外學者也有類似的文獻報道[14-15]。

近年來，探究稽留流產(chǎn)患者體內(nèi)Th1和Th2細胞含量異常的具體機制是圍生期研究的熱點，明確疾病的發(fā)生機制有助于制訂針對性的治療措施[16]。維生素D是人體一種必需的維生素，在體內(nèi)由皮膚合成的維生素D通過與維生素D結(jié)合蛋白結(jié)合而運輸?shù)礁闻K，通過羥基化形成25-羥維生素D3，再經(jīng)血至腎臟，在1-α羥化酶作用下，轉(zhuǎn)化成具有生物學活性的1，25-（OH）2D3。維生素D受體（VDR）為類固醇-甲狀腺激素的核受體超家族的成員，存在于人體的多種組織細胞中[17]，維生素D通過VDR對靶細胞發(fā)生生物學效應(yīng)[18]。有研究認為，1，25-（OH）2D3與VDR結(jié)合后能調(diào)節(jié)抗原呈遞細胞、誘導免疫耐受。當維生素D含量異常時會造成免疫耐受無法形成[19]。本研究對流產(chǎn)患者血清中維生素D3的含量進行了分析，結(jié)果顯示觀察組產(chǎn)婦的維生素D3含量低于對照組，且與Th1因子IL-2、IFN-γ水平呈負相關(guān)，與Th2因子IL-4、IL-10水平呈正相關(guān)。與國內(nèi)外學者研究基本一致[20-21]。

本研究表明稽留流產(chǎn)孕婦存在維生素D3缺乏、Th1/Th2細胞向Th1偏移，且維生素D3含量與Th1、Th2細胞因子存在良好的相關(guān)性。因受到樣本對象來源與數(shù)量的限制，且缺乏對T細胞亞群的比較研究，所以本研究還存在一定局限性，有待于今后擴大樣本展開深入的研究去加以求證。

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Study on the correlation between vitamin D3and receptor and immune of missed abortion

SU Zhenwen1，2YAO Jilong2JIANG Yanhua1

1.Southern Medical University,Gongdong Province,Guangzhou 510515,China;2.Department of Obstetrics and Gynecology,Shenzhen Luohu Maternal and Child Health Hospital,Gongdong Province,Shenzhen 518000,China

Objective To study the correlation between vitamin D3and receptor and immune of missed abortion.Meth-ods 60 cases of patients with missed abortion from March 2013 to September 2014 in Shenzhen Luohu Maternal and Child Heatlth Hospital were enrolled as observation group,60 cases normal female received induced abortion over the same period were enrolled as control group.Then serum vitamin D3levels,Th1 and Th2 contents,Th1/Th2 factor levels were compared,correlation between vitamin D3and immune function were compared.Results Vitamin D3level of observation group[(12.89±1.56)nmol/L]was significantly lower than that of control group[(19.96±2.78)nmol/L](P＜0.01); and Th1,Th1/Th2 levels of observation group were significantly higher than those of control group[(11.41±1.34)vs (7.64±0.87),(2.11±0.28)vs(0.96±0.11)];Th2 levels were significantly lower than those of control group[(5.42±0.62)vs (7.95±0.91)](P＜0.05);Th1 factor IL-2,IFN-γ levels of patients in observation group were higher than the control group[(78.12±9.14)vs(28.65±4.22)ng/L,(56.67±6.91)vs(29.45±4.68)ng/L],Th2 factor IL-4,IL-10 level was lower than the control group[(66.48±7.92)vs(109.54±13.16)ng/L,(18.31±2.14)vs(33.46±5.13)μg/L](P＜0.05);vitamin D level was negatively correlated with Th1 factors IFN-γ,IL-2 levels(β=-1.712,r2=0.452,t=12.122,P＜0.05;β=-1.083, r2=0.509,t=14.632,P＜0.05);and positively correlated with Th2 factors IL-4,IL-l0 levels(β=1.452,r2=0.551,t=9.329, P＜0.05;β=1.228,r2=0.474,t=11.417,P＜0.05).Conclusion Missed abortion pregnant women presence vitamin D3deficiency,Th1/Th2 cells shift to Th1;vitamin D3levels have good correlation with Th1/Th2 factor levels.

Missed abortion;Vitamin D3;Cell immune;Helper T cell

R169.42

A

1673-7210(2015)11(b)-0079-04

2015-07-20本文編輯：關(guān) 婧）

廣東省深圳市科技計劃項目（JCYJ20140416 144808975）。

蘇貞文（1980.12-），女，南方醫(yī)科大學婦產(chǎn)科2012級在讀碩士研究生；研究方向：婦科內(nèi)分泌——習慣性流產(chǎn)。