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        伴有長期吸煙史食管癌患者中VEGF和Ki-67水平的臨床意義

        2015-11-22 05:29:52孫小莉曹曉俠
        實(shí)用癌癥雜志 2015年12期
        關(guān)鍵詞:血清

        孫小莉 曹曉俠

        食管癌(esophageal carcinoma)近年來已成為人群中常見的惡性腫瘤,發(fā)病率日趨明顯,但發(fā)病的原因至今尚未完全清楚,可能和人們生活的環(huán)境、年齡的大小、飲食的習(xí)慣、生活的不同嗜好及遺傳等因素有關(guān)。有學(xué)者研究表明食管癌患者中許多伴有長期的吸煙史,推測吸煙可能和癌變密切相關(guān)[1]。張蕓等[2]通過實(shí)驗(yàn)表明血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)在食管癌患者體內(nèi)濃度表現(xiàn)出一定的變化性,導(dǎo)致食管癌細(xì)胞的異常增殖而促進(jìn)癌變發(fā)展。蔡開貴等[3]通過研究表明增殖細(xì)胞核抗原Ki-67作為一種和細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白,在食管等附近腺癌組織中顯現(xiàn)出陽性的表達(dá),而正常組織中則沒有,說明Ki-67可能參與食管癌的發(fā)生與發(fā)展。本臨床實(shí)驗(yàn)選取有長期吸煙史的食管癌患者作為主要研究對(duì)象,并對(duì)VEGF和Ki-67進(jìn)行臨床檢測,并對(duì)比分析,試圖探究這兩指標(biāo)在伴吸煙史食管癌患者中表達(dá)的臨床意義,為臨床檢測預(yù)防治療提供幫助。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料

        選取2009年6月-2013年9月來我院經(jīng)食管鏡和病理檢查確診的食管癌患者并活檢取材癌變組織標(biāo)本和血樣標(biāo)本各80例,其中男性標(biāo)本44例,30例有長期吸煙史,14例無吸煙史;女性36例,14例有吸煙史,22例無吸煙史。同時(shí)收集同期正常的食管組織和血清標(biāo)本各20例,其中男性標(biāo)本13例,女性標(biāo)本7例,均無吸煙史?;颊吣挲g34~65歲,平均(48.43±11.13)歲,均排除家族遺傳史。

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        血清標(biāo)本來源:各組患者均于清晨6:00~8:00空腹靜脈采血5 mL,2 h內(nèi)于離心機(jī)4 000 r/min離心5 min,分離并收集血清后于-80℃保存。癌變組織標(biāo)本來源:食管鏡檢查,通過食管鏡鏡頭進(jìn)入人體食道內(nèi)觀察,檢查操作時(shí)頭部應(yīng)高出臺(tái)面,將食管鏡沿口腔右側(cè)插入喉咽部右側(cè)的梨狀窩,將食管鏡的遠(yuǎn)端逐漸移向中線,于杓狀軟骨之后將鏡管口向前下推進(jìn)即達(dá)食管口,當(dāng)患者做吞咽動(dòng)作時(shí)食管口自動(dòng)張開,看清食管入口空隙后,立即將管端導(dǎo)入食管內(nèi),發(fā)現(xiàn)異常部位取少部分組織制作標(biāo)本。采取酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF);采取免疫組化染色法測定增殖細(xì)胞核抗原Ki-67的陽性表達(dá)率。實(shí)驗(yàn)試劑:VEGF免疫分析試劑盒、鼠抗人Ki-67單克隆抗體、羊抗鼠標(biāo)記二抗、DAB顯色劑,免疫組化試劑盒,均購置于福州邁新生物科技有限公司。

        1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

        Ki-67陽性細(xì)胞:免疫組化染色后細(xì)胞核有明顯棕黃色顆粒的出現(xiàn)視為陽性標(biāo)準(zhǔn),胞質(zhì)染成棕黃色不視為陽性,并且對(duì)腫瘤邊緣非特異性染色予以排除。隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野計(jì)數(shù),-表示胞核內(nèi)無棕黃色顆粒或顆粒數(shù)≤5%;+表示陽性率為5%~25%;++表示陽性率為25%~50%;+++表示陽性率 >50%。陽性率越高說明癌細(xì)胞增殖越活躍。

        1.4 統(tǒng)計(jì)方法

        本臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)中計(jì)數(shù)資料用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 19.0處理,組間差異分析采用卡方檢驗(yàn),P<0.05判定為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)檢測結(jié)果

        食管癌患者血清中VEGF的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。伴有吸煙史的食管癌男性患者比起無吸煙史的男性患者,VEGF的表達(dá)水平明顯升高(P<0.05);伴有吸煙史的食管癌女性患者血清中VEGF含量明顯高于無吸煙史的女性患者(P<0.05);伴長期吸煙史的男性食管癌組和女性食管癌組之間,無吸煙史的男性食管癌組和女性食管癌組之間比較,差異性均不明顯(P>0.05)。血清VEGF水平的變化提示VEGF在食管癌的發(fā)病中扮演重要角色,且吸煙和食管癌的發(fā)生密切相關(guān)。見表1。

        表1 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在血清中的表達(dá)水平(±s,pg/mL)

        表1 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在血清中的表達(dá)水平(±s,pg/mL)

        注:S代表伴長期吸煙史組,NS代表無吸煙史組。*為A和B比較P<0.01;男S和男NS比較P<0.05;女S和女NS比較P<0.05;男S和女S比較P>0.05;男NS和女NS比較P>0.05。

        組別例數(shù) VEGF表達(dá)水平 P值正常組(A)20男13 106.34 ±31.54<0.01*女7 98.12 ±19.22 22 346.43 ±23.84食管癌組(B)80男(S)30 434.20 ±21.61<0.05男(NS)14 351.41 ±24.14女(S)14 420.25 ±31.67<0.05女(NS)

        2.2 增殖細(xì)胞核抗原Ki-67的檢測結(jié)果

        Ki-67在20名正常患者中僅有3例表達(dá),表達(dá)率為15.0%;Ki-67在80名食管癌患者中有66例表達(dá),表達(dá)率為82.5%;食管癌患者癌變組織中Ki-67的陽性表達(dá)率明顯高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。伴有吸煙史的食管癌男性患者比起無吸煙史的男性患者,整體陽性率分別為83.3%和78.6%,無明顯差異,但>50%的陽性表達(dá)率分別為36.7%和21.2%,伴吸煙史的Ki-67的表達(dá)水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);伴有吸煙史的食管癌女性患者比起無吸煙史的女性患者,整體陽性率分別為85.7%和81.8%,無明顯差異,但>50%的陽性表達(dá)率分別為35.7%和22.7%,伴吸煙史的Ki-67的表達(dá)水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);伴長期吸煙史的男性食管癌組和女性食管癌組之間,無吸煙史的男性食管癌組和女性食管癌組之間比較,差異性均不明顯,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

        表2 食管癌組織中Ki-67的陽性表達(dá)/例

        3 討論

        食管癌主要表現(xiàn)為食管黏膜上皮細(xì)胞病變性的惡性腫瘤,發(fā)病部位主要為局部病變,在我國發(fā)病的人群主要是50~69歲的中老年人,而且發(fā)病的趨勢日益增加,發(fā)病的原因日趨復(fù)雜,臨床常見進(jìn)行性吞咽梗阻,胸骨后悶脹和疼痛等癥狀[4]。雖然對(duì)于食管癌發(fā)病原因還未完全探明,但是大量研究證明,長期的吸煙史是食管癌一個(gè)很重要的誘發(fā)性因素。Kaneko等[5]通過研究吸煙對(duì)食管細(xì)胞發(fā)育障礙的影響,表明煙草中的致癌物質(zhì)有可能被食管吸收后而直接作用于食管局部,從而引發(fā)病變。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)香煙的煙和焦油含有多種致癌物,這些物質(zhì)可直接攻擊細(xì)胞的脂肪、蛋白質(zhì)和核酸等成分,引起細(xì)胞損傷和病變的發(fā)生。Kapur等[6]印度學(xué)者通過對(duì)煙草和檳榔常接觸地區(qū)的人們的食管癌風(fēng)險(xiǎn)率的研究,發(fā)現(xiàn)長期接觸煙草或長期咀嚼檳榔的人群有染色體基因片段的改變,出現(xiàn)了細(xì)胞加速增殖和分化,癌病病灶的高速擴(kuò)增,進(jìn)而影響著食管癌的發(fā)生發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上研究伴有長期吸煙史的食管癌患者中VEGF和Ki-67因子變化,旨在探究吸煙和食管癌的具體聯(lián)系和作用機(jī)制。

        血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)作為一種血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的肝素結(jié)合因子,能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,增加血管通透性,從而誘導(dǎo)體內(nèi)血管的重新生成。腫瘤內(nèi)新生的血管和淋巴管都是通過血管的生成和淋巴管的生成實(shí)現(xiàn)的,并且在腫瘤的生長和擴(kuò)散中起著非常重要的作用,因此VEGF在促進(jìn)腫瘤血管形成同時(shí)促進(jìn)了腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。賀春雨等[7]通過重組血管內(nèi)皮抑制素,研究其對(duì)食管癌細(xì)胞株體外生長和血管內(nèi)皮生長因子的影響作用,發(fā)現(xiàn)抑制素不但能抑制癌細(xì)胞的增殖,而且下調(diào)了血管內(nèi)皮生長因子的水平,表明可能通過血管生長因子而間接影響癌細(xì)胞增殖。吳如芳等[8]通過對(duì)食管癌患者血清中VEGF的表達(dá)水平的檢測,顯示食管癌患者血清中 VEGF表達(dá)率明顯高于正常體檢者,表明VEGF可能與食管癌的發(fā)生有關(guān)。由此可見食管癌的發(fā)生和VEGF呈密切正相關(guān)的關(guān)系。

        增殖細(xì)胞核抗原Ki-67作為一種細(xì)胞相關(guān)的核抗原,和細(xì)胞的有絲分裂直接相關(guān),在細(xì)胞增殖中不可缺少,但其作用于細(xì)胞增殖的誘導(dǎo)因素和確切機(jī)制尚不完全清楚。臨床研究中Ki-67抗原是多種惡性腫瘤研究中的熱門生物指標(biāo),通過對(duì)Ki-67抗原的檢測可以了解惡性癌變細(xì)胞增殖活動(dòng)。楊愛萍等[9]通過對(duì)Ki-67和食管鱗癌的發(fā)病聯(lián)系的研究,發(fā)現(xiàn)Ki-67在癌病灶中陽性率明顯高于正常組織,并隨著癌變組織浸潤程度的加深表達(dá)率明顯上升,從而證明Ki-67可以反映癌變細(xì)胞的增殖情況。姜功前等[10]通過對(duì)48例癌變患者和正?;颊咧蠯i-67的臨床檢測對(duì)比研究,發(fā)現(xiàn)癌組織中Ki-67 mRNA的表達(dá)水平顯著高于正常組織,Ki-67 mRNA的表達(dá)情況在高分化組、中分化組、低分化組顯示出了不同的表達(dá)率,并且與食管癌分化程度密切相關(guān)。由此可見Ki-67在食管癌的發(fā)病中有重要意義,可作為一項(xiàng)重要臨床檢測指標(biāo)。

        本實(shí)驗(yàn)選取近年來發(fā)病率日趨升高的食管癌患者作為研究對(duì)象,通過檢查得知大多數(shù)人都伴有長期的吸煙史,并通過對(duì)患者分組鑒別并檢測血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和癌變組織中增值細(xì)胞核抗原Ki-67的陽性表達(dá)水平,結(jié)果顯示出食管癌患者血清中VEGF的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01),證明VEGF的表達(dá)水平在食管癌患者的發(fā)病進(jìn)程扮演重要角色,可能通過直接或間接的方式加速局部組織血管的新生導(dǎo)致癌變的快速擴(kuò)展;伴有吸煙史的食管癌男性患者比起無吸煙史的男性患者,VEGF的表達(dá)水平明顯升高(P<0.05),提示吸煙可以誘導(dǎo)食管癌病變的發(fā)生發(fā)展,并且44例男性觀察對(duì)象中伴吸煙史的有30例,比例為68.2%,可見吸煙是男性發(fā)病人群中的非常關(guān)鍵的因素;伴有吸煙史的食管癌女性患者血清中VEGF含量明顯高于無吸煙史的女性患者(P<0.05),提示女性人群中吸煙也能加速癌變的發(fā)展并且癌變的程度和血清中VEGF顯示出正相關(guān)趨勢;伴長期吸煙史的男性食管癌患者和伴長期吸煙史女性患者之間,無吸煙史的男性食管癌組和無吸煙史女性食管癌組之間比較,基本無差異(P>0.05),提示食管癌的發(fā)病率和性別無直接關(guān)系。Ki-67的陽性表達(dá)率在食管癌患者癌變組織中明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01),提示Ki-67和食管癌病變的發(fā)生有密切關(guān)系,顯示出正相關(guān)的關(guān)系;伴有吸煙史的食管癌男性患者比起無吸煙史的男性患者,整體陽性率分別為83.3%和78.6%,無明顯差異,但>50%的陽性表達(dá)率分別為36.7%和 21.2%,顯示出明顯的差異(P<0.05),提示男性患者吸煙對(duì)食管癌的發(fā)生起到重要作用,尤其能加速癌變的發(fā)展進(jìn)程,導(dǎo)致癌變程度的加重;伴有吸煙史的食管癌女性患者比起無吸煙史的女性患者,整體陽性率分別為85.7%和81.8%,無明顯差異,但>50%的陽性表達(dá)率分別為35.7%和22.7%,顯示出明顯的差異(P<0.05),提示女性患者吸煙同樣能加速癌變發(fā)展;伴長期吸煙史的男性食管癌組和伴長期吸煙史女性食管癌組之間,無吸煙史的男性食管癌組和無吸煙史女性食管癌組之間比較,差異性均不明顯(P>0.05),提示性別和癌變發(fā)生發(fā)展無關(guān),且性別對(duì)患者癌變組織中Ki-67的陽性表達(dá)率影響不大。

        本研究通過臨床觀察并檢測伴有長期吸煙史的食管癌患者血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和癌變組織中增殖細(xì)胞核抗原Ki-67的表達(dá)水平,分析得出癌變的發(fā)展程度與VEGF和Ki-67呈現(xiàn)出正相關(guān)的趨勢,并且吸煙在食管癌疾病的發(fā)生和發(fā)展中起到重要的作用,尤其在癌變的發(fā)展中可加快癌變組織的惡化程度。

        [1]萬 瑛.CHEK2基因多態(tài)性與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)因素的研究〔D〕.江蘇大學(xué),2013.

        [2]張 蕓.缺氧對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞系VEGF和Survivin表達(dá)的影響〔D〕.哈爾濱醫(yī)科大學(xué),2012.

        [3]蔡開貴.MCM2、Rb、Ki-67在喉鱗癌組織中的表達(dá)及意義〔D〕.南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院,2008.

        [4]王 茜,景學(xué)安,李 棟.食管癌危險(xiǎn)因素流行病學(xué)研究進(jìn)展〔J〕.泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,28(12):999-1002.

        [5]Kaneko K,Murakami Y,Katagiri.Does daily alcohol and/or cigarette consumption cause low-grade dysplasia,a precursor of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Journal of Clinical Gastroenterology,2010,44(3):173-179.

        [6]Kapur S.Genome-wide analysis of chromosomal alterations in patients with esophageal squamous cell carcinoma exposed to tobacco and betel quid from high-risk area in India〔J〕.Mutation Research,2010,696(2):130-138.

        [7]賀春雨,胡曉娜,王 雯,等.重組血管內(nèi)皮抑素對(duì)人食管癌細(xì)胞株抑制及對(duì)乏氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2015,32(2):361-363.

        [8]吳如芳.血清DLL4與 VEGF水平與食管癌的相關(guān)性研究〔J〕.大家健康,2015,9(4):55-56.

        [9]楊愛萍,姜 藻,陳 靜,等.Musashi-1,Ki-67的表達(dá)與食管鱗癌的臨床意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)生,2009,47(32):57-60.

        [10]姜功前.SYK和Ki-67在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與意義〔D〕.鄭州大學(xué),2011.

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