王 強(qiáng)，聞劍飛，汪 輝，陸保云，胡 俊

（合肥師范學(xué)院 體育科學(xué)學(xué)院，合肥 230601）

阿片肽是一大類由腦啡肽、強(qiáng)啡肽、內(nèi)啡肽、孤啡肽和內(nèi)嗎啡肽共同構(gòu)成的蛋白質(zhì)超家族，其廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)。它們含有酪氨酸－甘氨酸－甘氨酸－苯丙氨酸－甲硫氨酸五個(gè)關(guān)鍵性共同序列，這一序列是阿片肽和受體結(jié)合并表現(xiàn)出生物活性所必需的。近年來研究表明，包括心臟在內(nèi)的多種外周組織器官具有分泌阿片肽的作用，心肌細(xì)胞表面表達(dá)多種阿片受體。

大量研究證實(shí)［1－2］，內(nèi)源性阿片肽的釋放在心肌缺血預(yù)適應(yīng)早期和晚期保護(hù)中均發(fā)揮了重要作用，而且保護(hù)效應(yīng)可以被阿片受體阻斷劑取消。Dickson等人研究發(fā)現(xiàn)［3］，使用阿片受體阻斷劑納洛酮可以部分取消運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)的延遲性心肌保護(hù)效應(yīng)。我們前期的研究也發(fā)現(xiàn)［4］，外源性阿片物質(zhì)——嗎啡聯(lián)合運(yùn)動(dòng)預(yù)處理具有協(xié)同降低晚期心肌缺血再灌注損傷的作用，這一協(xié)同作用可被阿片受體阻斷劑納洛酮阻斷，運(yùn)動(dòng)預(yù)處理的心肌保護(hù)作用可能部分由阿片肽心肌細(xì)胞信號(hào)通路介導(dǎo)。目前，有關(guān)運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)能否直接觸發(fā)內(nèi)源性阿片肽分泌增加并在心肌缺血再灌注損傷早期發(fā)揮保護(hù)作用還鮮有報(bào)道。本研究通過觀察運(yùn)動(dòng)預(yù)處理后早期體液中阿片肽含量的變化，探討運(yùn)動(dòng)預(yù)處理早期心肌保護(hù)的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

健康雄性SD 大鼠80只（由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供），體重為200—220 克，常規(guī)分籠飼養(yǎng)，5 只／籠，自由攝食飲水，室溫控制在26—28 ℃，相對(duì)濕度40%—60%，自然光照。大鼠購回后，按照10米／分鐘的速度進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，每天運(yùn)動(dòng)10分鐘適應(yīng)一周，剔除不能正常運(yùn)動(dòng)的個(gè)體，選取60 只，按體重分層，隨機(jī)分成假手術(shù)組（sham 組）、缺血再灌注模型組（I／R 組）、運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)組（EP組）、運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)＋納洛酮阻斷組（EPN）。分組如下：①sham 組，大鼠靜置于跑臺(tái)上，連續(xù)3天不運(yùn)動(dòng)，最后一次結(jié)束后即刻麻醉再進(jìn)行手術(shù)，只穿線不結(jié)扎；②I／R 組，大鼠靜置于跑臺(tái)上，連續(xù)3天不運(yùn)動(dòng)，最后一次結(jié)束后即刻麻醉再進(jìn)行手術(shù)，穿線結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支，復(fù)制心肌缺血再灌注模型；③EP組，采用短期運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)模型，連續(xù)進(jìn)行3天間歇性跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，最后一次運(yùn)動(dòng)結(jié)束后即刻再復(fù)制I／R模型；④EPN 組，運(yùn)動(dòng)方案同EP 組，最后一次運(yùn)動(dòng)結(jié)束后即刻靜脈注射納洛酮再復(fù)制I／R 模型。

1.2 主要儀器和試劑

高速低溫離心機(jī)（TGL－16G－A，上海安亭），多道生理記錄儀（BL－420S，成都泰盟），紫外可見分光光度計(jì)（SHIMADZU，日本島津），原子吸收分光光度計(jì)（AA－7000，日本島津）；心肌肌鈣蛋白I檢驗(yàn)試劑盒（美國，武漢優(yōu)爾生公司進(jìn)口分裝），誘導(dǎo)型一氧化氮合酶檢驗(yàn)試劑盒（美國，武漢優(yōu)爾生公司進(jìn)口分裝）。

1.3 動(dòng)物模型的建立

1.3.1 大鼠心肌缺血再灌注模型的建立

大鼠以戊巴比妥鈉（麻醉劑量按50mg／kg體重）腹腔注射麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，氣管插管，采用微型動(dòng)物呼吸機(jī)人工通氣，右頸動(dòng)脈插管至左心室，連接多道生理記錄儀記錄血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，并監(jiān)測(cè)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，于胸骨左側(cè)第4—5肋間開胸，暴露心臟，剪開心包膜，除sham 組冠狀動(dòng)脈左前降支只穿線不結(jié)扎，其余各組在冠狀動(dòng)脈左前降支距左心耳下緣2毫米處進(jìn)針，穿過表層于肺動(dòng)脈圓錐旁出針，用直徑約2毫米PE 管穿過結(jié)扎線，穩(wěn)定15 分鐘后行缺血30分鐘再灌注60分鐘，復(fù)制心肌缺血再灌注模型，以心電圖ST 段明顯抬高、T 波倒置、結(jié)扎線以下心肌組織由紅色變?yōu)樯n白或紫紺為心肌缺血標(biāo)志。

1.3.2 大鼠運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)模型的建立

參考Dickson等［3］和潘珊珊等［5］文獻(xiàn)報(bào)道建立運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)動(dòng)物模型，EP組和EPN 組大鼠進(jìn)行連續(xù)3天的間歇性跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)速度為35 米／分鐘，坡度為零，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為60分鐘，以15 分鐘運(yùn)動(dòng)、5 分鐘休息為一組，重復(fù)3 組，以模擬反復(fù)多次的短暫心肌缺血再灌注。每次訓(xùn)練開始前，先進(jìn)行5 分鐘適應(yīng)跑，從15 米／分鐘逐漸增加到35 米／分鐘，訓(xùn)練后5分鐘內(nèi)再從35米／分鐘逐漸降到15米／分鐘。

1.4 動(dòng)物取材與樣本制備

（1）于缺血前30分鐘、缺血后30分鐘及再灌注60分鐘后記錄心電圖和血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。

（2）再灌注60 分鐘后，經(jīng)腹主動(dòng)脈分別取血2 ml、5ml，前者靜置30分鐘后離心，后者加抗凝劑靜置30分鐘后離心，取上清液－20 ℃保存待用。

（3）再灌注60分鐘后，取血結(jié)束后即刻取出心臟，經(jīng)預(yù)冷的滅菌生理鹽水清洗后，置于液氮中，－80 ℃凍存待用。

1.5 測(cè)試指標(biāo)與方法

1.5.1 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)

經(jīng)右側(cè)頸總動(dòng)脈插管至左心室，由生理壓力傳感器輸出至多道生理記錄儀，讀取左室收縮壓（LVSP），左室舒張末期壓（LVEDP），左室內(nèi)壓最大變化速率（±dp／dtmax）。

1.5.2 血清心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的測(cè)定

采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清cTnI，按試劑盒上說明要求測(cè)定。cTnI試劑盒由優(yōu)爾生公司進(jìn)口分裝。

1.5.3 血漿β－內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽A 和亮氨酸－腦啡肽的測(cè)定

采用ELISA 測(cè)定血漿β－內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽A 和亮氨酸－腦啡肽，試劑盒由優(yōu)爾生公司進(jìn)口分裝。

1.5.4 心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2＋濃度測(cè)定

心肌組織在含有1μg／L蛋白酶抑制劑（protease inhibitor）的磷酸緩沖鹽溶液（PBS）中勻漿，低溫離心機(jī)（4 ℃）上高速離心15 min（12 000rpm），取上清儲(chǔ)存于－80 ℃冰箱中。使用去離子水按照100∶1 稀釋心肌勻漿液，采用原子吸收分光光度法在WFX－1F 原子吸收分光光度計(jì)上測(cè)定心肌組織中Ca2＋濃度。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，所用數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，均數(shù)間的兩兩比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異性，表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 血流動(dòng)力學(xué)變化

表1 各組缺血前、缺血30分鐘和再灌注60分鐘后血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較

各組在缺血期（I期）和再灌注期（R 期）LVSP 和±dp／dtmax較缺血前（B 期）均下降，LVEDP 較缺血前上升；I／R 組 和EPN 組在缺血30 分鐘和再灌注60 分鐘后LVSP和±dp／dtmax較sham 組下降明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），EP組較sham 組LVSP和±dp／dtmax值降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；與I／R 組相比，EP 組和EPN 組在缺血前后LVSP、LVEDP和±dp／dtmax降低幅度減小，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），EP 組在再灌注期LVSP±dp／dtmax降低幅度明顯減?。≒＜0.05）；與EP 組相比，EPN組在缺血期各項(xiàng)指標(biāo)變化不明顯，但在再灌注60 分鐘后LVSP和—dp／dtmax值下降，且具有顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 血清心肌肌鈣蛋白I（cTnI）變化

血清cTnI是反映心肌損傷的金標(biāo)志，與sham 組相比各組血清cTnI均明顯升高，有顯著性差異（P＜0.05）；與I／R 組相比，EP組血清cInI漏出明顯減少，具有顯著性差異（P＜0.05），EPN 組血清cTnI降低，但差異不顯著；與EP組相比，EPN 組中血清cTnI值明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 大鼠血清心肌肌鈣蛋白I比較

2.3 血漿β－內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽A 和亮氨酸－腦啡肽變化

I／R 組、EP組和EPN 組血漿中β－內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽A 和亮氨酸－腦啡肽與sham 組相比均有增加，除I／R 組血漿中L－Enk濃度與sham 組差異不顯著外，其余各組均具有明顯差異（P＜0.05）。與I／R 組相比，EP 組和EPN 組血漿中β－End、Dyn A、L－Enk濃度均明顯升高，且有顯著性差異（P＜0.05）。EP組與EPN 組各項(xiàng)指標(biāo)差異不顯著。

表2 大鼠血漿中β－內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽A 和亮氨酸－腦啡肽值比較

2.4 心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化

心肌細(xì)胞胞漿中Ca2＋是心肌舒縮的重要信號(hào)分子，也是心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的重要介質(zhì)。與sham 組相比，各組心肌細(xì)胞胞漿中Ca2＋濃度均明顯升高，有顯著性差異（P＜0.01或P＜0.05）；與I／R 組相比，EP 組心肌細(xì)胞胞漿中Ca2＋濃度明顯降低，具有顯著性差異（P＜0.05），EPN 組心肌細(xì)胞胞漿中Ca2＋濃度有降低趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）；與EP 組相比，EPN 組中心肌細(xì)胞胞漿中Ca2＋濃度明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖2 大鼠心肌細(xì)胞中鈣離子濃度比較

3 討論

3.1 運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)對(duì)心肌缺血再灌注的早期保護(hù)效應(yīng)

心肌缺血再灌注損傷是心臟動(dòng)脈搭橋、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成形術(shù)、心臟外科體外循環(huán)、心肺復(fù)蘇等心血管手術(shù)的重要臨床病理生理過程。大量研究表明［6－7］，心肌缺血預(yù)處理（IPC）可以產(chǎn)生強(qiáng)大的內(nèi)源性心肌保護(hù)效應(yīng)，降低術(shù)后惡性心律不齊的發(fā)生幾率，提高缺血期和再灌注期心肌存活率。近些年的研究發(fā)現(xiàn)［8］，運(yùn)動(dòng)預(yù)處理可以誘導(dǎo)產(chǎn)生類似于缺血預(yù)處理的心肌保護(hù)效應(yīng)，而且存在早期和晚期兩個(gè)保護(hù)時(shí)相。缺血預(yù)處理的早期保護(hù)時(shí)相一般發(fā)生在IPC 后數(shù)分鐘，并持續(xù)1—3小時(shí)。Tomai等人［9］讓犬進(jìn)行5次連續(xù)的5分鐘跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)和5分鐘間歇，發(fā)現(xiàn)1小時(shí)后由冠脈夾閉引起的心肌梗死面積顯著減輕，表明運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)亦可以產(chǎn)生類似于IPC的早期保護(hù)作用。Domenech等人［8］通過建立的犬運(yùn)動(dòng)模型研究發(fā)現(xiàn)，間歇性運(yùn)動(dòng)可以降低隨后心肌缺血再灌注的損傷，減小心肌梗死面積，同樣驗(yàn)證了EP具有早期保護(hù)作用。張敏等人［10］利用Wistar大鼠低壓艙負(fù)重游泳建立了運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)模型，結(jié)果表明運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)可以在早期對(duì)抗心肌缺血再灌注損傷，且有可能是通過提高心肌細(xì)胞抗氧化能力發(fā)揮保護(hù)作用的。本課題前期［4］的研究對(duì)SD 大鼠進(jìn)行大強(qiáng)度間歇跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)（速度35 米／分鐘，運(yùn)動(dòng)15 分鐘、休息5分鐘，重復(fù)3次），60 分鐘／天，共3 天，以模擬IPC 的反復(fù)多次短暫的心肌缺血／再灌注，建立EP 動(dòng)物模型。研究發(fā)現(xiàn)［3］，EP可以明顯減輕大鼠心肌缺血再灌注的損傷程度，發(fā)揮心肌保護(hù)效應(yīng)，而且這一保護(hù)效應(yīng)可被阿片受體阻斷劑納洛酮取消，為進(jìn)一步探討EP對(duì)大鼠心肌缺血再灌注早期保護(hù)效應(yīng)的研究奠定了基礎(chǔ)。

3.2 阿片肽介導(dǎo)的心肌缺血預(yù)適應(yīng)對(duì)心肌缺血再灌注早期的保護(hù)效應(yīng)

機(jī)體多種組織均具有分泌阿片肽的功能，心臟亦可以通過自分泌和旁分泌的調(diào)節(jié)方式合成和釋放內(nèi)源性阿片肽。Springhorn等研究發(fā)現(xiàn)［11］，心肌細(xì)胞中存在Enk、Dyn及其受體和End mRNA 表達(dá)，其中Enk 和Dyn 含量明顯高于End，其含量受到心臟生理和病理功能變化的影響，當(dāng)心臟受到應(yīng)激刺激時(shí)，Enk和Dyn合成、釋放增加，同時(shí)其受體表達(dá)亦上調(diào)。目前研究［12］證實(shí)了μ、δ、κ和orphanin－FQ（OFQ）四種功能相對(duì)明確的阿片受體，除此之外，研究還發(fā)現(xiàn)了一些阿片受體亞型，以上四種受體都具有特異性的內(nèi)源性配體，分別是End、Enk、Dyn 和orphanin。研究證實(shí)［13－14］，心肌細(xì)胞膜和亞細(xì)胞器膜均存在阿片受體，人體心臟表達(dá)δ、κ、μ－OR 三種受體，成年大鼠心臟則以δ、κ－OR 為主。

大量研究證實(shí)，阿片肽參與介導(dǎo)了IPC保護(hù)作用。心肌缺血預(yù)適應(yīng)時(shí)，阿片類物質(zhì)通過神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)和心臟自分泌等途徑釋放到心肌組織，與特異性受體結(jié)合，參與IPC早期心肌保護(hù)作用。Schultz等［1］在開胸大鼠的心肌梗死模型研究中發(fā)現(xiàn)，30分鐘缺血90分鐘再灌注前給予靜脈注射嗎啡3次（100μg／kg）能減小心肌缺血梗死面積，納洛酮能阻斷嗎啡的保護(hù)作用，預(yù)處理前給予δ受體拮抗劑亦能消除保護(hù)作用，認(rèn)為δ受體主要介導(dǎo)了預(yù)處理。Fryer等人［15］進(jìn)一步證實(shí)內(nèi)源性阿片肽及受體在IPC 早期和晚期中均發(fā)揮了重要作用。Peart等［16］用κ－OR 激動(dòng)劑預(yù)處理SD大鼠，能顯著減少經(jīng)歷30分鐘缺血及90分鐘再灌注導(dǎo)致的心肌梗死面積，并且可以降低心律失常的發(fā)生率。張鵬等［17］發(fā)現(xiàn)事先給予SD 大鼠選擇性κ 阿片受體激動(dòng)劑U50488H，可以達(dá)到與強(qiáng)啡肽類似的效應(yīng)，改善缺血再灌注后的心臟功能，降低心肌超微結(jié)構(gòu)損傷，提示內(nèi)源性強(qiáng)啡肽及受體在心肌缺血預(yù)適應(yīng)中的作用。心肌缺血預(yù)適應(yīng)過程中內(nèi)源性阿片肽釋放對(duì)心肌缺血再灌注損傷早期保護(hù)作用和機(jī)制研究為本課題的開展提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)踐依據(jù)。

3.3 內(nèi)源性阿片肽介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)對(duì)心肌缺血再灌注早期的保護(hù)效應(yīng)及可能機(jī)制

心肌缺血再灌注損傷過程中細(xì)胞內(nèi)鈣超載既是缺血再灌注損傷的機(jī)制，又是缺血再灌注損傷的結(jié)果，也是導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡、脹亡、壞死等不可逆損傷的主要病理過程。因此，降低再灌注期胞內(nèi)和線粒體內(nèi)鈣超載是心肌缺血再灌注損傷干預(yù)的主要干預(yù)靶向。細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)是Ca2＋跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和胞內(nèi)鈣庫動(dòng)態(tài)平衡的結(jié)果。在生理狀態(tài)下，心肌細(xì)胞興奮收縮偶聯(lián)，胞外Ca2＋內(nèi)流較少，主要是通過激活肌漿網(wǎng)上Ca2＋通道，使胞內(nèi)鈣庫中Ca2＋釋放，升高的Ca2＋可在肌漿網(wǎng)和線粒體膜上Ca2＋泵作用下，重新泵回鈣庫，胞漿中Ca2＋濃度下降，心肌舒張。心肌缺血再灌注時(shí)，由于細(xì)胞膜、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜受損，胞外Ca2＋內(nèi)流增加，線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)攝取Ca2＋減少，導(dǎo)致胞內(nèi)鈣增加，同時(shí)，細(xì)胞膜上Na＋－Ca2＋交換蛋白逆向轉(zhuǎn)運(yùn)增加，從胞外攝取Ca2＋增多，另外，兒茶酚胺釋放增多，激活細(xì)胞膜上α1－腎上腺素能受體和β腎上腺素能受體，經(jīng)由受體后途徑，導(dǎo)致肌漿網(wǎng)釋放增加，膜上Na＋－Ca2＋交換增多，膜上受體門控鈣通道和電壓門控鈣通道開放加強(qiáng)。從而促進(jìn)鈣內(nèi)流，進(jìn)一步加重細(xì)胞內(nèi)鈣超載［18］。本研究結(jié)果顯示，心肌缺血再灌注后I／R 組較sham 組胞內(nèi)Ca2＋濃度顯著升高，與以上理論結(jié)果一致，EP組胞內(nèi)Ca2＋濃度較sham 組升高，但差異不顯著，EP組Ca2＋濃度顯著低于I／R 組，說明EP早期具有維持心肌缺血再灌注細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的作用。本實(shí)驗(yàn)EPN 組胞內(nèi)Ca2＋濃度高于EP組，并有顯著性差異，與I／R 組相比Ca2＋濃度降低，但差異不顯著，說明阿片肽及受體后途徑至少部分介導(dǎo)了運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)早期維持I／R 細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)。大量研究證實(shí)［19－20］，IPC能通過神經(jīng)內(nèi)分泌途徑升高血漿阿片肽水平，并增加心肌組織內(nèi)阿片肽的合成釋放，發(fā)揮心肌保護(hù)效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)研究顯示，運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)后血漿內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽和腦啡肽水平升高，顯著高于sham 組和I／R 組。大鼠心肌細(xì)胞δ、κ－OR屬于G 蛋白偶聯(lián)受體。研究發(fā)現(xiàn)［21］，內(nèi)源性強(qiáng)啡肽、腦啡肽釋放與心肌細(xì)胞膜上G 蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合，通過抑制β－腎上腺素受體與Gs蛋白結(jié)合，負(fù)性調(diào)節(jié)β－腎上腺素受體及其下游腺苷酸環(huán)化酶（AC）活性，減少細(xì)胞內(nèi)環(huán)腺苷酸（cAMP）的生成，抑制磷脂酶C（PLC），進(jìn)而降低三磷酸肌醇（IP3）和二脂酰甘油（DAG）的合成，減少IP3誘導(dǎo)的肌漿網(wǎng)Ca2＋釋放，降低蛋白激酶C（PKC）活性，從而抑制H＋—Na＋交換，進(jìn)一步減少細(xì)胞內(nèi)外Na＋—Ca2＋交換。阿片肽亦可以活化細(xì)胞膜KATP 通道激活，使胞內(nèi)K＋外流，心肌細(xì)胞膜超極化，電壓依賴性Ca2＋通道關(guān)閉，Ca2＋內(nèi)流減少。本研究顯示，運(yùn)動(dòng)預(yù)處理早期內(nèi)源性阿片物質(zhì)釋放增多，血漿內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽和腦啡肽升高。符榮根等人證實(shí)［22］，運(yùn)動(dòng)應(yīng)激引起的血漿腦啡肽釋放具有抑制交感腎上腺系統(tǒng)的功能。它們可能通過抑制交感神經(jīng)的興奮性，減少兒茶酚胺類遞質(zhì)釋放，從而抑制β腎上腺素能受體門控性鈣通道和L 形電壓門控鈣通道，最終減輕細(xì)胞內(nèi)在缺血再灌注期的鈣超載。細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的維持具有保護(hù)細(xì)胞膜的作用，細(xì)胞內(nèi)Ca2＋增加可以激活磷脂酶，后者使膜磷脂降解加速，破壞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物溢出增多。

血清心肌肌鈣蛋白I（cTnI）是評(píng)估心肌損傷的早期重要標(biāo)志物，具有高靈敏性、高特異性、出現(xiàn)早、持續(xù)時(shí)間長等特點(diǎn)，是目前臨床上公認(rèn)的衡量心肌受損的金標(biāo)準(zhǔn)。生理狀態(tài)下，cTnI大部分以結(jié)合的形式存在于肌原纖維上，少量游離于細(xì)胞胞漿中，cTnI不能穿過細(xì)胞膜，血液中含量極低，當(dāng)細(xì)胞膜受損時(shí)，彌散到細(xì)胞間質(zhì)，進(jìn)入血液循環(huán)。研究證實(shí)［23］，I／R 導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載，胞內(nèi)高鈣可激活鈣依賴性降解酶和鈣蛋白酶，引起肌纖維攣縮和斷裂，心肌細(xì)胞胞漿中游離肌鈣蛋白增加，同時(shí)細(xì)胞膜受損，cTnI漏出增加。本研究結(jié)果顯示，心肌缺血再灌注損傷引起血清cTnI升高，EP具有減少IPC早期cTnI漏出的作用，這一效應(yīng)可以被阿片受體阻斷劑納洛酮取消，表明EP早期在維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性，減少I／R 損傷中發(fā)揮重要作用，而上述效應(yīng)可部分由阿片肽及受體介導(dǎo)。

LVSP、LVEDP、±dp／dtmax等血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)是評(píng)價(jià)心臟舒縮功能的基本指標(biāo)。心肌缺血再灌注會(huì)引起心臟收縮功能減弱、舒張功能障礙，直接導(dǎo)致心臟功能下降。臨床研究發(fā)現(xiàn)，心肌缺血和再灌注期間，心臟功能處于降低狀態(tài)，具體表現(xiàn)為LVSP減小、LVEDP增加、±dp／dtmax降低。心肌缺血再灌注發(fā)生時(shí)，心肌能量代謝障礙，引起心肌收縮力減弱、LVSP 減小，心臟射血期泵血減少，心臟后負(fù)荷增加，導(dǎo)致LVEDP增加。心肌收縮力的降低使反映心臟收縮能力的指標(biāo)＋dp／dtmax減小，細(xì)胞內(nèi)鈣超載導(dǎo)致心肌纖維攣縮，心臟順應(yīng)性和舒張功能下降，—dp／dtmax減小。本研究結(jié)果顯示，I／R 能引起心臟舒縮功能障礙，導(dǎo)致LVSP和±dp／dtmax值降低、LVEDP值增加，EP 組較I／R 組各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)穩(wěn)定，EPN 組較EP 組在再灌注期LVSP 和—dp／dtmax值下降，表明EP能夠維持心肌在缺血和再灌注期的舒縮功能，而這一效應(yīng)可能與細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)維持有關(guān)。

4 小結(jié)

運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷具有早期保護(hù)效應(yīng)，其機(jī)制可能是：運(yùn)動(dòng)預(yù)處理后機(jī)體神經(jīng)—內(nèi)分泌系統(tǒng)阿片肽釋放增加，阿片肽通過對(duì)抗交感神經(jīng)興奮作用和經(jīng)阿片受體后途徑維持細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)，保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整和功能正常，維持心臟舒縮功能，發(fā)揮其早期的保護(hù)效應(yīng)。然而，內(nèi)源性阿片肽介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)對(duì)心肌缺血再灌注早期作用的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路還不十分清晰，缺乏完整鏈條式的解析，信號(hào)交叉效應(yīng)了解還不全面，這些問題將成為下一步研究的重點(diǎn)。

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