武靜蓮，姜林芬，吳紅梅，胡林海，胡芳弟

（1.甘肅省第三人民醫(yī)院，甘肅蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅蘭州 730050；3.嘉峪關(guān)市第一人民醫(yī)院，甘肅嘉峪關(guān) 730000；4.蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅蘭州 730000）

紫歸子?jì)D炎康泡騰栓5種活性成分的含量測(cè)定

武靜蓮1，姜林芬2，吳紅梅2，胡林海3，胡芳弟4*

（1.甘肅省第三人民醫(yī)院，甘肅蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅蘭州 730050；3.嘉峪關(guān)市第一人民醫(yī)院，甘肅嘉峪關(guān) 730000；4.蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅蘭州 730000）

目的探討紫歸子?jì)D炎康泡騰栓中5種活性成分的含量測(cè)定方法，并測(cè)定5批自制紫歸子?jì)D炎康泡騰栓中5種活性成分的含量。方法采用高效液相色譜法，以KromasiL C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），分別以甲醇-水（82∶18）和甲醇-0.5%醋酸（32∶68）為流動(dòng)相，測(cè)定該制劑中左旋紫草素和阿魏酸的含量。以甲醇-0.02%三乙胺水溶液（53∶47）為流動(dòng)相，測(cè)定該制劑中苦參堿和氧化苦參堿的含量。以KromasilODS保護(hù)柱（4.6 mm×10mm，5 μm），以甲醇-0.1%三乙胺水溶液（80∶20）為流動(dòng)相，測(cè)定該制劑中β，β-二甲基丙烯酰的含量。結(jié)果實(shí)驗(yàn)室自制的5批紫歸子?jì)D炎康泡騰栓中阿魏酸、左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、苦參堿、氧化苦參堿的平均含量分別為0.31 mg/枚、0.14 mg/枚、0.28 mg/枚、19.80mg/枚、1.69 mg/枚。結(jié)論使用的紫歸子?jì)D炎康泡騰栓中阿魏酸、左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、苦參堿、氧化苦參堿的高效液相色譜含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單易行，可以用于紫歸子?jì)D炎康泡騰栓的質(zhì)量控制。

紫歸子?jì)D炎康泡騰栓；含量測(cè)定；質(zhì)量控制；活性成分

紫歸子?jì)D炎康泡騰栓是在傳統(tǒng)中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，針對(duì)現(xiàn)代婦科中藥研究領(lǐng)域?qū)W術(shù)熱點(diǎn)，從當(dāng)歸、紫草、苦豆子3味婦科良藥中提取與治療陰道炎相關(guān)的活性成分，即具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、活血化瘀、殺蟲(chóng)止癢功效的活性組分，采用現(xiàn)代技術(shù)制成的婦科用栓劑。該制劑中的主要抗炎活性成分包括阿魏酸［1］、左旋紫草素［2］、β，β-二甲基丙烯酰［3］、苦參堿和氧化苦參堿［4］。為了全面系統(tǒng)地控制該制劑的質(zhì)量，本文采用HPLC（高效液相色譜）方法，對(duì)該制劑中的左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、阿魏酸、苦參堿及氧化苦參堿5種成分進(jìn)行含量測(cè)定方法研究。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

左旋紫草素（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)769-9001）；β，β-二甲基丙烯酰（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)116-200503）；苦參堿（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0805-9804）；氧化苦參堿（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0780-9703）；阿魏酸（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110773-200611）；甲醇（山東禹王集團(tuán)化工分公司生產(chǎn)，色譜純）；高效液相色譜用三重蒸餾水（經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾）；氯仿（天津市星月化工有限公司，分析純）；三乙胺（天津市凱通，分析純）；磷酸二氫鉀（北京化工廠，分析純）；氫氧化鈉（天津市德恩化學(xué)試劑有限公司，分析純）；溴麝香草酚藍(lán)（中國(guó)公司合營(yíng)新中化學(xué)廠，分析純）；紫草、苦豆子和當(dāng)歸藥材購(gòu)自蘭州黃河藥市。

1.2 儀器

戴安μltimate3000型高效液相色譜儀，Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），二極管陣列檢測(cè)器（DAD），紫外分光光度計(jì)1700型（蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司），RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），KQ-400DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），DHG-9075A型烘箱（上海一恒有限公司），BS224S型萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó)Sartoriμs賽多利斯），MillinnceQ超純水機(jī)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)照品溶液的配置

（1）精密稱取阿魏酸對(duì)照品6.32 mg，用甲醇定容制成0.06 mg/mL阿魏酸對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

（2）精密稱取左旋紫草素對(duì)照品12.78 mg，用甲醇定容制成0.51 mg/mL左旋紫草素對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

（3）精密稱取苦參堿對(duì)照品13.13 mg，用甲醇定容制成0.525 mg/mL的苦參堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

（4）精密稱取氧化苦參堿對(duì)照品1.01 mg，用甲醇定容制成0.521 mg/mL的氧化苦參堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

（5）精密稱取β，β-二甲基丙烯酰4.72 mg，用甲醇配制成0.472 mg/mL的β，β-二甲基丙烯酰對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 制劑中左旋紫草素的含量測(cè)定（1）色譜條件：色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（82∶18）；流速：1.0 mL/min；二極管陣列檢測(cè)器（DAD）；檢測(cè)波長(zhǎng)：516 nm；柱溫：30°C；進(jìn)樣量：10 μL。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取0.51 mg/mL的左旋紫草素對(duì)照品溶液0.25 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，稀釋至10 mL，分別吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以左旋紫草素濃度為橫坐標(biāo)（X），得回歸方程：Y=0.257 6X-0.233 5，相關(guān)系數(shù)R=0.999 9，在12.55～408.80 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

（3）制劑中左旋紫草素的含量測(cè)定：精密稱取紫歸子?jì)D炎康泡騰栓2枚，加40 mL 1 mol/L的NaOH溶液，超聲溶解30分鐘，靜置，離心（轉(zhuǎn)速4 000轉(zhuǎn)/分）10分鐘，取上清液，用1 mol/L的HCL調(diào)節(jié)pH值至5.0～6.0，適當(dāng)攪拌，放置，析出紅色固體物質(zhì)，抽濾，濾餅干燥（40℃）至恒重后，置于5 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。精密吸取樣品10 μL，進(jìn)樣，測(cè)定。

2.2.2 制劑中β，β-二甲基丙烯酰的含量測(cè)定（1）色譜條件：色譜柱：Kromasil ODS保護(hù)柱（4.6 mm×10 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%三乙胺水溶液（80∶20），用磷酸調(diào)節(jié)pH=3；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：516 nm；柱溫：30°C；進(jìn)樣量：10 μL。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取0.472 mg/mL的β，β-二甲基丙烯酰對(duì)照品溶液0.25mL、1mL、2mL、4mL、8mL，稀釋至10mL，分別吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），β，β-二甲基丙烯酰濃度為橫坐標(biāo)（X），得回歸方程：Y=4.75×105X-8.06×105，相關(guān)系數(shù)R=0.999 9，在11.80～70.80 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

（3）制劑中β，β-二甲基丙烯酰的測(cè)定：樣品處理方式同2.2.1項(xiàng)。

2.2.3 制劑中阿魏酸的含量測(cè)定（1）色譜條件：色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%醋酸（32∶68）；流速：1.0 mL/min；二極管陣列檢測(cè)器（DAD）；檢測(cè)波長(zhǎng)：316 nm；柱溫：35°C；進(jìn)樣量：10 μL。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取0.06 mg/mL的阿魏酸對(duì)照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，加5%的甲酸甲醇稀釋至10 mL，分別吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，按2.2.3項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以阿魏酸濃度為橫坐標(biāo)（X），得回歸方程：Y=838.58X-0.022 8，相關(guān)系數(shù)R= 0.999 9，在3.11～49.84 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

（3）樣品中阿魏酸的含量測(cè)定：精密稱取紫歸子?jì)D炎康泡騰栓2枚，置于10 mL容量瓶中，加甲醇，超聲溶解30分鐘，補(bǔ)足重量，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。精密吸取樣品10 μL，進(jìn)樣，測(cè)定。

2.2.4 制劑中苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定（1）色譜條件：色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.02%三乙胺水溶液（53∶47）；流速：1.0 mL/min；二極管陣列檢測(cè)器（DAD）；檢測(cè)波長(zhǎng)：205 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取0.525mg/mL的苦參堿對(duì)照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，加甲醇稀釋至10 mL，分別吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，按2.2.4項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以苦參堿濃度為橫坐標(biāo)（X），得回歸方程：Y=2.100 1X-0.391 2，相關(guān)系數(shù)R=0.999 9，在26.25～420.00 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。精密吸取0.521 mg/mL的氧化苦參堿對(duì)照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL、8 mL，加甲醇稀釋至10 mL，分別吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，按2.2.4項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以氧化苦參堿濃度為橫坐標(biāo)（X），得回歸方程：Y=1.723 6+3.460 2，相關(guān)系數(shù)R=0.999 5，在26.05～416.08 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

（3）樣品中苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定：精密稱取紫歸子?jì)D炎康泡騰栓2枚，置于10 mL容量瓶中，加甲醇，超聲溶解30分鐘，補(bǔ)足重量，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。精密吸取樣品10 μL，進(jìn)樣，測(cè)定。

2.3 方法學(xué)實(shí)驗(yàn)

2.3.1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一批自制紫歸子?jì)D炎康泡騰栓，分別在0小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)、9小時(shí)、12小時(shí)、18小時(shí)、24小時(shí)進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積?？鄥A、氧化苦參堿、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰的RSD分別為2.08%、1.33%、1.89%、1.50%、1.57%。

2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取一定濃度的苦參堿、氧化苦參堿、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積?？鄥A、氧化苦參堿、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰RSD分別為0.74%、0.63%、0.34%、1.26%、1.53%。

2.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批自制紫歸子?jì)D炎康泡騰栓供試品5份，按樣品測(cè)定方法測(cè)定。供試品中苦參堿、氧化苦參堿、阿魏酸、左旋紫草素和β，β-二甲基丙烯酰RSD分別為1.96%、1.62%、2.61%、1.41%、2.38%。

2.3.4 回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的紫歸子?jì)D炎康泡騰栓制劑5份，每份1.25 g，分別加入苦參堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液9.95 mL、氧化苦參堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1.32 mL、阿魏酸對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.755 mL、左旋紫草素對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.206 mL、β，β-二甲基丙烯酰對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.292 mL。按上述方法進(jìn)行處理和測(cè)定，計(jì)算紫歸子?jì)D炎康泡騰栓中5種活性成分的回收率平均為99.78%，RSD為3.12%。

3 含量測(cè)定結(jié)果

5批制劑樣品中左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、阿魏酸、苦參堿、氧化苦參堿的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品中5種活性成分的含量（mg/枚）

4 結(jié)語(yǔ)

本文采用高效液相色譜法測(cè)定了自制紫歸子?jì)D炎康泡騰栓中5種活性成分的含量，所采用的方法簡(jiǎn)單易行。為全面高效地控制制劑的質(zhì)量提供了保證。實(shí)驗(yàn)室自制的5批紫歸子?jì)D炎康泡騰栓中阿魏酸、左旋紫草素、β，β-二甲基丙烯酰、苦參堿、氧化苦參堿的平均含量分別為0.31 mg/枚、0.14 mg/枚、0.28 mg/枚、19.80 mg/枚、1.69 mg/枚。

［1］蔣偉，王長(zhǎng)虹，王崢濤.當(dāng)歸水溶性成分研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2010，45（2）：101-103.

［2］徐新剛，王寶珍，孫志蓉，等.新疆紫草的主要化學(xué)成分［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，48（2）：319-322.

［3］林建峰，吳珊.紫云金的抗炎鎮(zhèn)痛作用［J］.海峽藥學(xué)，2000，12（1）：25-27.

［4］胡慧香，張智敏.復(fù)方苦豆子栓劑的制備及臨床應(yīng)用［J］.山西中醫(yī)，2009，25（5）：50-51.

（*通訊作者：胡芳弟）

R28

B

1671-1246（2015）24-0151-03

甘肅省衛(wèi)生廳2013年資助中醫(yī)藥科研課題（GZK-2012-15）