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共軛亞油酸和維生素A對產(chǎn)蛋雞免疫機能影響

張忠遠1，吳國玲1，王磊1，程竟竟1，郝健1，單玉蘭2

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所，哈爾濱150030；

2.黑龍江省畜牧獸醫(yī)信息中心，哈爾濱150040）

摘要：試驗旨在研究共軛亞油酸和維生素A對蛋雞免疫機能影響。試驗選取30周齡健康褐殼蛋雞216只，隨機分為9個處理，每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)8只雞，采用3×3兩因素完全交叉分組設(shè)計，分別飼喂添加維生素A（4 000、8 000和16 000 IU·kg-1）與共軛亞油酸（0、2%、4%）試驗日糧，試驗期為6周。結(jié)果表明，CLA顯著增加血清中總蛋白、球蛋白、白蛋白含量（P<0.05），VA對血清中總蛋白、球蛋白含量影響差異極顯著（P<0.01），隨著VA添加量增加，血清中總蛋白和球蛋白含量增加。CLA對血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白G影響差異極顯著（P<0.01），隨著CLA添加水平增加，血清IgA和IgM增加，對血清免疫球蛋白M影響差異顯著（P<0.05），2%CLA添加組血清中IgM含量高于0、4%CLA添加組，隨著VA添加量增加，IgA、IgM和IgG含量增加，VA對IgA影響差異極顯著（P<0.01），對IgM和IgG含量影響差異顯著（P<0.05），CLA和VA兩者交互作用對IgA、IgM、IgG影響差異極顯著（P<0.01）。CLA對白細胞介素-2、腫瘤壞死因子-α含量影響差異極顯著（P<0.01），且CLA添加2%時，IL-2含量最高，TNF-α含量最低。VA對IL-2含量影響差異不顯著（P>0.05），對TNF-α含量影響差異極顯著（P< 0.01），隨VA添加量增加血清中TNF-α含量增加，CLA和VA兩者交互作用對IL-2及TNF-α影響差異顯著（P< 0.05）。CLA顯著促進過氧化物酶體增殖劑激活受體γ（PPARγ）基因mRNA表達（P<0.01），VA對PPARγ基因mRNA表達無顯著影響（P>0.05），CLA和VA交互作用對PPARγ基因mRNA表達無顯著影響（P>0.05）。以上結(jié)果顯示CLA和VA能提高蛋雞免疫機能，且CLA和V A對蛋雞免疫機能影響存在一定互作效應(yīng)。

關(guān)鍵詞：共軛亞油酸；維生素A；產(chǎn)蛋雞；免疫機能

網(wǎng)絡(luò)出版時間2015-1-27 16:00:15 [URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150127.1600.005.html

張忠遠,吳國玲,王磊,等.共軛亞油酸和維生素A對產(chǎn)蛋雞免疫機能影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2015, 46(2): 37-46.

共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是必需脂肪酸亞油酸衍生共軛雙烯酸的多種位置與幾何異構(gòu)體總稱，具有多種生物活性。CLA具有抗癌、抗氧化、增強免疫系統(tǒng)、防止動脈粥樣硬化等生理作用[1-3]，大量研究發(fā)現(xiàn)，在動物日糧中添加CLA，生產(chǎn)性能、抗氧化能力以及免疫機能均受到影響[4-6]。CLA調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)功效被廣泛認可[7]。維生素A（Vitamin A，VA）主要生物學(xué)功能是維持正常視覺反應(yīng)，保護上皮組織完整性和促進骨骼正常發(fā)育。Engedal等研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VA還具有多種免疫調(diào)節(jié)作用，可自發(fā)性活化誘導(dǎo)胸腺細胞和成熟T細胞的死亡，活化Fas抗原誘發(fā)T細胞死亡[8]。王選年等研究表明，日糧中適量添加維生素A可有效提高雛雞免疫水平，提高雞體發(fā)育和抗感染能力[9]。關(guān)于CLA和VA在蛋雞上的應(yīng)用，國內(nèi)研究主要集中于產(chǎn)品中富集，但蛋雞生產(chǎn)過程中健康狀況也同樣重要，由于集約化、規(guī)?；竽琉B(yǎng)殖已成趨勢，尤其產(chǎn)蛋雞飼養(yǎng)密度較大、飼養(yǎng)環(huán)境較差，為滿足產(chǎn)蛋需要，蛋雞體內(nèi)脂質(zhì)代謝活動旺盛，易受各種應(yīng)激影響，引起氧化應(yīng)激。目前關(guān)于CLA和VA兩者共同添加對家禽免疫機能影響研究尚無報道，本試驗通過日糧中添加不同劑量CLA和VA，研究CLA和VA及兩者交互作用對蛋雞機體免疫機能影響，為蛋雞健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗設(shè)計

本試驗采用3×3兩因素完全交叉分組設(shè)計，在日糧中維生素A（維生素A乙酸酯）添加水平為4 000、8 000和16 000 IU·kg-1，與0、2%、4%共軛亞油酸（購自于青島澳海生物有限公司）交叉分組飼喂，試驗選用30周齡健康褐殼蛋雞216只，根據(jù)試驗設(shè)計分為9組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)8只雞（見表1），進行飼養(yǎng)試驗。

1.2試驗日糧和飼養(yǎng)管理

試驗雞基礎(chǔ)日糧采用玉米-豆粕型日糧，飼料原料成分和營養(yǎng)需要參照2010年中國飼料成分及營養(yǎng)價值表，具體成分和營養(yǎng)水平見表2。共軛亞油酸添加采用重量代替法代替日糧中豆油，維生素A采用直接添加方法。

試驗蛋雞采用半開放式立體籠養(yǎng)，每籠兩只。對蛋雞進行隨機分組，過渡期兩周，第一周喂原來的料，第二周再按原用料和試驗料1/3、2/3逐漸過渡，以防止蛋雞換料應(yīng)激。完全過渡后，進入為期6周正式試驗期。每組所用日糧完全是對應(yīng)試驗日糧，每天早晚投料兩次，蛋雞自由采食，飲水為乳頭式飲水器自用飲水，每天早上清糞一次，溫度保持27℃左右，自然通風，濕度適中，保持舍內(nèi)空氣質(zhì)量，環(huán)境衛(wèi)生良好。

表1　試驗方案設(shè)計Table 1　Design of experiments

表2　基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分Table 2　Composition and nutrient of basal diet

1.3測定指標與方法

1.3.1樣品采集與制備

預(yù)試期兩周結(jié)束后，在試驗期中期和末期各采一次血，每個重復(fù)組隨機取兩只雞，用肝素鈉管（購自哈爾濱賽萊博科技有限公司）翅下靜脈采血5 mL，立即送往離心室，3 000 r·min-1離心10 min，將上層清液分離到EP管中，-20℃低溫保存。在飼養(yǎng)試驗第六周，空腹稱重后每個處理隨機選擇2只接近平均體重蛋雞。頸動脈放血屠宰，打開腹腔，迅速分離取出一側(cè)肝臟，用消毒后紗布包好，貼上標簽，放入封口袋中，-80℃冰箱（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所實驗室）中冷凍保存。

1.3.2測定指標及方法

A、用全自動生化分析儀(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所實驗室)測定血清中總蛋白（TP）、球蛋白（GLOB）、白蛋白（ALB）；免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）、免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）、白細胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）依據(jù)酶聯(lián)免疫分析試劑盒測定（購自R＆D公司）。

B、熒光定量PCR（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所實驗室）方法測定過氧化物酶體增殖劑激活受體γ（Peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）基因mRNA表達水平。

1.4數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)使用SPSS17.0軟件進行ANOVA方差分析和Duncan's多重比較，結(jié)果用平均值±標準誤表示。

2　結(jié)果與分析

2.1共軛亞油酸和維生素A對蛋雞血清中總蛋白、球蛋白和白蛋白含量影響

由表3可知，隨著CLA添加量增加，血清中總蛋白、球蛋白、白蛋白含量增加。且CLA對總蛋白和球蛋白影響差異極顯著（P<0.01），對白蛋白影響顯著（P<0.05）。添加4%CLA與0%CLA相比，總蛋白、球蛋白和白蛋白含量分別提高17.91%、16.24%、20.39%。VA對總蛋白和球蛋白影響差異極顯著（P< 0.01），隨著VA添加量增加，血清中總蛋白和球蛋白含量增加，VA對白蛋白影響差異不顯著（P>0.05），白蛋白含量在VA添加水平為8 000 IU·kg-1時最高。CLA和VA交互作用對總蛋白和球蛋白影響顯著（P< 0.05），對白蛋白影響不顯著（P>0.05）。

表3　共軛亞油酸和維生素A對總蛋白、球蛋白和白蛋白含量影響Table 3　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on total protein, globulin, albumin in the serum of laying hens

2.2共軛亞油酸和維生素A對蛋雞免疫球蛋白影響

由表4可知，不同劑量CLA對血清IgA和IgG影響差異極顯著（P<0.01），且隨著CLA添加水平增加，IgA和IgM增加，對血清IgM影響差異顯著（P<0.05），2%CLA添加組血清中IgM含量高于0、4%CLA添加組。VA對血清IgA影響差異極顯著（P<0.01），對IgM和IgG影響差異顯著（P<0.05），隨著VA添加量增加IgA、IgM和IgG含量也增加，16 000 IU·kg-1VA添加組與4 000 IU·kg-1VA添加組相比，分別增加6.64%、3.15%、3.56%。CLA和VA兩者交互作用對IgA、IgM和IgG影響差異極顯著（P<0.01），其中試驗IX組血清中IgA含量高于其他各組，與其他各組之間差異顯著（P<0.05），試驗Ⅴ、IX組血清中IgM和IgG含量均高于其他組，但兩者差異不顯著（P>0.05）。

2.3共軛亞油酸和維生素A對蛋雞血清炎性細胞因子影響

由表5可知，不同劑量CLA對血清中IL-2含量影響差異極顯著（P<0.01），且CLA添加2%時，IL-2含量最高，4%CLA添加組血清中IL-2含量顯著高于0 CLA添加組，2%CLA添加組與4%CLA添加組兩者之間差異不顯著，其中2%CLA添加組和4% CLA添加組相對于0 CLA添加組分別提高12.44%、10.34%。VA對IL-2含量影響差異不顯著（P>0.05），但高劑量VA有增加IL-2含量趨勢。CLA 和VA交互作用對IL-2影響差異不顯著（P>0.05），Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組（CLA水平0）IL-2含量顯著低于其他組。

表4　共軛亞油酸和維生素A對蛋雞免疫球蛋白含量影響Table 4　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on the Ig of laying hens

表5　共軛亞油酸和維生素A對白細胞介素-2和腫瘤壞死因子-α含量影響Table 5　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on the IL-2 and TNF-α of laying hens

不同劑量CLA對血清中TNF-α含量影響差異極顯著（P<0.01），2%CLA添加組血清中TNF-α含量低于0、4%CLA添加組，且差異顯著，相對于0、4% CLA添加組，血清中TNF-α分別降低4.32%、2.40%。VA對TNF-α含量影響差異極顯著（P< 0.01），隨VA添加量增加血清中TNF-α含量增加。Ⅶ組TNF-α含量顯著低于其他各組，CLA和VA兩者交互作用對TNF-α影響差異極顯著（P<0.01）。

2.4共軛亞油酸和維生素A對PPARγ基因mRNA表達影響

由表6可知，不同劑量CLA對PPARγ基因mRNA表達水平影響差異極顯著（P<0.01），CLA添加量為2%和4%時，PPARγ基因mRNA表達水平均高于CLA添加量0，分別升高17.03%、6.87%，其中2%CLA添加組PPARγ基因mRNA表達水平顯著高于4%CLA添加組。VA對PPARγ基因mRNA表達水平無顯著影響（P>0.05），但整體上呈現(xiàn)先下降后上升趨勢。CLA和VA交互作用對PPARγ基因mRNA表達水平無顯著影響（P>0.05）。Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組（共軛亞油酸水平2%）PPARγ基因mRNA表達水平高于其他組，各組總體呈現(xiàn)先上升后下降趨勢。

表6　共軛亞油酸和維生素A對PPARγ基因mRNA表達影響Table 6　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on the PPARγ gene mRNA expression of laying hens

3　討論

3.1共軛亞油酸和維生素A對蛋雞血清中總蛋白、球蛋白和白蛋白含量影響

總蛋白是反映肝臟合成功能指標，由白蛋白和球蛋白組成。血清球蛋白和白蛋白是反映肝功能、腎功能主要指標，白蛋白巰基基團可基于氧化還原狀態(tài)，發(fā)出炎癥細胞調(diào)節(jié)變化信號，Alam等在豬休克模型中采用不同液體進行復(fù)蘇，發(fā)現(xiàn)使用白蛋白進行液體復(fù)蘇，不會激活炎癥反應(yīng)[10]。球蛋白具有免疫調(diào)節(jié)作用，當肝臟發(fā)生炎癥時，人體免疫系統(tǒng)就會隨之被激活，從而導(dǎo)致免疫球蛋白增高。血清蛋白濃度升高不僅反映機體對日糧蛋白質(zhì)利用效率改善，還是維持體液免疫水平、保證機體健康的重要基礎(chǔ)。朱曉強在生長獺兔飼糧中添加VA研究表明，VA添加水平對血清白蛋白含量影響顯著，維生素A添加水平為10 000 IU·kg-1時血清白蛋白含量最高，對血清總蛋白含量影響不顯著[11]。與日糧添加0和20 000 IU·kg-1維生素A相比，日糧添加4 000 IU·kg-1維生素A肉雞和蛋雞白蛋白濃度最高，且蛋雞血清白蛋白濃度顯著高于肉雞[12]。馮少婓研究表明[13]，VA對鵝血清中總蛋白、白蛋白和球蛋白均無顯著影響，且VA添加水平為10 000 IU·kg-1時，25日齡鵝血清蛋白含量最高。本試驗中VA對白蛋白濃度影響差異不顯著，8 000 IU·kg-1維生素A處理組蛋雞白蛋白濃度高于其他處理組，說明日糧中添加適量維生素A可以使蛋雞血清白蛋白濃度升高，缺乏和過量都會使其濃度降低。王丹通過試驗結(jié)果表明[14]，日糧中添加維生素A對朗德鵝血清球蛋白有顯著影響，這與本試驗研究結(jié)果一致，VA對總蛋白和球蛋白影響差異極顯著，隨著VA添加量增加，血清中總蛋白和球蛋白含量增加，這說明，添加維生素A有利于提高血清總蛋白含量，保持與組織蛋白質(zhì)正向動態(tài)平衡作用的加強，促進蛋雞生長。球蛋白含量提高，意味著機體體液免疫功能增強。

郗艷菊等研究表明CLA對血清總蛋白[4]、白蛋白、球蛋白、白球比等影響不顯著，但總蛋白、白蛋白和球蛋白有增加趨勢。劉佰陽發(fā)現(xiàn)[15]，CLA 對35日齡肉仔雞血清中總蛋白、白蛋白無影響，而0.75%CLA對球蛋白影響顯著。黃金秀等研究表明隨飼糧CLA添加量增加[16]，血清白蛋白濃度不斷下降，血清球蛋白濃度升高。本試驗中，隨著CLA添加量增加，血清中總蛋白、球蛋白、白蛋白含量都在增加。且CLA對總蛋白和球蛋白影響差異極顯著，對白蛋白影響顯著。與上述研究結(jié)果相似，血清蛋白濃度升高說明CLA可能通過調(diào)節(jié)機體對外界不良反應(yīng)敏感性改變機體環(huán)境，增強機體體液免疫。CLA和VA交互作用對總蛋白和球蛋白影響顯著，對白蛋白影響不顯著。國內(nèi)外未見兩者互作對蛋雞血清蛋白含量影響的報道，有待進一步研究。

3.2共軛亞油酸和維生素A對蛋雞免疫球蛋白影響

免疫球蛋白是指具有抗體活性的動物蛋白，主要存在于血液中。它是介導(dǎo)體液免疫主要抗體，血清抗體高低在一定程度上反映機體對疾病抵抗能力。IgA、IgG和IgM是家禽體內(nèi)3種重要免疫球蛋白。IgA是機體黏膜防御感染的重要因素；IgG可與淋巴細胞或巨噬細胞結(jié)合，殺死腫瘤細胞，在體液免疫中最為重要；IgM具有沉淀、凝集、補體化等多種功能，是一種高效能抗體，可破壞腫瘤細胞，在抗腫瘤免疫中起重要作用。維生素A與體內(nèi)各種抗體（IgA、IgG、IgM、IgE等）水平密切相關(guān)。馬洪研究指出[17]，維生素A與體內(nèi)抗體IgA水平密切相關(guān)，研究表明，日糧維生素A水平對肉仔雞血清中IgA含量影響差異顯著，日糧維生素A水平升高使肉仔雞21日齡時血清中IgA含量顯著升高[18]。Nonnecke等在體外試驗研究中認為，維生素A可通過促進T淋巴細胞增殖，抑制T淋巴細胞凋亡，影響T淋巴細胞亞群分化等多個環(huán)節(jié)來調(diào)節(jié)T淋巴細胞功能，從而促進IgA生成[19]。本試驗結(jié)果表明，VA對血清IgA影響差異極顯著，隨著VA添加量增加IgA含量增加，與前人研究結(jié)果一致。在本試驗條件下，16 000 IU·kg-1維生素A添加量使肉仔雞血清中IgA水平達到最高。可見日糧中添加維生素A能顯著提高蛋雞血清中免疫活性物質(zhì)含量，改善蛋雞免疫功能。張養(yǎng)東等試驗結(jié)果表明，VA對IgG、IgM影響差異不顯著[20]。溫澤章等研究發(fā)現(xiàn)維生素A可提高豬、鼠等動物的抗體，視黃醇通過B淋巴細胞介導(dǎo)增加免疫球蛋白合成，視黃酸通過T淋巴細胞介導(dǎo)或產(chǎn)生淋巴因子促進免疫球蛋白合成，同視黃醇相比，飼喂等量視黃酸，血清中以IgA、IgM、lgG以及膽汁中IgA活性更高[21]。本試驗中，VA對IgM和IgG影響差異顯著，隨著VA添加量增加、IgM和IgG含量增加。這說明VA能夠通過提高免疫球蛋白濃度來提高對疾病的抵抗能力，同時增強免疫機能，與前人研究結(jié)果不一致，可能與動物種屬，飼養(yǎng)方式和生理狀況有關(guān)，具體原因以及添加水平有待進一步研究。

CLA對動物體液免疫影響主要表現(xiàn)在對免疫球蛋白表達水平的影響，CLA能增加外周血液和腸系膜淋巴結(jié)中IgG、IgA和IgM含量。Yamasaki等在對小鼠試驗中觀察到，CLA能提高脾臟中免疫球蛋白IgA產(chǎn)生，但是不影響血漿中IgG水平[22]。郗艷菊等研究結(jié)果表明，添加1.2%CLA可顯著提高各免疫器官指數(shù)，IgG、IgM也有不同程度提高[4]。Jin等研究發(fā)現(xiàn)，0.5%CLA能增加血淋巴細胞中IgG 和IgA以及腸系膜淋巴細胞中IgA含量，1.5%CLA 對IgG有降低趨勢[23]。本試驗與Jin試驗結(jié)果不同：在添加2%CLA，IgG含量最高，4%CLA對IgG有降低趨勢，CLA對血清IgA和IgG影響差異極顯著，隨著CLA添加水平增加，IgA和IgM增加，對血清IgM影響差異顯著，2%CLA添加組血清中IgM含量高于0、4%CLA添加組，說明CLA能夠促使蛋雞機體大量分泌合成抗體抵御外源異物入侵，在一定程度提高蛋雞體體液免疫水平。另外本試驗研究還發(fā)現(xiàn)，CLA和VA兩者交互作用對IgA、IgG和IgM影響差異顯著，說明CLA和VA在影響蛋雞體液免疫方面具有協(xié)同作用。

3.3共軛亞油酸和維生素A對蛋雞血清細胞因子影響

炎性細胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α是由活化巨噬細胞分泌產(chǎn)生的活性物質(zhì)，這些細胞因子會激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)以及應(yīng)激激素等釋放。白細胞介素是機體免疫功能重要的細胞因子，其中IL-2是調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能重要介質(zhì)之一，可以通過刺激淋巴細胞克隆性增殖調(diào)節(jié)免疫功能。夏兆飛等研究指出，維生素A缺乏會使輔助T細胞活化途徑受損，影響IL-2分泌釋放[24]，龐建建試驗研究表明，VA添加水平對IL-2沒有產(chǎn)生顯著影響，且日糧添加4 000 IU·kg-1維生素A，肉雞和蛋雞IL-2濃度均高于其他處理[12]。Aase認為VA對IL-2分泌調(diào)節(jié)與VA核內(nèi)受體RARs有關(guān)，當RARs抗體存在時VA對IL-2分泌促進作用會消失[25]。本試驗中，維生素A對血清IL-2影響差異不顯著，但高劑量VA有增加IL-2含量趨勢，與上述研究不同，在16 000 IU·kg-1時IL-2濃度最高。說明VA在一定水平能提高血清中IL-2濃度，這也提示細胞免疫功能增強。但適宜VA添加水平及機制有待進一步研究。

CLA調(diào)節(jié)脂肪因子和細胞因子，如瘦素、腫瘤壞死因子、脂聯(lián)素或白介素[26-28]，Hayek等發(fā)現(xiàn)CLA可促使動物體分泌IL-2[29]。鄒書道等試驗表明，隨CLA添加水平提高，試驗第14天、試驗第28天和試驗第42天仔豬血清IL-2都有增加趨勢，但統(tǒng)計差異不顯著[30]。劉永祥等研究顯示，用有絲分裂促進劑來刺激攝食CLA老鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可提高IL-2。劉永祥等研究表明日糧添加CLA提高仔豬外周血淋巴細胞IL-2誘生活性，緩解環(huán)孢酶素A對外周血淋巴細胞IL-2誘生活性的抑制作用[31]。本研究表明，CLA對血清中IL-2含量影響差異極顯著（P<0.01），且CLA添加2%時，IL-2含量最高，4%CLA添加組血清中IL-2含量顯著高于0 CLA添加組。說明適宜CLA能提高血清中IL-2含量，從而調(diào)節(jié)蛋雞免疫機能。研究結(jié)果不同，可能由于試驗動物品種及日齡不同而產(chǎn)生。另外本試驗研究發(fā)現(xiàn)，CLA和VA對蛋雞血清中IL-2含量不存在互作效應(yīng)。國內(nèi)外未見兩者互作對蛋雞血清IL-2含量影響報道，有待深入研究。

腫瘤壞死因子-α是一種涉及到系統(tǒng)性炎癥的細胞因子，同時也是屬于引起急相反應(yīng)眾多細胞因子中一員，在急慢性炎癥反應(yīng)中起重要作用。正常生理情況下，沒有病毒或其他誘生劑作用，機體免疫功能處于平穩(wěn)狀態(tài)，TNF-α分泌受到一定程度抑制，對于機體是有利。馬軼凡研究發(fā)現(xiàn)不同程度維生素A缺乏均使單個核細胞分泌IL-2、TNF-α水平下降，嚴重維生素A缺乏還使淋巴細胞轉(zhuǎn)化受到明顯抑制[32]。這與本試驗研究結(jié)果不同，本試驗中，隨著VA添加量增加，TNF-α水平卻升高。這可能因試驗動物種類及VA添加量不同所致，且VA對動物血清中TNF-α研究甚少，所以VA對TNF-α水平影響尚待深入研究。

與飼喂亞油酸老鼠相比，CLA異構(gòu)體混合組可以降低血清中TNF-α達50%[33-34]。Yang報道與飼喂玉米油試驗組相比[35]，飼喂c9，t11CLA降低脂多糖誘發(fā)TNF-α以及直接影響巨噬細胞和單核細胞。在灘羊日糧中添加不同劑量共軛亞油酸使免疫應(yīng)激灘羊血液中腫瘤壞死因子含量顯著下降或極顯著性下降[36]。本試驗中，CLA對血清中TNF-α含量影響差異極顯著，2%CLA添加組血清中TNF-α含量低于0%、4%CLA添加組，且差異顯著，相對于0、4% CLA添加組，血清中TNF-α分別降低4.32%、2.40%，與上述研究結(jié)果一致。CLA對前炎性細胞因子TNF-α產(chǎn)生表現(xiàn)出抑制作用。細胞因子對淋巴細胞功能有重要調(diào)節(jié)作用。其中TNF-α是重要炎性細胞因子，具有活化淋巴細胞和促進淋巴細胞增殖作用。在一定濃度時，2%CLA對淋巴細胞增殖開始表現(xiàn)抑制作用，說明機體免疫功能處于平穩(wěn)狀態(tài)，TNF-α分泌可能受到抑制，對蛋雞機體健康狀況是有利。還有鼠類一些試驗顯示，CLA促進動物分泌TNF-α[37-38]，但Akahoshi等并沒有發(fā)現(xiàn)CLA對小鼠血液TNF-α有影響[39]。由于CLA作用可能受所用模式動物、動物年齡、飼養(yǎng)環(huán)境和CLA異構(gòu)體組成種類及比例影響，試驗結(jié)果不一致。本試驗研究還發(fā)現(xiàn)，CLA和VA兩者交互作用對TNF-α影響差異極顯著，說明CLA和VA在調(diào)節(jié)血清中TNF-α方面具有協(xié)同作用。

過氧化物酶體增殖劑激活受體（Peroxisome proliferators-activated receptors，PPARs）是核激素受體家族中配體激活受體，核受體為配體激活型轉(zhuǎn)錄因子，過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）為核受體，是調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄和細胞功能的重要成分，PPAR能通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控炎癥反應(yīng)過程中某些細胞因子表達和免疫細胞增殖與分化。PPARs 有3種亞型，即PPARα、PPARβ（亦稱PPARδ）和PPARγ，PPARγ參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、調(diào)節(jié)炎癥、細胞凋亡等病理過程[40]，PPARγ還可通過提高胰島素敏感性參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和葡萄糖代謝[41-43]。

研究表明，隨著VA添加量升高，PPARγ基因mRNA相對表達量下降，VA對PPARγ基因mRNA表達有明顯抑制作用[44]。本試驗中，VA對PPARγ基因表達無顯著影響（P>0.05），在VA添加量為16 000 IU·kg-1時，PPARγ基因mRNA表達量最高，與上述結(jié)果不一致，VA對PPARγ基因表達研究還甚少，VA能否通用過對PPARγ基因表達影響來提高蛋雞免疫機能還不確定，需深入研究。CLA異構(gòu)體是PPARs有效配體或活化劑，可通過PPARs發(fā)揮作用[45-46]。CLA對免疫反應(yīng)介導(dǎo)很大程度是通過活化PPARγ，調(diào)節(jié)免疫細胞分化和各種細胞因子基因表達，發(fā)揮其獨特免疫調(diào)節(jié)和抗炎癥作用。不同CLA異構(gòu)體在活化PPARγ時有其特異性。賴長華研究表明，CLA可使免疫應(yīng)激斷奶仔豬脾臟、胸腺和淋巴細胞PPARγ mRNA表達增強，并且c9，tll和t10，cl2 CLA也能夠促進體外培養(yǎng)豬淋巴細胞PPARγ活化[47]。張海軍研究發(fā)現(xiàn)，CLA顯著提高脾PAPRγ mRNA相對含量[48]，但Ryder等卻發(fā)現(xiàn)c9[49]，t11共軛亞油酸抑制大鼠肝臟PPARγ基因表達。Yu等認為PPARγ在免疫機制方面扮演著重要作用，CLA是通過PPARγ途徑抑制TNF-α產(chǎn)生[50]。本試驗研究結(jié)果，CLA對PPARγ基因mRNA表達影響差異顯著（P<0.05），隨著CLA添加量增加PPARγ基因mRNA表達水平升高，在CLA添加量為2%時PPARγ基因mRNA表達水平最高，而在CLA添加量為2%時TNF-α含量最低，與Yu等研究一致。本試驗結(jié)果顯示CLA抑制炎性細胞因子TNF-α產(chǎn)生，提高PPARγ基因mRNA表達，可能是CLA降低一些炎性細胞因子產(chǎn)生，解除了炎性因子對PPARγ抑制作用所致。具體機制還需進一步研究。另外，本試驗研究結(jié)果表明，CLA和VA對PPARγ基因mRNA表達水平不存在互作效應(yīng)。國內(nèi)外未見兩者互作對蛋雞PPARγ基因表達影響報道，有待深入研究。

4　結(jié)　論

a. CLA顯著增加血清蛋白和免疫球蛋白含量，除中IgM含量外，添加4%CLA組血清蛋白及免疫球蛋白含量均高于0 CLA和2%CLA組，CLA對IL-2、TNF-α含量影響差異極顯著，CLA添加2%時，IL-2含量最高，TNF-α含量最低，CLA顯著促進PPARγ基因mRNA表達。

b.除白蛋白和IL-2外，VA對血清蛋白含量、免疫球蛋白含量以及TNF-α含量影響差異顯著，且隨著VA添加量的增加，血清中各項免疫指標含量增加，VA對PPARγ基因mRNA表達無顯著影響。

c. CLA和VA兩者交互作用對總蛋白、球蛋白、IgA、IgM、IgG、及TNF-α影響差異顯著。

以上結(jié)果顯示CLA和VA具有提高蛋雞免疫機能作用，且CLA和V A對蛋雞免疫機能影響存在一定互作效應(yīng)。

[參考文獻]

[1]張廣民,文杰,陳繼蘭,等.共軛亞油酸對北京油雞肉品質(zhì)及血清和脂蛋白脂酶影響[J].中國飼料, 2006, 15: 17-20.

[2]Lucchi L, Banni S, Iannone A. Changes in conjugated linoleic acid and palmitoleic acid are correlated to retinol levels in chronic renal failure in both hemodialysis and conservative treatment patient[J]. Artificial Organs, 2005, 29(5): 413-418.

[3]尹福泉.日糧調(diào)控對奶牛乳脂中共軛亞油酸含量影響研究[D].呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué), 2006.

[4]郗艷菊.共軛亞油酸對肉雞生產(chǎn)性能及免疫指標影響研究[J].中國家禽, 2009, 31(1): 19-26.

[5]劉雪蘭,艾武,井慶川,等.共軛亞油酸雞蛋對小鼠血脂和抗氧化功能影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報, 2012, 32(8): 1174-1176.

[6]劉永祥,劉艷麗,徐秋良,等.飼糧添加共軛亞油酸對肉仔雞腸道黏膜免疫反應(yīng)影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報, 2012, 24(1): 124-130.

[7]Pariza M W, Park Y, Cook M E. The biologically active isomer of conjugated linoleic acid[J]. Progress of Lipid Research, 2001,40 (4): 283-298.

[8]Engedal N, Litwack G. Vitamins and the immune system [M]. Netherlands: Elsevier, 2011.

[9]王選年,馮春花,鄧瑞廣,等.日糧維生素A對雛雞免疫應(yīng)答影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報, 2002, 33(3): 254-257.

[10]Alam H B, Stanton K, Koustova E, et al. Effect of different resuscitation strategies on neutrophil activation in a swine model of hemorrhagic shock[J]. Resuscitation, 2004, 60(1): 91-97.

[11]朱曉強,李福昌,李萬佳,等.飼糧維生素A添加水平對生長獺兔生長性能、毛皮品質(zhì)、維生素A沉積、血清生化指標及抗氧化性能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報, 2014, 26(4): 981-988.

[12]龐建建,等.日糧添加維生素A對肉雞和蛋雞生長性能及免疫功能影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報, 2010, 22(4): 911-916.

[13]王丹.維生素A對朗德鵝肥肝抗氧化性能和血液生化指標影響研究[D].石河子:石河子大學(xué), 2011.

[14]馮少婓.鋅、維生素A及其互作效應(yīng)對鵝生長性能、免疫力及血液理化指標的影響[D].太谷:山西農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

[15]劉佰陽.共軛亞油酸對肉仔雞脂類代謝及免疫性能影響[D].哈爾濱:東北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.

[16]黃金秀,齊仁立,楊飛云,等.飼糧添加共軛亞油酸對豬生長性能、血清生化指標和激素水平的影響[J].營養(yǎng)飼料, 2014, 50(3): 56-59.

[17]馬洪.維生素A對動物免疫功能影響[J].畜牧獸醫(yī)科技信息, 2005, 11: 71-72.

[18]郝曉潔.日糧維生素A水平對肉仔雞生長、免疫和抗氧化指標及維生素A組織沉積影響[D].蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011.

[19]Nonnecke B J, Harp J A. Effect of chronic staphylococcal mastitis on mitogenic responses of bovine lymphocytes[J]. Dairy Sci, 1985(68): 3323-3328.

[20]張養(yǎng)東,王安.維生素A對籠養(yǎng)育成蛋鴨免疫機能和相關(guān)激素分泌影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報, 2009, 21(1): 36-40.

[21]溫澤章,王興金,何后軍.維生素A對小白鼠免疫機能影響[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志, 1993, 4: 14-16.

[22]Yamasaki M, Chujo H, Hirao A, et al. Immunoglobulin and cytokine production from spleen lymphocytes is modulated in C57BL/6J mice by dietary cis-9, trans-11 and trans-10, cis-12 conjugated linoleic acid[J]. J Nutr, 2003, 133(3): 784-788.

[23]Jin Y K, Byung H C. Effect of combination dietary conjugated linoleic acid with Vitamin A (Retinol) and selenium on the response of the immunoglobulin production in mice[J]. J Nutr, 1999, 129: 32-38.

[24]夏兆飛,金久善.維生素A對AA肉雞生長發(fā)育和肝腎功能影響[J].中國獸醫(yī)學(xué)報, 2004, 31(6): 6-9.

[25]Aase E N, Engedal S N, Heidi K B. Retinoic acid stimulates the cell cycle machinery in normal T cells: Involvement of retinoic acid receptor-mediated IL-2 secretion[J]. The Journal of Immunology, 2002, 169: 5555-5563.

[26]Yeonhwa P, Michael W P. Mechanisms of body fat modulation by conjugated linoleic acid (CLA) [J]. Food Research Internation, 2007,40: 311-323.

[27]張文斌,季愛玲,曹瑞,等.共軛亞油酸對肥胖大鼠脂肪組織瘦素影響[J].中國公共衛(wèi)生, 2005, 21(4): 447-448.

[28]周曉蓉,孫長顥,王海英,等.共軛亞油酸對肥胖大鼠脂聯(lián)素基因表達影響[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2005, 39: 33-36.

[29]Hayek M G, Han S N, Wu D. Dietary conjugated linoleic acid influences the immune response of young and old[J]. The Journal of Nutrition,1999, 129(1): 32-38.

[30]鄒書通,蔣宗勇,林映才,等.共軛亞油酸對14日齡斷奶仔豬部分免疫指標影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報, 2006, 18(1): 6-11.

[31]劉永祥,程偉,邱榮超,等.共軛亞油酸對環(huán)孢酶素A注射仔豬細胞免疫反應(yīng)的影響[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2013, 18(2): 130-136.

[32]馬軼凡.不同水平維生素A時大鼠T細胞亞群、淋巴細胞轉(zhuǎn)化及細胞固子分泌影響[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 1999, 19(2): 81-83.

[33]Akahoshi A, Goto Y, Murao K, et al. Conjugated linoleic acid reduces body fats and cytokine levels of mice[J]. Bioscience Biotechnology and Biochemistry, 2002, 66: 916-920.

[34]Akahoshi A, Koba K, Lchinose F, et al. Dietary protein modulates the effect of CLA on lipid metabolism in rats[J]. Lipids, 2004, 39: 25-30.

[35]Yang. Dietary conjugated linoleic acid decreased cachexia, macrophage tumor necrosis factor-alpha production, and modifies splenocyte cytokines production[J]. Experimental Biology and Medicine, 2003, 228: 51-58.

[36]張培松,周玉香,朱彥強,等.共軛亞油酸對灘羊免疫應(yīng)激影響研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 40(3): 1505-1506.

[37]孫素娟,申竹芳,陳躍騰,等.結(jié)合亞油酸對胰島素抵抗模型MSG肥胖小鼠影響[J].藥學(xué)學(xué)報, 2003, 38(12): 904-907.

[38]Kelley D S, Warren J M, Simon V A. Similar effects of c9, t11-CLA and t10, c12-C LA on immune cell functions in mice[J]. Lipids, 2002, 37(7): 725-728.

[39]Akahoshi A, Koba K, Ohkura K. Metabolic effects of dietary conjugated linoleic acid (CLA)isomers in rats[J]. Nutrition Research, 2003, 23(12): 1691-1701.

[40]Berger J, Moller D E. The mechanisms of action of PPARs[J]. Annu Rev Med, 2002, 53: 4092-4035.

[41]Vamecq J, Latruffe N. Medical significance of Peroxisome Proliferator activated receptors[J]. Lancet, 1999, 354(9173): 141-148.

[42]Kersten S, Desvergne B, Wahli W. Roles of PPARs in health and disease[J]. J Nature, 2000, 405: 421-424.

[43]Evans R M, Barish G D, Wang Y X. PPARs and the complex journey to obesity [J]. Nature Medicine, 2004, 10(4): 1-7.

[44]張幸開.維生素A對肉牛肌內(nèi)脂肪沉積及ACC/HSL、PPARγ基因表達影響[D].楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué), 2005.

[45]Peters J M, Park Y, Gonazlez F J, et al. Influence of conjugated linoleic acid on Body composition and target gene expression in peroxisome proliferator activated receptor alpha-null mice[J]. Biochim Biophys Acta, 2001, 15(33): 233-242.

[46]Khan S A, Vanden J R. Cuerrnt topics role of nuclear receptors in the regulation of Gene expression by dietary fatty acids[J]. J Nutr Bioch, 2003, 14: 554-567.

[47]賴長華.共軛亞油酸對斷奶仔豬免疫應(yīng)激調(diào)控[D].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué), 2004.

[48]張海軍.共軛亞油酸對肉仔雞免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)作用與機理[D].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.

[49]Ryder J W, Portocarrero C P, Song X M. Isomer specific anti diabetic properties of conjugated linoleic acid: Improved glucose tolerance, skeletal muscle insulin action, and UCP-2 gene expression[J]. Diabetes, 2001, 50(5): 1149-1157.

[50]Yu Y. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: evidence for a PPAR gamma-dependent mechanism[J]. Biochim Biophys Acta, 2002, (158): 88-99.

Zhang Zhongyuan, Wu Guoling, Wang Lei, et al. Effect of conjugated linoleic acid and Vitamin A on immune function of laying hens[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2015, 46(2): 37-46. (in Chinese with English abstract)

Effect of conjugated linoleic acid and Vitamin A on immune function of

laying hens

/ZHANG Zhongyuan1, WU Guoling1, WANG Lei1, CHEN Jingjing1, HAO Jian1, SHAN Yulan2

(1. Animal Nutrition Institute, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 2. Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Information Center, Harbin 150040, China)

Abstract:The present study was conducted to investigate the effect of conjugated linoleic acid (CLA) and Vitamin A (VA) on immune function of laying hens. Two hundred and sixteen healthful brown layers at 30 weeks old were randomly allocated to 9 treatments, each treatment has 3 replicates of 8 broilers. 3×3 completely cross-group design was used in the experiment, in which the layers were fed the diets for 6 weeks with different levels of Vitamin A(4 000, 8 000 and 16 000 IU·kg-1) and CLA(0, 2%,

4%). The results showed that CLA increased total protein, globulin, albumin in the serum significantly, VA had significant effect on total protein，globulin in the serum (P<0.01), total protein，globulin in the serum were increased with VA levels increasing. CLA had significant effect on immunoglobulin A (IgA) and immunoglobulin G (IgG) in the serum (P<0.01), and had significant effects on immunoglobulin M (IgM) (P<0.05). IgA and IgM in the serum were increased with CLA levels increasing, IgG in 2% CLA treatments were higher than in 0% and 4% treatments. VA had extremely significant effect on IgA (P< 0.01), and had a significant impact on IgM and IgG (P<0.05), IgA, IgG and IgM in the serum were increased with VA levels increasing, Between VA and CLA interaction had extremely significant effect on IgA, IgM and IgG (P<0.01). The interleukin-2 (IL-2) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) were affected significantly by the levels of CLA (P<0.01), and CLA with 2% in diets, the highest levels of IL-2, and the lowest levels of TNF-α. VA had no significant effect on IL-2, but had significant effect on TNF-α (P<0.01), TNF-α in the serum were increased with the increasing VA levels. Between CLA and VA interaction had significant effect on IL-2 and TNF-α(P<0.05). CLA significantly enhanced mRNA expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ(PPARγ) (P<0.01), no significant effect of VA on the mRNA expression of PPARγ(P>0.05). Between CLA and VA interaction had no significant effect on mRNA expression of PPARγ. These results suggested that CLA and VA improved immune function of laying hens, and CLA and VA interaction had a significant effect on the immune function of laying hens.

Key words:conjugated linoleic acid; vitamin A; laying hens; immune function

基金項目：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)博士啟動基金（2010RCB35）；黑龍江省高等學(xué)校飼料營養(yǎng)重點實驗室開放課題（yy-2012-09）

作者簡介：張忠遠（1971-），男，副教授，博士，研究方向為家禽營養(yǎng)。E-mail: zyzhang@neau. edu. cn

收稿日期：2014-10-15

文章編號：1005-9369（2015）02-0037-10

文獻標志碼：A

中圖分類號：S831.5