泉州市公安局 孫琳琳 程 沖

隨著 DNA檢驗(yàn)技術(shù)及其數(shù)據(jù)庫(kù)在偵查破案和執(zhí)法辦案中的作用越來(lái)越突出，部分在當(dāng)年未進(jìn)行 DNA檢驗(yàn)的檢材被要求重新整理并送檢。這部分生物檢材由于存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，并受存放場(chǎng)所條件的限制，DNA的降解是不可避免的。本實(shí)驗(yàn)利用Chelex-100法和M48磁珠提取法分別提取陳舊性血跡進(jìn)行DNA檢驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)樣本

1～21號(hào)檢材（其中所有檢材存放時(shí)間均為10～14年）。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取

1.2.1.1 Chelex-100法。剪取檢材適量，置于0.5mL離心管中，加入 200μL 10%Chelex-100 和 5μL PK（10mL/mL）；56℃1h，震蕩，100 ℃ 10min,13000rpm 離心3min。

1.2.1.2 M48磁珠提取法。剪取檢材適量，置于1.5mL離心管中，加入200μL G2溶液和20μL 1mg/mL PK，56℃保溫1h，13，000rpm離心3min，取上清液，加入600μL MTL溶液和30μL磁珠，充分混勻，室溫放置15min，期間震蕩數(shù)次。用500μL 80%乙醇溶液洗滌 3次，65℃晾干 10min,加入 30μL去離子水洗脫。

1.2.2 PCR-STR檢測(cè)

用Identifiler Plus試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增，總體系為10μL，模板DNA1μL，PCR熱循環(huán)采用29個(gè)循環(huán)；擴(kuò)增產(chǎn)物ABI3130XL遺傳分析儀檢測(cè)，GeneMapper軟件進(jìn)行STR分型。

2 結(jié)果

表1 STR分型結(jié)果統(tǒng)計(jì)

圖1 用Chelex-100法提取檢材的分型圖譜

圖2 用M48磁珠法提取檢材的分型圖譜

用Chelex-100法提取的21例樣本中，有14例出現(xiàn)等位基因缺失，且有15例平均峰高≤400RFU ；使用M48磁珠法提取的樣本中僅有1例存在等位基因缺失，2例平均峰高≤400RFU。圖1與圖2是針對(duì)同一樣本使用兩種不同方法的STR分型結(jié)果，圖1的檢測(cè)結(jié)果顯示該樣品出現(xiàn)小片度優(yōu)勢(shì)擴(kuò)增，大片段等位基因缺失，等位基因擴(kuò)增不平衡等現(xiàn)象；圖2的檢測(cè)結(jié)果并未出現(xiàn)等位基因缺失，峰值在 400～4000RFU之間，各等位基因間的均衡性良好。

3 討論

現(xiàn)場(chǎng)的生物檢材多種多樣，檢材的 DNA質(zhì)量受溫度、濕度、化學(xué)及生物等多種因素的影響，其保存時(shí)間越久、降解也越嚴(yán)重，而且檢材中越容易摻入PCR抑制劑。本次實(shí)驗(yàn)所使用的樣本均是 10年以上的陳舊性血跡檢材，通過(guò)Chelex-100法提取的結(jié)果提示大部分樣本 DNA發(fā)生不同程度的降解，這是與當(dāng)時(shí)提取的情況及保存時(shí)間和條件有一定關(guān)聯(lián)。與Chelex-100法相比較，M48磁珠法可能更適合陳舊性血跡這類(lèi)DNA發(fā)生降解含有大量抑制物的檢材。M48磁珠提取法是利用細(xì)胞裂解液促使細(xì)胞膜、核膜破裂，并使與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)變性，DNA游離釋放，它是以磁珠為載體，通過(guò)磁珠吸附DNA，而雜質(zhì)不被吸附，然后利用磁力架聚集磁珠，通過(guò)洗滌去除雜質(zhì)，從而得到純度和濃度很高的DNA。而Chelex-100是一種化學(xué)整合樹(shù)脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成，含有成對(duì)的亞氨基二乙酸鹽離子來(lái)整合多價(jià)金屬離子。它不能有效去除雜質(zhì)及降解的 DNA片段；無(wú)細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，只是利用溫度變化和PK促使細(xì)胞核膜破裂釋放DNA，這就使DNA含量和純度受到一定影響。

綜上所述，對(duì)于陳舊性血跡在使用常規(guī)的Chelex-100法效果欠佳的情況下，可考慮采用M48磁珠提取法進(jìn)行復(fù)檢，以最大可能獲得完整的STR分型圖譜。