張彥，陸偉

Ki67在HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌病理組織中的表達(dá)及其臨床意義

張彥1，陸偉2△

目的探討細(xì)胞核增殖抗原Ki67在乙型肝炎病毒（HBV）相關(guān)肝細(xì)胞癌（HCC）病理組織中的表達(dá)及其與臨床病理指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性。方法134例HBV相關(guān)HCC患者按Ki67陽性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)（Ki67指數(shù)）分為Ki67指數(shù)＜10%（陰性）組30例和≥10%（陽性）組104例。采用免疫組化法檢測Ki67在正常及不同分化程度肝組織中的表達(dá)情況。分別計算2組Ki67指數(shù)與年齡、性別、磷脂酰肌醇蛋白3（GPC3）、組織學(xué)分級、BCLC分期、門脈轉(zhuǎn)移、甲胎蛋白（AFP）、肝功能Child-pugh分級資料的相關(guān)性。依Ki67指數(shù)區(qū)間設(shè)定評分以評估Ki67評分與BCLC分級的關(guān)系。結(jié)果（1）SP染色結(jié)果顯示，Ki67在正常肝組織、高分化、中分化及低分化組織中的表達(dá)強(qiáng)度呈增加趨勢。（2）陽性組Ki67指數(shù)與BCLC分期、門脈轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、GPC3、AFP及Child-pugh分級呈正相關(guān)（P＜0.05）；陰性組Ki67指數(shù)與各臨床指標(biāo)均無相關(guān)性（P＞0.05）。（3）Ki67評分隨著BCLC分級的進(jìn)展呈增加趨勢。結(jié)論陽性組Ki67指數(shù)聯(lián)合患者的GPC3、組織學(xué)分級、BCLC分期、門脈轉(zhuǎn)移、AFP、肝功能Child-pugh分級可評估患者HCC的嚴(yán)重程度，其表達(dá)水平有望成為HBV相關(guān)HCC早期診斷、晚期預(yù)后評估的重要指標(biāo)。

肝腫瘤；肝炎，乙型，慢性；診斷；預(yù)后；早期診斷；Ki67

研究認(rèn)為，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）發(fā)生的重要危險因素，而細(xì)胞核增殖抗原Ki67是一種與細(xì)胞增生相關(guān)的標(biāo)志物，在細(xì)胞周期的G1、S和G2期達(dá)到高峰，而在G0期缺失，在許多腫瘤中高表達(dá)［1］。Ki67標(biāo)志物的變化能可靠地反映正常和病變組織的增殖活性，對腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有預(yù)測作用［2］。本研究旨在通過對HBV相關(guān)HCC患者癌組織的臨床病理資料進(jìn)行分析，探討Ki67與其他臨床病理指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性和臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2011年6月—2013年6月于天津市第二人民醫(yī)院明確診斷為HBV相關(guān)HCC的患者134例。所有診斷均符合中華人民共和國2010年慢性乙型肝炎防治指南及2011年版原發(fā)性肝癌診療規(guī)范的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除肝膽管細(xì)胞癌、術(shù)前行經(jīng)導(dǎo)管動脈化學(xué)栓塞（TACE）手術(shù)、病歷或檢查資料不全、因腫瘤位置問題無法留肝臟病理者。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測所有肝組織穿刺標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定＞6 h，經(jīng)脫水、石蠟包埋，常規(guī)切片，片厚4μm。采用免疫組化SP法染色，DAB顯色。鼠抗人Ki67單克隆抗體，采用ABC法、DAB顯色，蘇木精復(fù)染。常規(guī)光鏡檢測Ki67的表達(dá)情況。以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，隨機(jī)讀取10個高倍鏡視野，共計數(shù)1 000個細(xì)胞，以Ki67陽性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)計作Ki67指數(shù)，以評估Ki67的表達(dá)水平。陽性細(xì)胞數(shù)＜10%設(shè)定為陰性組，≥10%為陽性組。2組年齡、性別、巴塞羅那（BCLC）分期、門脈轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、磷脂酰肌醇蛋白3（GPC3）、甲胎蛋白（AFP）及肝功能Child-pugh分級差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

Tab.1Comparison of basic information between patient in both groups表1 2組患者基本資料比較

1.3 研究指標(biāo)（1）Ki67在正常肝組織及不同組織學(xué)分級的HBV相關(guān)HCC組織中的形態(tài)學(xué)表達(dá)情況。（2）研究2組與年齡、性別、BCLC分期、門脈轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、GPC3、AFP、肝功能Child-pugh分級的相關(guān)性。（3）將Ki67指數(shù)＜10%為1分、10%～25%為2分、26%～50%為3分、＞50%為4分。評估Ki67在HBV相關(guān)HCC中隨BCLC分級的變化情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以表示。計數(shù)資料組間比較采用卡方（χ2）檢驗。相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Ki67在正常肝組織及不同組織學(xué)分級癌組織中的表達(dá)隨著患者組織學(xué)分級的進(jìn)展，患者的Ki67表達(dá)強(qiáng)度呈增加趨勢，見圖1。

2.2 Ki67指數(shù)與臨床病理特征的關(guān)系陽性組Ki67指數(shù)與BCLC分期、門脈轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、GPC3、AFP及Child-pugh分級呈正相關(guān)（P＜0.05）；陰性組Ki67指數(shù)與各臨床指標(biāo)均無相關(guān)性（P＞0.05），見表2。

Tab.2Relationship between Ki67 index and clinicopathological factors in HBV related HCC表2 Ki67指數(shù)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

Tab.2Relationship between Ki67 index and clinicopathological factors in HBV related HCC表2 Ki67指數(shù)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

＊P＜0.05

陽性組臨床指標(biāo)年齡（歲）≤60＞60性別陰性組n1Ki67指數(shù)（%）rsn2Ki67指數(shù)（%）rs48 56 35.89±23.18 35.90±26.66-0.02924 6 6.43±2.14 6.13±2.900.749男女84 20 36.13±25.23 34.92±23.070.01824 6 5.92±2.65 7.67±1.370.132 BCLC分期A B 20 48 40 16 30.94±23.70 39.39±23.72 44.70±28.53 0.418＊0.150 C+D門脈轉(zhuǎn)移6.20±2.59 7.67±1.37 4.50±2.89無有90 14 33.73±23.83 51.88±26.390.576＊6 4 2 6.21±2.62 7.00±0.000.679組織學(xué)分級高中低14 76 14 29.08±26.74 36.35±23.23 42.67±29.59 8 2 1 0 0.529＊16 4 6.40±1.43 5.62±3.05 8.50±0.58 0.123 GPC3陽性陰性AFP陽性陰性Child-pugh分級A非A 74 30 38.23±26.08 30.40±20.500.383＊20 10 6.00±2.83 6.80±1.810.424 72 32 39.46±26.64 25.41±13.360.370＊16 14 6.10±2.92 6.60±1.580.619 80 24 36.82±25.29 32.94±23.060.289＊22 8 6.64±2.06 5.25±3.500.189

2.3 Ki67評分與BCLC分期的關(guān)系134例患者的BCLC A、B、C+D的Ki67評分分別為（2.50±1.00）、（7.64±1.12）及（44.44±21.2）分，隨著BCLC分級的進(jìn)展，其Ki67評分也呈增加趨勢。

3 討論

Ki67是一種存在于增殖細(xì)胞核基質(zhì)內(nèi)、與細(xì)胞增殖相關(guān)的核蛋白，能反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性，是判斷腫瘤侵襲力和腫瘤預(yù)后的有效指標(biāo)［3］。Ki67的檢測已被廣泛用于反映腫瘤細(xì)胞增殖速度和預(yù)測腫瘤預(yù)后［4］。Ki67指數(shù)高往往反映腫瘤的侵襲性更強(qiáng)、無瘤生存率低、復(fù)發(fā)率高［5］。

本研究結(jié)果顯示，Ki67的染色強(qiáng)度隨著患者組織學(xué)分級的進(jìn)展呈增加趨勢，證實了Ki67的嗜腫瘤性，提示隨著Ki67指數(shù)表達(dá)程度的增強(qiáng)，疾病的惡性程度增高，腫瘤進(jìn)展速度增快，預(yù)后變差。

本研究顯示，Ki67指數(shù)與肝癌的組織分級呈正相關(guān)，Ki67在高分化肝癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度低于低分化肝癌組織，表明肝癌組織的分化程度越低則其增殖活性越強(qiáng)，惡性程度越高，疾病的預(yù)后情況越差。孫宇等［6］對胰腺癌的研究中亦認(rèn)為，Ki67的表達(dá)強(qiáng)度與胰腺癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度相關(guān)。王寶娜等［7］研究顯示，乳腺癌的組織學(xué)分級與Ki67指數(shù)呈正相關(guān)性，提示Ki67指數(shù)可作為判斷組織學(xué)分級的指標(biāo)。

Ki67指數(shù)陽性組的表達(dá)情況與患者的BCLC分期、組織學(xué)分級均相關(guān)，表明患者行手術(shù)或消融治療前的臨床情況與患者術(shù)中病理結(jié)果對患者疾病的進(jìn)展及預(yù)后的評估具有一致性，這與羅旻等［8］的研究結(jié)果不盡相同，考慮原因為本研究選取的研究對象均為HBV相關(guān)HCC患者，而羅旻等研究的48例中HBV相關(guān)HCC患者為34例。何澤寶等［9］研究顯示，HCC患者AFP升高與HBV感染關(guān)系密切。常家聰?shù)龋?0］研究顯示，HCC患者AFP的產(chǎn)生與HBV感染直接相關(guān)。本研究亦顯示，陽性組AFP水平與患者Ki67指數(shù)呈正相關(guān)，而陰性組AFP水平與Ki67指數(shù)無相關(guān)性，結(jié)合上述文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為10%作為分界點對HBV相關(guān)HCC患者的惡性程度評估和預(yù)后評判具有一定臨床參考價值。

BCLC分期是對腫瘤狀態(tài)及肝功能狀態(tài)的綜合評價，相較于之前的TNM分期其優(yōu)勢在于：BCLC分期的同時即確定了臨床治療方案，并且涵蓋了早中晚期，彌補(bǔ)了TNM分期系統(tǒng)只適用于晚期HCC的不足。故本研究把所有HBV相關(guān)HCC患者按BCLC分期標(biāo)準(zhǔn)分為A、B、C+D 3組，把Ki67指數(shù)劃分為4個評分，可以看出隨BCLC分期進(jìn)展，其Ki67評分明顯增加，且Ki67指數(shù)隨HCC組織學(xué)分級亦呈增加趨勢，均提示著疾病預(yù)后不良。此與肝癌的組織學(xué)分級及門脈轉(zhuǎn)移情況結(jié)論一致。

綜上所述，綜合評價HBV相關(guān)HCC患者的肝功能Child-pugh分級、BCLC分期、門脈轉(zhuǎn)移情況、AFP水平，結(jié)合其治療時取的肝癌病理組織中GPC3水平、組織學(xué)分級及Ki67指數(shù)，可評價其目前腫瘤的惡性程度并預(yù)測其腫瘤的發(fā)展速度及預(yù)后，對于Ki67指數(shù)明顯增高的患者應(yīng)進(jìn)行更為密切的監(jiān)測和更為積極的治療，以期延長患者的生存時間。

（圖1見插頁）

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（2014-12-02收稿2015-01-06修回）

（本文編輯陸榮展）

Expression of Ki67 and its clinic significance in HBV related hepatocellular carcinoma

ZHANG Yan1，LU Wei2△
1 Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China；2 The Second People′s Hospital△

ObjectiveTo investigate the expression of proliferating cell nuclear antigen（Ki67）in hepatitis B virus（HBV）related hepatocellular carcinoma（HCC）tissue and its correlation with clinicopathological parameters of HBV related HCC.MethodsHBV-related HCC patients（n=134）were divided according to Ki67 index（the percentage of Ki67-posi?tive cells）into Ki67 index＜10%group（negative group，n=30）and Ki67 index≥10%group（positive group，n=104）.The cor?relation of Ki67 index with age，gender，glypican 3（GPC3），histological grade，BCLC（Barcelona Clinic liver cancer）staging，portal involvement，AFP（AFP），liver function related child-pugh classification data were calculated in both groups.Ki67 in?dex is set according to the interval score to assess the relationship between Ki67 score and BCLC classification.Results（1）SP staining showed，Ki67 present a trend of increase from normal liver tissue to well-differentiated to medium differentiat?ed tissue to poorly differentiated tissues intensity.（2）In positive group，Ki67 index was correlated with BCLC staging，portal metastasis，histological grade，GPC3 and AFP（P＜0.05）；By contrast，in negative group，Ki67 index was not correlated with any clinical parameter（P＞0.05）.（3）Ki67 score increases with the progress of BCLC classification.ConclusionIn Ki67 positive group，Ki67 index combined with GPC3，histological grade，BCLC staging，portal involvement，AFP and liver func?tion child-pugh classification can assess the severity of the patients with HCC，which is expected to become an important in?dicator for the HBV-related HCC early diagnosis.

liver neoplasms；hepatitis B，chronic；diagnosis；prognosis；early diagnosis；Ki67

R735.7

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.08.027

1天津醫(yī)科大學(xué)研究生院（郵編300070）；2天津市第二人民醫(yī)院

張彥（1983），女，住院醫(yī)師，學(xué)士學(xué)位，主要從事肝炎后肝硬化、肝癌診斷及治療的研究

△通訊作者E-mail：luwei1966@126.com