張瑩，任占平，張芫

三陰與非三陰乳腺癌的臨床病理特征及Ki-67表達(dá)的對比研究

張瑩，任占平，張芫

目的探討三陰與非三陰乳腺癌的臨床病理特征及Ki-67表達(dá)的差異。方法采用免疫組化Envision二步法檢測226例乳腺癌患者雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體2（HER2）的表達(dá)，根據(jù)三者表達(dá)情況分為三陰組（n=41）和非三陰組（n=185），并采用免疫組化方法檢測并比較2組組織中Ki-67陽性指數(shù)差異，以及2組不同臨床病理特征分層Ki-67陽性指數(shù)差異。結(jié)果三陰組腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、Ki-67陽性指數(shù)均高于非三陰組（P＜0.05），2組不同的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)狀況及組織學(xué)分級的Ki-67表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論與非三陰乳腺癌比較，三陰乳腺癌的腫瘤體積更大、瘤細(xì)胞增殖活性更高、更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后更差。

乳腺腫瘤；受體，雌激素；受體，表皮生長因子；孕激素受體；Ki67

乳腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，2012年約有52萬患者死于乳腺癌［1］。三陰性乳腺癌（TNBC）是雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人表皮生長因子受體2（HER2）均為陰性的乳腺癌亞型，內(nèi)分泌和靶向治療效果不明顯［2］。Ki-67是細(xì)胞增殖的重要標(biāo)記，常可作為預(yù)測惡性腫瘤發(fā)展及預(yù)后的指標(biāo)。本研究旨在探討三陰乳腺癌的臨床病理特征及其與非三陰癌Ki-67表達(dá)的差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2011年5月—2013年11月于我院行手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本226例，年齡26～77歲，中位年齡50歲，組織學(xué)分級Ⅰ級16例，Ⅱ級163例，Ⅲ級47例。所有患者均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為浸潤性導(dǎo)管癌，行免疫組化檢測時均未經(jīng)放化療。其中41例腫瘤組織ER、PR、HER2表達(dá)均為陰性（三陰組）。

1.2 方法鼠抗人ER、PR、HER2、Ki-67單克隆抗體購自福州邁新公司。所有患者標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片，采用EnvisionTM二步法，參照試劑盒說明書用已知陽性片組織作陽性對照，陰性對照采用PBS代替一抗。

1.3 結(jié)果判定（1）ER、PR及HER2陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。ER、PR陽性部位定位于細(xì)胞核，每張切片按著色細(xì)胞數(shù)＜1%為（-），≥1%為（+）。HER2陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國臨床腫瘤學(xué)會/美國病理醫(yī)師學(xué)院（ASCO/CAP）2013年公布的HER2檢測指南：無細(xì)胞染色或≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色為（0）；＞10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色為（+）；＞10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整和（或）弱至中等強(qiáng)度的細(xì)胞膜染色，或≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色為（++）；＞10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色為（+++）。HER2免疫組化染色0或（+）被判定為陰性，（+++）被判定為陽性，（++）者用熒光原位雜交（FISH）進(jìn)行驗證，F(xiàn)ISH結(jié)果陽性判定為陽性，相反則判定為陰性。（2）Ki-67陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽性染色定位于細(xì)胞核，以任意5個高倍鏡視野中所有腫瘤細(xì)胞的陽性細(xì)胞所占比例的平均值定義為Ki-67陽性指數(shù)。比較2組年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級上的差異，并比較2組組織中Ki-67陽性指數(shù)差異，以及2組不同臨床病理特征中Ki-67陽性指數(shù)差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。不符合正態(tài)分布的計量資料以M（P25，P75）表示，組間比較用秩和檢驗。計數(shù)資料組間比較用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.12 組臨床特征的比較2組腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移構(gòu)成差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而年齡和組織學(xué)分級差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

Tab.1Comparion of clinical characteristics between two groups表1 2組臨床特征比較（例）

2.22 組Ki-67表達(dá)病理情況比較Ki-67在2組中均有表達(dá)，三陰組Ki-67陽性指數(shù)高于非三陰組［40%（18%，60%）vs 10%（5%，30%），Z=4.340，P＜0.01］，見圖1。

Fig.1Expression of Ki-67 in two groups（Immunohistochemistry Envision，×100）圖1 2組Ki-67陽性表達(dá)情況（免疫組化Envision染色，×100）

2.32 組Ki-67陽性指數(shù)與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)情況及組織學(xué)分級關(guān)系2組患者不同的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及組織學(xué)分級的Ki-67表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

Tab.2Comparison of Ki-67 expression between TNBC and NTNBC in two groups表2 2組不同臨床參數(shù)中Ki-67表達(dá)的比較［%，M（P25，P75）］

3 討論

Perou等［3］應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片技術(shù)對浸潤性乳腺癌進(jìn)行分析時提出了三陰乳腺癌的概念。三陰乳腺癌較其他類型乳腺癌具有發(fā)病年齡早［4］、侵襲能力強(qiáng)、高級別腫瘤為主、易局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移至其他器官、預(yù)后較差等特點(diǎn)，常見BRCA-1基因突變［5］，缺乏有效的治療方案。三陰乳腺癌占全部乳腺癌比例不高。Stevens等［6］報道三陰乳腺癌所占比例大約為12%～24%。本研究226例乳腺癌患者中三陰乳腺癌占18.1%（41/226）。

腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是三陰乳腺癌非常重要的臨床病理參數(shù)，目前研究結(jié)果不盡相同。Wasuthit等［7］認(rèn)為，隨著乳腺癌腫瘤直徑的增大，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率升高，腫瘤的大小是預(yù)測乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移獨(dú)立、重要的影響因素。Iwase等［8］研究表明，三陰乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高于其他亞型。然而也有研究顯示，三陰性乳腺癌患者腫瘤大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)量與非三陰乳腺癌患者無明顯差別［9］。本研究結(jié)果顯示，三陰組腫瘤直徑＞2 cm、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例均高于非三陰組，表明與非三陰乳腺癌相比，三陰乳腺癌患者具有腫瘤體積較大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高的特點(diǎn)。馬吉光等［10］研究表明，發(fā)病年齡和組織學(xué)分級在三陰乳腺癌與非三陰癌2組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。本研究與文獻(xiàn)報道結(jié)果一致。但Liedtke等［4］研究認(rèn)為，三陰乳腺癌發(fā)病年齡較早，考慮可能與地域、樣本量及免疫組織化學(xué)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)，有待加大樣本量進(jìn)一步研究。

Ki-67是增殖細(xì)胞核抗原，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，處于各細(xì)胞周期的細(xì)胞均有Ki-67的表達(dá)，為一個較為真實(shí)反映細(xì)胞增殖的指標(biāo)［11］。通常情況下，腫瘤細(xì)胞增殖狀況可作為預(yù)測惡性腫瘤發(fā)展及預(yù)后的指標(biāo)，同時Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)也與臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，Ki-67在三陰組中的陽性指數(shù)高于非三陰組，提示三陰乳腺癌較非三陰者有更高的增殖活性，Ki-67的高表達(dá)可能是一個不良預(yù)后因素。本研究還發(fā)現(xiàn)，三陰組與非三陰組中Ki-67的表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及組織學(xué)分級均無關(guān)，這與周曉聰?shù)龋?］的報道相一致，提示Ki-67陽性指數(shù)主要與腫瘤局部的增殖相關(guān)，不能反映區(qū)域淋巴結(jié)的狀態(tài)。

綜上所述，三陰乳腺癌作為一個獨(dú)特的乳腺癌亞型，與其他乳腺癌相比腫瘤體積更大、瘤細(xì)胞增殖活性高、易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后更差，目前尚無標(biāo)準(zhǔn)的治療方案。但Daniel等［12］發(fā)現(xiàn)對三陰乳腺癌患者采用以鉑類為主的新輔助化療可獲得相對于非三陰乳腺癌患者更高的完全緩解率。因此，筆者認(rèn)為對乳腺癌組織進(jìn)行ER、PR、HER2及Ki-67的檢測，對其臨床治療方案的制定及預(yù)后判斷有一定的參考價值。

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（2014-12-28收稿2015-03-19修回）

（本文編輯陸榮展）

Comparison of clinical-pathological features and Ki-67 expression profile between triple-negative breast cancer（TNBC）and non-triple-negative cancer

ZHANG Ying，REN Zhanping，ZHANG Yuan
Department of Pathology，Liuzhou People′s Hospital，Guangxi Province，Liuzhou 545006，China

ObjectiveTo compare clinical-pathological features and Ki-67 expression profile between TNBC and Non-triple-negative cancer（NTNBC）.MethodsThe expressions of ER，PR and HER2 were examined by immunohisto?chemical Envision double staining in 226 cases of breast cancer.All cases were divided into triple-negative and non-triplenegative group according to expressions of these three episodes.And Ki-67 expressions in two groups were assessed by im?munohistochemical method.The difference of Ki-67 positive index between these two groups and the difference of Ki-67 positive index between different clinical-pathological features were both analyzed by comparative analysis.ResultsIn pa?tients with TNBC，tumor size，lymph node metastasis rate and Ki-67 index were all significantly higher than that in NTNBC. No significant difference in age and histological grade were detected between these two groups.The expression of Ki-67 was not significant correlated with age，tumor size，lymph node status and histological grade in these two groups.Conclusion Patients with triple-negative breast cancer were with larger tumor size，higher proliferation，more lymph node metastasis and poorer prognosis.

breast neoplasms；receptors，estrogen；receptor，epidermal growth factor；progesterone，receptor；Ki67

R737.9

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.08.018

廣西柳州市人民醫(yī)院病理科（郵編545006）

張瑩（1979），女，主治醫(yī)師、碩士，主要從事乳腺腫瘤病理相關(guān)研究