李紅萍, 李培培, 張 軒, 朱淑娥, 林 潔, 楊慶偉, 陳偉光, 吳曉洋
(廣州醫(yī)科大學附屬沙井醫(yī)院,廣東深圳518104)
目前臨床上仍然缺乏治療地中海貧血(簡稱地貧)的有效手段。因此,通過合理選擇和正確使用實驗室檢查項目和方法進行地貧的篩查和確診,進而防止重癥地貧患兒的出生是控制該病的最經(jīng)濟有效的措施[1]。
地貧的實驗室常規(guī)診斷項目(或稱篩查試驗)主要為血液學檢查,包括紅細胞參數(shù)測定、紅細胞滲透脆性試驗、血紅蛋白組分分析、血清鐵代謝檢查等,大量的報道集中在紅細胞平均體積(mean corpuscular volume,MCV)、紅細胞脆性及血紅蛋白電泳聯(lián)合檢測在地貧診斷中的價值[2-3]。MCV和平均紅細胞血紅蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)都是良好的指標,如果MCH<27 pg和/或MCV<80 fL時,就應高度懷疑為地貧,建議進一步做血紅蛋白分析[4-5]。我們回顧了幾年的患者資料,發(fā)現(xiàn)以MCH聯(lián)合血紅蛋白電泳篩查地貧較MCV聯(lián)合血紅蛋白電泳篩查更敏感,臨床應用更可靠。為了簡化診斷策略、合理選擇檢測項目,正確分析和解釋檢驗結果,我們比較了MCV或MCH聯(lián)合血紅蛋白電泳篩查常見地貧類型的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值。
2011年7月至2013年8月在沙井人民醫(yī)院門診、住院及體檢者中通過基因檢測確診為地貧和非地貧患者共903例,包括β-地貧275例、α-復合β-地貧44例、α-地貧186例、非地貧398例,其中男132例,女771例,年齡2~54歲。樣本分布與國內(nèi)外文獻報道一致[6-8]。
采用真空采血管(深圳美瑞公司)抽靜脈血2 mL于紫頭管中,乙二胺四乙酸二鉀(ethylene diamine tetreacetic acid-K2,EDTA-K2)抗凝,顛倒混勻8次備用。紅細胞參數(shù)在4 h內(nèi)完成測定,其余項目在3 d內(nèi)完成。標本保存于2~8℃冰箱內(nèi)。
采用SYSMEX XE-2100血液分析儀(日本希森美康公司)及配套試劑檢測MCV和MCH,質(zhì)控液為原裝配套。采用CAPILLARYS 2電泳儀(法國Sebia公司)及配套試劑進行血紅蛋白電泳,質(zhì)控液為原裝配套。地貧的基因診斷由廣州金域醫(yī)學檢驗中心進行。α-珠蛋白基因分析采用跨越斷裂點聚合酶鏈反應(gap-polymerase chain reaction,gap-PCR),檢測3種常見缺失。β-珠蛋白基因分析采用PCR結合反向斑點雜交法,檢測17個常見突變位點。
XE-2100血液分析儀及CAPILLARYS 2電泳儀均確認質(zhì)控在控后進行檢測。本實驗室(編碼:114112)參加衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評結果滿意。
紅細胞參數(shù):MCV<80 fL,MCH ﹤ 27 pg[9]。血紅蛋白電泳Hb A2值標準為本實驗室結合Sebi公司提供的標準擬定(年齡2歲以上者)。(1)HbA2>4.0%且血紅蛋白組份正常:與β-地貧、α-合并β-地貧相關;(2)HbA2≥3.0%且有HbE區(qū)帶:與βE位點突變導致的β-地貧相關(包括α-合并 βE位點突變);(3)HbA2為2.5%~4.0%且血紅蛋白組份正常:正常人群;(4)1.0%<HbA2<2.5%且血紅蛋白組份正常:與α-地貧、δ-地貧、缺鐵性貧血相關;(5)HbA2≤2.0%且有HbH和Bart's區(qū)帶:與α-地貧(HbH病)相關。
采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。計算MCV或MCH聯(lián)合血紅蛋白電泳篩查常見類型地貧的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值。
505例地貧的基因檢測結果見表1。樣本分布與國內(nèi)外文獻報道[8-9,11]接近。
表1 基因檢測結果分布
見表2。
β-地貧和α-復合β-地貧的血紅蛋白電泳結果顯示HbA2均≥4.0%,所以把β-地貧和α-復合β-地貧合并為一組計算。見表3。
血紅蛋白電泳(HbA2)可以篩查出95%以上的β-地貧和α-復合β-地貧。MCV聯(lián)合HbA2篩查α-地貧的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為85.56%、83.26%、57.30%和95.98%;MCH聯(lián)合HbA2篩查α-地貧的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為92.47%、81.45%、56.39%和97.66%。見表4、表5。
表2 血紅蛋白電泳檢測結果
表3 紅細胞參數(shù)MCV、MCH檢測結果
表4 血紅蛋白電泳(HbA2)篩查α-查地貧、β-地貧及α-復合β-地貧的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值(%)
表5 MCV、MCH單獨或聯(lián)合血紅蛋白電泳(HbA2)篩查α-地貧的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值(%)
毛細管電泳綜合了高效液相色譜和凝膠電泳的共同優(yōu)點,具有快速、高效、高靈敏度、易定、重現(xiàn)性好等優(yōu)點[11-12],能有效地分離和準確定量HbA、HbF、HbE、HbA2、HbCS、HbH和 HbBart's。從表4可以看出,血紅蛋白電泳可以篩查出95%以上的 β-地貧和 α-復合 β-地貧,但篩查 α-地貧的敏感性和特異性均相對較低,因此需聯(lián)合其它項目進行篩查。
地貧屬于小細胞低色素性貧血,血液學參數(shù)改變主要以MCV、MCH降低為特征,但MCV、MCH的降低還見于缺鐵性貧血、慢性病貧血、環(huán)形鐵粒幼細胞性貧血、鉛中毒等。本研究由基因檢測確診的398例非地貧中有120例MCV<80 fL,133例MCH<27 pg,我們認為不剔除這部分貧血患者標本更符合臨床病例分布,更能反應采用HbA2聯(lián)合MCV或MCH篩查地貧的實際意義。
地貧是單基因遺傳性疾病,α-珠蛋白基因簇定位于16號染色體16p13.3位點,β-珠蛋白基因簇定位于11 號染色體 11p15.3 位點[13]。α-地貧由于α珠蛋白鏈合成部分或完全受抑制,發(fā)生不同程度的缺失和缺陷[14-15]。因此,不同類型α-地貧患者的貧血程度差異明顯,大多數(shù)患者MCV和MCH同時降低,有少數(shù)輕度貧血患者只有MCH<27 pg或 MCV<80 fL。從表5可以看出,以MCV<80 fL或 MCH<27 pg篩查 α-地貧,MCV的敏感性為86.56%,MCH的敏感性為92.47%。β-地貧大多數(shù)呈現(xiàn)小細胞低色素輕度貧血表現(xiàn),MCV和MCH的表現(xiàn)較為一致。而α-復合β-地貧由于α鏈-和β鏈相對不平衡,比單一的α-地貧或β-地貧的貧血程度有所減輕,紅細胞參數(shù)的表現(xiàn)與單純的β-地貧無明顯差異,MCV和MCH的表現(xiàn)也較為一致。
應用MCV與血紅蛋白電泳(HbA2)聯(lián)合篩查α-地貧可以提高敏感性和特異性。從表5可以發(fā)現(xiàn)以MCH聯(lián)合血紅蛋白電泳(HbA2)篩查α-地貧較MCV聯(lián)合血紅蛋白電泳(HbA2)更敏感,敏感性從86.56%提升到92.47%。對于篩查項目,應選擇敏感性高者,可以減少漏診病例。
作為常規(guī)篩查項目,本研究除外部分異常血紅蛋白病和相對比例較少的α-突變基因類型,著重于臨床常見類型的地貧資料分析。β-地貧或α-復合β-地貧則一定要通過基因篩查來診斷。地貧的基因突變檢測技術是診斷的金標準[10]。
綜上所述,血紅蛋白電泳可以篩查出95%以上的β-地貧或α-復合β-地貧,MCH聯(lián)合血紅蛋白電泳篩查α-地貧可以提高篩查的敏感性。
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