劉 科，施赫赫，，陳 淦，鄺少松，劉盛來(lái)，劉運(yùn)忠，鐘志勇，郭金彪，耿慶山，唐小江

(1．廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，佛山 528248;2．廣東貝格生物科技有限公司，佛山 510642;3．廣州醫(yī)藥工業(yè)研究總院，廣州 510240;4．佛山科技學(xué)院，佛山 528231;5．廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，廣州 510060)

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物來(lái)源

F1代普通級(jí)融水小型豬85頭，其中4月齡測(cè)定85頭，雌性43頭、雄性42頭;12月齡豬測(cè)定36頭，雌雄各半。由廣東貝格生物科技有限公司(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心小型豬研究基地)提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)過(guò)廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)條件

飼養(yǎng)環(huán)境為普通級(jí)，濕簾通風(fēng)系統(tǒng)和局部保溫?zé)艨刂粕醿?nèi)溫濕度，夏天溫度控制在28℃ ～30℃，冬天溫度控制在16℃ ～20℃。每天定時(shí)定量飼喂全價(jià)顆粒料，上下午各一次，自由飲水。

1.3 主要儀器

德國(guó)賽多利斯電子分析天平(BS223S)，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)的低速大容量離心機(jī)(TDL-5-A)，日本光電公司生產(chǎn)的全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀(CelltacE MEK-7222K)和意大利愛(ài)康公司生產(chǎn)的全自動(dòng)血液生化分析儀(ECHO)，用激光計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)。

1.4 方法

1.4.1 血樣采集

采血前禁食12 h，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，前腔靜脈取血，每只動(dòng)物采血量為5 mL，用于血液生理生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.4.2 血常規(guī)、血生化與電解質(zhì)指標(biāo)的檢測(cè)

使用真空采血管(EDTAK2抗凝劑)取4 mL全血，以全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀測(cè)定白細(xì)胞數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞數(shù)(NE)、淋巴細(xì)胞數(shù)(LY)、單核細(xì)胞數(shù)(MO)、嗜酸粒細(xì)胞數(shù)(EO)、嗜堿粒細(xì)胞數(shù)(BA)、中性粒細(xì)胞比例(NE%)、淋巴細(xì)胞比例(LY%)、單核細(xì)胞比例(MO%)、嗜酸性粒細(xì)胞比例(EO%)、嗜堿性粒細(xì)胞比例(BA%)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞比積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞容積分布寬度(RDW)、血小板數(shù)(PLT)、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)22項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)。

使用真空采血管(促凝劑)取1 mL非抗凝血，離心分離血清，以全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLOB)、白蛋白/球蛋白(A/G)、總膽紅素(TBIL)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、磷(P5+)、鈣(Ca2+)、鉀(K+)、鈉(Na+)、氯(Cl－)等 22 項(xiàng)血生化、電解質(zhì)指標(biāo)。

1.4.3 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。所有測(cè)定值均以平均數(shù)(ˉx)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示，采用t檢驗(yàn)，P ＜0.05作為差異顯著性界值，P＜0.01作為差異極顯著性界值。

2 結(jié)果

2.1 血常規(guī)

融水小型豬血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。同月齡雄性與雌性相比，血常規(guī)指標(biāo)僅RDW有顯著性差異(P＜0.05)。同性別12月齡與4月齡比較，雌性和雄性血常規(guī) WBC、LY、MO、LY%、MO%、RDW、PLT指標(biāo)均顯著降低(P ＜ 0.05)，NE、EO、NE%、EO%、MCV、MCH、MPV、HCT 指標(biāo)均顯著升高(P ＜0.05);雌性的HGB、RBC指標(biāo)顯著升高(P ＜0.05)，其他指標(biāo)差異不顯著(P ＞0.05)。

表1 融水小型豬4月齡、12月齡血常規(guī)指標(biāo)Tab．1 The blood parameters of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth-old and 12thmonth-old

表2 4月齡、12月齡融水小型豬血生化、電解質(zhì)指標(biāo)Tab．2 The blood biochemical and electrolyte indices of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth and 12thmonth

2.2 血生化與電解質(zhì)

相同月齡的不同性別之間大部分指標(biāo)差異較小，且大部分差別均在1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi)(表2)。但是，相同性別的不同月齡之間的差異非常明顯:在ALT、AST、ALP、CK、LDH 等 5 個(gè)酶學(xué)指標(biāo)中，除雌性的CK、LDH差異無(wú)顯著性外，12月齡雌性和雄性均顯著低于4月齡(P＜0.05);在蛋白質(zhì)代謝的4項(xiàng)指標(biāo)，12月齡的總蛋白增加而白球比下降(P ＜ 0.01);在脂質(zhì)代謝的 CHOL，TG，HDL-C，LDL-C等4個(gè)指標(biāo)中，除雄性CHOL下降一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，其他指標(biāo)均變化不大。12月齡的TBIL、BUN均下降，而CR上升最為顯著(P ＜0.01)，雌性GLU下降顯著(P＜0.01)。電解質(zhì)表現(xiàn)為血Ca2+上升，而血K+下降。

3 討論

血常規(guī)、血清生化和電解質(zhì)指標(biāo)是病理學(xué)、生理學(xué)等研究中的重要參考依據(jù)［2］。本研究對(duì)4月齡及12月齡融水小型豬的血常規(guī)、血生化和電解質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定，反映了幼年與成年融水小型豬的生理生化狀態(tài)。由于影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)效果的因素包括動(dòng)物因素、飼養(yǎng)環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)因素、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)環(huán)節(jié)因素［3］，本研究在同一環(huán)境下、使用相同的飼料，采用同一種進(jìn)行采血方法，并使用相同的檢測(cè)儀器進(jìn)行分析。

結(jié)果表明，相同月齡時(shí)，兩性別的血常規(guī)指標(biāo)、血生化和電解質(zhì)的大部分指標(biāo)差異不大，但不同月齡之間的部分指標(biāo)差異明顯。隨著月齡的增加，融水小型豬的血常規(guī)指標(biāo)中，白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞比例、血小板數(shù)下降，血紅蛋白含量升高，而紅細(xì)胞數(shù)變化不大。吳曙光等［4］對(duì)貴州小型豬研究也表明，在不同月齡段多數(shù)血液生化指標(biāo)有顯著差異(P＜0.05)。血生化指標(biāo)中的5個(gè)酶(ALT、AST、ALP、CK、LDH)12月齡均下降;反應(yīng)蛋白代謝功能的總蛋白上升，而白球比下降，提示細(xì)胞免疫增強(qiáng);反應(yīng)脂質(zhì)代謝的4個(gè)指標(biāo)差異很小，提示融水小型豬可能適合用于復(fù)制脂質(zhì)代謝紊亂如高血脂癥疾病模型。肌酐(CR)是反應(yīng)腎功能的指標(biāo)，總膽紅素(TBIL)是反應(yīng)膽汁代謝的指標(biāo)，融水小型豬不同性別之間的差異很小，但12月齡的BUN和TBIL顯著低于4月齡，這與人的情況非常相似。血清電解質(zhì)的性別差異很小，12月齡的血鈣升高而血鉀下降，但變化均在1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差范圍內(nèi)。

融水小型豬是否適合作為人類疾病動(dòng)物模型呢?為便于比較，我們參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)［5－10］，制作了表3和表4。表3可見(jiàn)，成年融水小型豬的白細(xì)胞數(shù)與哥廷根豬類似，比較接近人類，而4月齡融水小型豬的白細(xì)胞較高，與中國(guó)農(nóng)大小型豬、西藏小型豬、五指山小型接近;在紅細(xì)胞數(shù)方面，融水小型豬比另外4種小型豬均小，更接近人類。血紅蛋白和血小板則與其他小型豬、比格犬和大鼠接近，在人類正常值范圍內(nèi)。

從表4可見(jiàn)，成年融水小型豬的絕大部分生化與電解質(zhì)指標(biāo)與人類正常值范圍非常接近。其中22項(xiàng)生化、電解質(zhì)指標(biāo)中，有11.5項(xiàng)(AST、ALT、TP、ALB、A/G、BUN、CHOL、TG、雄性的 GLU、K+、Na+、Cl－)在人類正常值范圍，占52.3%;另外7.5項(xiàng)指標(biāo)(ALP、GLOB、TBIL、CR、HDL-C、LDH-C、雌性的GLU、Ca2+)非常接近人類正常值范圍，占34.1%;兩者合計(jì)達(dá)86.4%(1922)。另外3項(xiàng)指標(biāo)(CK、LDH、P5+)也在人類正常值范圍最大值的2.5倍以內(nèi)。而哥廷根小型豬雖然大部分指標(biāo)也在或接近人類正常值范圍，占64.7%(1117)，3項(xiàng)指標(biāo)(ALT、LDH、P5+)在人類正常值范圍最大值的2.5倍以內(nèi)，但有三項(xiàng)指標(biāo)CK、TBIL、CR分別超過(guò)人類正常值范圍最大值10倍、20倍、500倍以上，且其標(biāo)準(zhǔn)差特別大，不適合作為涉及心(CK)、肝(TBIL)、腎(CR)等相關(guān)指標(biāo)的疾病模型。中國(guó)農(nóng)大小型豬的大部分指標(biāo)也在或接近人類正常值范圍，占 66.7%(1218)，5 項(xiàng)指標(biāo)(ALT、ALP、P5+，K+、雌性的AST、LDH-C)在人類正常值范圍限值2倍以內(nèi)，但CK超過(guò)人類正常值范圍限值5倍以上，且檢測(cè)除了雄性AST外，4個(gè)心肌酶均不在人類正常值范圍。我們獲得的西藏小型豬和五指山小型豬檢測(cè)項(xiàng)目較少，大部分指標(biāo)也在或接近人類正常值范圍，但反映CK、GLU遠(yuǎn)低于人類。

總之，從本文獲得的資料看，融水小型豬的血常規(guī)、血生化和電解質(zhì)指標(biāo)多數(shù)接近人類，數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)差小，且月齡變化與人類相似，部分指標(biāo)顯著優(yōu)于哥廷根等小型豬，提示融水小型豬具備培育成實(shí)驗(yàn)用小型豬的優(yōu)越條件。

表3 融水小型豬與其他小型豬、犬、大鼠、人的血常規(guī)指標(biāo)比較Tab．3 Comparison of blood parameters among Rongshui miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

表4 融水小型豬與其他小型豬、犬、大鼠、人的血液生化指標(biāo)比較Tab．4 Comparison of blood biochemical indices among Beige miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

［1］ 袁進(jìn)，顧為望．小型豬作為人類疾病動(dòng)物模型在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用［J］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32(2):108 －111．

［2］ 潘金春，閔凡貴，王希龍，等．實(shí)驗(yàn)用蕨麻小型豬血液生理生化指標(biāo)測(cè)定及分析［J］．畜牧與獸醫(yī)，2012，44(6):81 －83．

［3］ 施新猷，王四旺，顧為望，等．比較醫(yī)學(xué)，第1版［M］，陜西:陜西科學(xué)技術(shù)出版社，2003年，62．

［4］ 吳曙光，董小君，郭柯男，等．貴州小型豬血液生化指標(biāo)檢測(cè)［J］．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011，(2):44 －45．

［5］ http://minipigs．dk．

［6］ 馮媛媛，白雪源，賀津，等．中國(guó)實(shí)驗(yàn)用小型豬血液指標(biāo)正常參考值分析［J］．中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013．40(6):139 －142．

［7］ 岳敏，范沛，吳麗紅，等．廣州地區(qū)三種小型豬血液生理生化指標(biāo)的比較［J］．中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2011．28(8):24 －26．

［8］ 王東平，吳娜，隋麗華，等．成年比格犬血液生理生化指標(biāo)的測(cè)定［J］．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2005，22(2):12 －15．

［9］ 樊林花，李丹，劉茂林，等．清潔級(jí)SD大鼠血液生理及生化指標(biāo)正常參考值的觀察［J］．2011，6(19):33－34．

［10］ 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程，第三版［M］．南京:東南大學(xué)出版社，2006年．