陳曉波 葛學(xué)軍

SD大鼠實驗性牙周炎唾液中NO含量的表達

陳曉波 葛學(xué)軍

目的 研究SD大鼠實驗性牙周炎唾液一氧化氮(NO)的含量變化。方法 取30只健康的清潔級雄性SD大鼠作為實驗對象，分別于基線，牙周手術(shù)后2w，4w，6w，收集腮腺唾液，并觀察各個階段大鼠牙周臨床表現(xiàn)。用一氧化氮還原法分別測定基線，2w，4w，6w，唾液中 NO 含量。結(jié)果 基線，2w，4w，6w 時唾液 NO 的含量分別為 6．532±3．261μmol/L，10．356±5．674μmol/L，17．145±6．901μmol/L，25．605±8．079μmol/L。牙周炎大鼠唾液NO的含量與牙周炎的進展程度呈正相關(guān)。結(jié)論 實驗性牙周炎大鼠2w，4w，6w，唾液NO的含量顯著高于健康大鼠，且與牙周炎的發(fā)展程度有關(guān)。

SD大鼠；牙周炎；一氧化氮；唾液

牙周病是一種常見的重要的口腔疾病，它可引起的牙齒松動，牙齒過早脫落，從而對個人和社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)水平造成巨大的社會經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[1]。

一氧化氮（nitric oxide，NO）是一種極不穩(wěn)定的生物自由基，分子小，結(jié)構(gòu)簡單，常溫下為氣體，微溶于水，具有脂溶性，可快速透過生物膜擴散，生物半衰期只有3－5s，其生成依賴于一氧化化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）并在心、腦血管調(diào)節(jié)、神經(jīng)、免疫調(diào)節(jié)等方面有著十分重要的生物學(xué)作用。

1 材料和方法

1.1 實驗對象和標(biāo)本采集 本實驗采用自身對照法，取健康清潔級雄性SD大鼠20只，平均體重為200±17.86g，且牙列完整，咬合關(guān)系正常，無齲損，無牙周組織疾病。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，用采用微型Lashley吸盤法收集大鼠腮腺唾液，隔天10%水合氯醛0.3ml/100g行腹腔注射麻醉大鼠，用0.2mm正畸結(jié)扎絲對上頜第一磨牙進行牙周結(jié)扎術(shù)。牙周手術(shù)后大鼠喂食正常鼠料及飲水。分別于2w，4w，6w時觀察大鼠牙周情況，并收集腮腺唾液。將收集好的唾液置于2ml離心管內(nèi)4℃離心(4000 r/min，10分鐘)，取上清。

1.2 標(biāo)本檢測 試劑盒選用南京康成公司一氧化氮試劑盒，按照其說明書進行試劑的配制及樣本的檢測。測得的數(shù)據(jù)經(jīng)過公式運算得到樣本中NO的含量。

2 結(jié)果

2.1 SD大鼠牙周炎實驗動物模型的建立 零時，牙齦色粉，質(zhì)韌，菲薄且緊貼于牙面，探診無出血。牙周結(jié)扎手術(shù)2w后，結(jié)扎絲完好未脫落，牙齦點彩不明顯，牙齦水腫，輕度充血，探針有少量出血，牙齒無松動。牙周結(jié)扎手術(shù)4w后，結(jié)扎絲完好未脫落，牙齦質(zhì)地松軟，齦乳頭圓鈍腫脹，齦溝加深，探診出血，牙齒Ⅰ度松動。牙周結(jié)扎手術(shù)6w后，結(jié)扎絲完好未脫落，牙齦呈暗紅色，質(zhì)地松軟邊緣圓鈍，可探及1.0mm的牙周袋，探診易出血，牙齒Ⅱ度松動。

2.2 統(tǒng)計學(xué)結(jié)果

2.2.1 手術(shù)后2w、4w、6w時唾液中NO含量（表1）。

2.2.2 統(tǒng)計學(xué)結(jié)果分析

表1 基線、2w、4w、6w時唾液中NO含量

表2 基線、2w、4w、6w各組之間兩兩比較

用單因素方差分析對統(tǒng)計學(xué)結(jié)果進行處理。統(tǒng)計結(jié)果顯示牙周手術(shù)后2w、4w、6w時唾液中NO含量與零時相比P＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義。且牙周手術(shù)后2w、4w、6w時唾液中NO含量兩兩比較，均得出結(jié)論P＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

本研究的牙周炎實驗動物模型是用單純結(jié)扎絲結(jié)扎大鼠雙測上頜第一磨牙。Achong等人的研究表明采用結(jié)扎法能成功誘導(dǎo)動物牙周病的發(fā)生[2]。國內(nèi)學(xué)者李霞[3]等人報道正畸結(jié)扎絲法可成功建立大鼠牙周炎實驗動物模型，能夠模擬臨床牙周炎發(fā)生發(fā)展的自然進程。

生物體內(nèi)NO通過兩個生理途徑合成：NOS依賴途徑和NOS獨立途徑。NOS獨立通路是還原了NO的主要氧化產(chǎn)物，硝酸鹽和亞硝酸鹽[4]，因此可以用硝酸鹽還原酶法間接測定NO含量的方法。

有實驗表明，NOS基因缺失的小鼠更易發(fā)生感染[5]，這說明NO是機體抗微生物防御體系中的一個重要因子，因此可推測當(dāng)患牙周炎時，唾液NO分泌會增加。本研究結(jié)扎后2w、4w、6w組大鼠唾液中NO含量明顯高于基線牙周結(jié)扎手術(shù)前。

Reher等人研究顯示，牙周疾病及其嚴(yán)重程度與唾液中亞硝酸鹽濃度密切相關(guān)[6]。本實驗的研究結(jié)果同樣顯示隨著牙周病的發(fā)展，SD大鼠唾液中NO的含量明顯增加，各組之間比較P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。因此可得出結(jié)論，唾液中NO的含量與牙周病的進程密切相關(guān)，且隨著疾病的發(fā)展，唾液中NO的含量明顯增加。

牙周病是口腔重要的疾病之一，是導(dǎo)致失牙的重要原因，因此牙周炎的研究及治療有著重要的臨床意義。

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作者單位：030001山西醫(yī)科大學(xué)

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