黃挺章，李遠(yuǎn)輝，郭圣奇，盧善善，齊梁煜，馮雪萍，黃鎖義

薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用

黃挺章1，李遠(yuǎn)輝1，郭圣奇1，盧善善2，齊梁煜1，馮雪萍3，黃鎖義4△

目的研究薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用。方法采用小鼠肝癌H22腹水型瘤細(xì)胞建立荷瘤小鼠動物模型，將84只模型小鼠隨機(jī)均分為薏苡莖醇提取物劑量1～5組、模型對照組、環(huán)磷酰胺組，分別灌胃薏苡莖醇提取液10、8、6、4、2 g/kg，等體積生理鹽水和環(huán)磷酰胺0.02 g/kg，每日1次，連續(xù)8 d。觀察小鼠的活動能力、腹部膨隆大小及出現(xiàn)的時間、毛發(fā)和攝食、飲水量變化等情況。測量荷H22小鼠的實(shí)體瘤質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率，并計(jì)算肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。結(jié)果模型對照組最先出現(xiàn)腋下腫瘤鼓起且生長最快，自主活動減少、食欲下降、毛色開始暗淡等反應(yīng)，劑量1、2組次之，劑量5組和環(huán)磷酰胺組最慢。薏苡莖醇提取物劑量1～5組瘤質(zhì)量［分別為（0.47±0.18）、（0.37±0.13）、（0.34±0.10）、（0.30±0.11）、（0.28±0.09）mg］均低于模型對照組（0.60±0.21）mg［F=5.700，P＜0.05］，薏苡莖醇提取物劑量1～5組、環(huán)磷酰胺組抑瘤率依次升高（分別是21.67%、38.33%、43.33%、50.00%、53.33%和60.00%）。環(huán)磷酰胺組和薏苡莖醇提取物組的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均低于模型對照組（劑量1組脾臟指數(shù)除外）；薏苡莖醇提取物各劑量組的肝臟指數(shù)低于環(huán)磷酰胺組，脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)與環(huán)磷酰胺組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠體內(nèi)腫瘤和肝臟損害有抑制作用。

抗腫瘤藥（中藥）；薏苡；薏苡莖；醇提取物；H22；體內(nèi)抗腫瘤；環(huán)磷酰胺

薏苡（Coix lacryma-jobiL.）屬禾本科薏苡屬，為禾本科1年生或多年生草本。而薏苡仁（SemeCoicis）為薏苡的干燥成熟種仁，其味甘、淡，性微寒，有健脾利濕、清熱排膿功能。薏苡是一種中草藥，有很多藥用功效，其全身是寶，薏苡根功用與薏苡仁基本相同，清熱、利尿并有驅(qū)蟲作用、能治蟲積腹痛，薏苡葉具有降壓等作用［1］；薏苡莖可防治麻疹、濕疹等［2］。近年來，對于薏苡抗腫瘤的作用已被世人關(guān)注，但是，目前國內(nèi)外對于薏苡抗腫瘤的研究主要集中于薏苡仁上［3-4］，而對薏苡仁以外的其他部分的抗腫瘤作用研究較少，特別是薏苡莖的抗腫瘤作用僅見于相關(guān)體外抗腫瘤作用研究［5］，而未見其體內(nèi)抗腫瘤作用的報道。本實(shí)驗(yàn)采用H22肝癌細(xì)胞制備荷H22小鼠腫瘤模型，研究薏苡莖醇提取物的體內(nèi)抗腫瘤作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材薏苡莖購自廣西百色市西林縣，經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)藥教研室覃道光副教授鑒定為禾本科薏苡屬薏苡Coix lacryma-jobiL.var.mayuen（Roman.）Stapf藥材。

1.1.2 試劑與儀器環(huán)磷酰胺（CTX）購自山西普德藥業(yè)股份有限公司（批號：04131203，規(guī)格：0.2 g）；EL-204型萬電子天平購自梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，BCW-1000型生物凈化工作臺、BW-CJ-1K型空氣凈化器均購自蘇州華宏凈化技術(shù)有限公司。

1.1.3 動物與瘤細(xì)胞株清潔級健康昆明種小鼠，雌雄不限，6～8周，平均體質(zhì)量（20±2）g，由我院實(shí)驗(yàn)動物中心提供（生產(chǎn)許可證：SCXK桂2012-0003），適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)；小鼠腹水型H22肝癌細(xì)胞株由廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物教研室提供，小鼠腹水傳代，每7～9 d傳代1次。

1.2 方法

1.2.1 薏苡莖醇提取物的制備參考文獻(xiàn)［6］，稱取薏苡莖粉末200 g，加10倍質(zhì)量75%乙醇，密閉室溫侵泡2 h后，冷凝回流1 h，過濾取濾液；濾渣再加75%乙醇（量為第1次的一半），冷凝回流1 h，過濾取濾液，合并2次濾液，并將乙醇揮發(fā)直到不再聞到乙醇?xì)馕对贊饪s至200 mL（1 mL含生藥1.00 g），為薏苡莖醇提取液，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 肝癌H22細(xì)胞的選取及保種參考文獻(xiàn)［7］，在選取原肝癌H22細(xì)胞時，應(yīng)當(dāng)挑選腹水為乳白色無絮狀沉淀物者為佳，如腹水為血性則不能進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)。用成乳黃色的原肝癌H22細(xì)胞來進(jìn)行保種。將原肝癌H22細(xì)胞接種到正常的小白鼠腹腔中，培養(yǎng)幾天后，肝癌細(xì)胞數(shù)增加，再從該小鼠腹腔中取腹水，腹水中就包含有癌細(xì)胞，即肝癌細(xì)胞液。

1.2.3 荷H22瘤小鼠模型的建立參考文獻(xiàn)［8］，取健康昆明小鼠，采用小鼠肝癌H22腹水型瘤細(xì)胞株，選擇腹腔接種7～9 d，取生長良好的肝癌H22的小鼠，頸椎脫臼處死，在無菌條件下，用碘酒、乙醇消毒小鼠腹部皮膚，抽取腹水，按常規(guī)方法用無菌生理鹽水稀釋成含細(xì)胞數(shù)約為1.0×107/mL的H22瘤細(xì)胞懸液，采用臺盼藍(lán)染色法，顯微鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞存活率不低于95%。將稀釋好的H22瘤細(xì)胞懸液接種于健康小鼠右前腋皮下，每只接種0.2 mL，造成荷H22瘤小鼠模型。

1.2.4 動物分組與給藥參考文獻(xiàn)［9］，將接種24 h后的荷H22瘤小鼠按隨機(jī)單位組設(shè)計(jì)分組法分成薏苡莖醇提取物劑量1～5組、模型對照組、環(huán)磷酰胺組共7組，每組12只，雄雌各半。其中薏苡莖醇提取物劑量1～5組分別灌胃劑量為10、8、6、4、2 g/kg，環(huán)磷酰胺組灌胃環(huán)磷酰胺0.02 g/kg，模型對照組灌胃等體積生理鹽水，每日1次，連續(xù)8 d。

1.2.5 荷H22小鼠生活狀況的觀察每日觀察小鼠活動能力、腹部膨隆大小及出現(xiàn)時間、毛發(fā)和攝食、飲水量變化等情況。

1.2.6 薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠肉瘤的影響參考文獻(xiàn)［9］，末次給藥24 h后對每只小鼠進(jìn)行稱質(zhì)量，然后頸椎脫臼處死，剝離瘤塊，取腫瘤組織，用濾紙吸凈其上液體，稱瘤塊質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率：抑瘤率（%）=（對照組平均瘤質(zhì)量-給藥組平均瘤質(zhì)量）/對照組平均瘤質(zhì)量×100%。

1.2.7 荷H22小鼠各器官的測定將小鼠解剖稱取肝臟、脾臟和胸腺質(zhì)量，計(jì)算小鼠的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)（mg/g），其計(jì)算公式為：肝臟（脾臟、胸腺）指數(shù)（mg/g）=肝臟（脾臟、胸腺）質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行LSD-t法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察各組小鼠造模均成功。在接種H22腫瘤細(xì)胞懸液后的前3 d，各組小鼠一般狀況無明顯差異，均進(jìn)食良好，反應(yīng)敏捷，毛色亮澤。自接種第4天開始，小鼠開始出現(xiàn)腋下膨隆，出現(xiàn)小瘤塊，自主活動減少，食欲下降，毛色開始暗淡，對外界刺激反應(yīng)遲鈍等。模型對照組最先出現(xiàn)腫瘤鼓起且生長最快，以上反應(yīng)最為明顯，劑量1、2組小鼠次之，劑量5組和環(huán)磷酰胺組最慢。每組進(jìn)食和進(jìn)水都在相對減少，環(huán)磷酰胺組、薏苡莖醇提取物劑量組與模型對照組比較，進(jìn)食和進(jìn)水量減少較緩。

2.2 薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠肉瘤的影響薏苡莖醇提取物劑量組和環(huán)磷酰胺組的瘤質(zhì)量均低于模型對照組（P＜0.05），環(huán)磷酰胺組的抑瘤率最高，薏苡莖醇提取物劑量組隨薏苡莖醇提取物劑量的降低，抑瘤率逐漸升高，呈劑量依賴性，但均大于20.0%，半數(shù)抑制濃度（IC50）為3.92 g/L。見表1。

2.3 薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠各器官的影響除劑量1組脾臟指數(shù)與模型對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，劑量1組的肝臟指數(shù)和胸腺指數(shù)以及其余各組的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均低于模型對照組（均P＜0.05）；薏苡莖醇提取物劑量組的肝臟指數(shù)低于環(huán)磷酰胺組，脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)與環(huán)磷

酰胺組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

Tab.1Comparison of tumor mass and tumor inhibition rate between seven groups表1 各組荷H22小鼠瘤質(zhì)量及抑瘤率比較（n=12，）

Tab.1Comparison of tumor mass and tumor inhibition rate between seven groups表1 各組荷H22小鼠瘤質(zhì)量及抑瘤率比較（n=12，）

*P＜0.05；a與模型對照組比較，P＜0.05

抑瘤率（%）組別模型對照組環(huán)磷酰胺組劑量1組劑量2組劑量3組劑量4組劑量5組F瘤質(zhì)量（m g）0 . 6 0 ± 0 . 2 1 0 . 2 4 ± 0 . 1 1 a 0 . 4 7 ± 0 . 1 8 a 0 . 3 7 ± 0 . 1 3 a 0 . 3 4 ± 0 . 1 0 a 0 . 3 0 ± 0 . 1 1 a 0 . 2 8 ± 0 . 0 9 a 5 . 7 0 0 * -6 0 . 0 0 2 1 . 6 7 3 8 . 3 3 4 3 . 3 3 5 0 . 0 0 5 3 . 3 3

Tab.2The effect of H22bearing on liver，spleen，thymus，and their indexes表2 對荷H22小鼠肝臟、脾臟、胸腺及其指數(shù)的影響（n=12，）

Tab.2The effect of H22bearing on liver，spleen，thymus，and their indexes表2 對荷H22小鼠肝臟、脾臟、胸腺及其指數(shù)的影響（n=12，）

*P＜0.05；a與模型對照組比較，b與環(huán)磷酰胺組比較，P＜0.05

組別模型對照組環(huán)磷酰胺組劑量1組劑量2組劑量3組劑量4組劑量5組F體質(zhì)量（g）2 7 . 3 9 ± 1 . 8 0 2 6 . 5 2 ± 1 . 7 3 2 6 . 6 7 ± 2 . 9 4 2 5 . 6 1 ± 1 . 7 0 2 6 . 7 5 ± 1 . 7 9 2 5 . 6 7 ± 1 . 7 3 2 7 . 3 1 ± 1 . 8 3 1 . 5 8 3肝臟質(zhì)量（g）1 . 5 2 ± 0 . 1 6 1 . 3 3 ± 0 . 1 2 a 1 . 2 1 ± 0 . 1 9 a b 1 . 1 6 ± 0 . 1 3 a b 1 . 2 2 ± 0 . 1 5 a 1 . 1 4 ± 0 . 0 8 a b 1 . 2 7 ± 0 . 1 2 a 1 1 . 3 8 7 *肝臟指數(shù)（m g / g）5 5 . 6 1 ± 4 . 8 9 5 0 . 1 7 ± 4 . 0 4 a 4 5 . 2 6 ± 3 . 4 0 a b 4 5 . 0 3 ± 2 . 6 7 a b 4 5 . 5 5 ± 3 . 6 8 a b 4 4 . 4 6 ± 4 . 1 9 a b 4 6 . 6 8 ± 3 . 4 2 a b 1 4 . 1 9 9 *組別模型對照組環(huán)磷酰胺組劑量1組劑量2組劑量3組劑量4組劑量5組F脾臟質(zhì)量（g）0 . 1 8 ± 0 . 0 4 0 . 1 0 ± 0 . 0 3 a 0 . 1 5 ± 0 . 0 4 0 . 1 3 ± 0 . 0 2 0 . 1 2 ± 0 . 0 3 0 . 1 2 ± 0 . 0 3 a 0 . 1 4 ± 0 . 0 3 2 . 7 2 6 *脾臟指數(shù)（m g / g）6 . 5 5 ± 1 . 3 0 3 . 9 1 ± 1 . 1 4 a 5 . 6 7 ± 1 . 2 5 4 . 9 7 ± 0 . 8 0 a 4 . 6 2 ± 1 . 1 9 a 4 . 6 0 ± 1 . 0 2 a 5 . 0 6 ± 1 . 0 7 a 2 . 7 5 4 *胸腺質(zhì)量（g）0 . 1 1 ± 0 . 0 2 0 . 0 7 ± 0 . 0 2 a 0 . 0 9 ± 0 . 0 2 0 . 0 9 ± 0 . 0 1 0 . 0 9 ± 0 . 0 2 0 . 0 9 ± 0 . 0 2 0 . 0 8 ± 0 . 0 1 1 . 7 8 9胸腺指數(shù)（m g / g）4 . 0 5 ± 0 . 8 0 2 . 6 4 ± 0 . 4 7 a 3 . 2 7 ± 0 . 8 1 a 3 . 4 0 ± 0 . 3 9 a 3 . 2 2 ± 0 . 6 7 a 3 . 4 6 ± 0 . 7 1 a 3 . 0 8 ± 0 . 3 7 a 1 . 9 9 1

3 討論

薏苡仁有抗腫瘤作用，臨床上常用于治療胃癌、子宮頸癌、絨毛膜上皮癌等癌癥以及多發(fā)性疣，而目前對于薏苡莖的成分探索逐漸增多，其中，薏苡莖可能含有多糖、黃銅、有機(jī)酸、鞘質(zhì)、三萜、甾體等化學(xué)成分［10］。環(huán)磷酰胺是一種抗癌譜廣、療效較好的抗癌藥物，同時也是一種良好免疫抑制劑，已廣泛應(yīng)用于移植性動物腫瘤實(shí)驗(yàn)和臨床。本研究采用H22肝癌細(xì)胞制備荷H22小鼠腫瘤模型，將不同劑量的薏苡莖醇提取物組與模型對照組和環(huán)磷酰胺組進(jìn)行比較，探索薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用。結(jié)果顯示，模型對照組最先出現(xiàn)腋下腫瘤鼓起且生長最快，自主活動減少、食欲下降、毛色開始暗淡等反應(yīng)，劑量1組、劑量2組小鼠次之，劑量5組和環(huán)磷酰胺組最慢，提示薏苡莖醇提取物可以相對改善荷H22小鼠的生活質(zhì)量。薏苡莖醇提取物劑量組、環(huán)磷酰胺組的瘤質(zhì)量均明顯低于模型對照組，提示薏苡莖醇提取物對荷H22小鼠體內(nèi)肉瘤具有一定的抑制作用，且薏苡莖醇提取物劑量越低，其抑瘤率越高，呈劑量依賴性，這可能與薏苡莖醇提取物的毒副作用有關(guān)。另外，本研究結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺組和薏苡莖醇提取物劑量組的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均低于模型對照組（劑量1組脾臟指數(shù)除外）；薏苡莖醇提取物劑量組的肝臟指數(shù)低于環(huán)磷酰胺組，脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)與環(huán)磷酰胺組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示薏苡莖醇提取物在發(fā)揮抑制腫瘤作用的同時對肝臟也有保護(hù)作用，且其對肝臟的保護(hù)作用優(yōu)于環(huán)磷酰胺，而對脾臟和胸腺的作用與環(huán)磷酰胺無明顯差異。

綜上所述，薏苡莖醇提取物具有抗腫瘤作用，但薏苡莖醇提取物抗腫瘤的主要成分尚未明確，故仍有待進(jìn)一步從有效部位中提取分離出有效成分，并探究有效成分的抗腫瘤機(jī)制，為開發(fā)利用我國薏苡資源，大幅度提高其附加值，也為臨床上治療腫瘤、研究腫瘤新療法等提供一定的理論依據(jù)。

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（2015-03-09收稿 2015-07-13修回）

（本文編輯 陳麗潔）

The anti-tumor effect of Coix stalk alcohol extraction on H22tumor-bearing mice

HUANG Tingzhang1，LI Yuanhui1，GUO Shengqi1，LU Shanshan2，QI Liangyu1，F(xiàn)ENG Xueping3，HUANG Suoyi4△
1 School of Clinical Medicine，2 College of Nursing，3 Experimental Animal Center，4 School of Pharmacy，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise，Guangxi 533000，China△

ObjectiveTo study the anti-tumor effects of alcohol extraction of Coix stalk objects on H22tumor-bearing mice. MethodsThe animal model of tumor bearing mice with H22ascitic tumor cells was established.Eighty-four model mice were randomly and equally divided into Coix stalk extract groups 1-5（10，8，6，4 and 2 g/kg），model control group and cyclophosphamide group.Mice were treated orally with Coix stalk alcohol extraction solution（10，8，6，4 and 2 g/kg），cyclophosphamide 0.02 g/kg and normal saline once a day for 8 days for Coix stalk extract group，cyclophosphamide group and model control group.The mouse activity，the size and the appearance of time of abdominal swelling，and changes of hair，feeding and drinking water quantity were observed in groups of mice.The solid tumor mass was measured in H22tumor-bearing mice.The tumor inhibitory rate，liver index，spleen index and thymus index were calculated.ResultsThe axillary tumor muster was found first in model control group with the fastest growth，reduced independent activity，decreased appetite and dim in hair color，followed by the Coix stalk extract group 1 and group 2.The last was Coix stalk extract group 5 and cyclophosphamide group.The solid tumor mass were（0.47±0.18），（0.37± 0.13），（0.34±0.10），（0.30±0.11）and（0.28±0.09）mg for Coix stalk alcohol extract groups 1-5，which were significantly lower than those of model control group（0.60 mg±0.21 mg，F(xiàn)=5.700，P＜0.05）.The tumor inhibition rates were 21.67%，38.33%，43.33%，50.00%，53.33%and 60.00%in Coix stalk extract groups 1-5 and cyclophosphamide group.The liver index，spleen index and thymus index were lower in cyclophosphamide group and Coix stalk alcohol extract groups than those of model control group（except for the spleen index of Coix stalk extract group 1）.The liver index was lower in Coix stalk ethanol extract groups than that of cyclophosphamide group.There were no significant differences in the spleen index，thymus index between Coix stalk ethanol extract groups and cyclophosphamide group.ConclusionCoix stalk alcohol extract has inhibitory effects on the tumor and liver damage in H22mice.

Antineoplastic Drugs（TCD）；COIX LACRYMA-JOBI L；Coix stalk；alcohol extract；H22；anti tumor in vivo；cyclophosphamide

R285.5

A DOI：10.11958/j.issn.0253-9896.2015.11.015

??究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2014，25（4）:782-783］.

10.3969/j. issn.1008-0805.2014.04.006.

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81360684）；廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2011GXNSFA018046）；廣西中醫(yī)藥科技專項(xiàng)資助課題（GZKZ10-128）；廣西教育廳課題（201106LX425）；廣西中醫(yī)藥管理局課題（gzzc1047）；廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心開放基金專項(xiàng)資助項(xiàng)目（KFJJ2011-04）

1廣西百色市右江區(qū)，右江民族醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院（郵編533000），2護(hù)理學(xué)院，3實(shí)驗(yàn)動物中心，4藥學(xué)院

黃挺章（1988），男，大學(xué)本科在讀，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)、中藥藥理學(xué)等研究

△通訊作者E-mail:huangsuoyi@163.com