滿光亮　葛惠男　石方臻

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬蘇州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇蘇州215000；3.江蘇省昆山市第六人民醫(yī)院，江蘇昆山215000）

·研究報(bào)告·

益氣活血方對(duì)急性胃潰瘍大鼠模型黏膜愈合質(zhì)量研究*

滿光亮1葛惠男2△石方臻3

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬蘇州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇蘇州215000；3.江蘇省昆山市第六人民醫(yī)院，江蘇昆山215000）

目的研究分析益氣活血方對(duì)急性胃潰瘍大鼠模型黏膜愈合質(zhì)量的影響。方法120只成年大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、益氣活血方組3組，每組40只。冰醋酸灼燒大鼠胃竇前壁漿膜層制備胃潰瘍模型。正常組、模型組、益氣活血方組分別每日灌胃飼以純凈水及益氣活血方水煎液，連續(xù)14 d。治療結(jié)束后，觀察潰瘍胃組織黏膜損傷情況，統(tǒng)計(jì)潰瘍發(fā)生率、潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率以及VEGF、bFGF表達(dá)水平及再生黏膜愈合質(zhì)量。結(jié)果與正常組比較，模型組、益氣活血方組潰瘍發(fā)生率、潰瘍指數(shù)均明顯增加（均P＜0.05），尤其模型組更加顯著。益氣活血方組與模型組比較，潰瘍發(fā)生率和潰瘍指數(shù)明顯降低，潰瘍抑制率顯著提高（均P＜0.05）。與正常組比較，模型組再生黏膜厚度、微血管數(shù)明顯不足，而囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)增加較明顯（均P＜0.05）。益氣活血方組再生黏膜厚度、囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)改善均優(yōu)于模型組（均P＜0.05）。模型組血清VEGF、bFGF的含量較正常組含量明顯增加（均P＜0.05）。益氣活血方組血清VEGF、bFGF增加優(yōu)于模型組（均P＜0.05）。結(jié)論益氣活血方能降低潰瘍發(fā)生率和潰瘍指數(shù)，提高潰瘍抑制率，促進(jìn)急性胃潰瘍的黏膜再生，減輕炎癥反應(yīng)，促進(jìn)VEGF、bFGF表達(dá)，從而提高潰瘍愈合質(zhì)量。

急性胃潰瘍大鼠模型益氣活血方潰瘍愈合質(zhì)量VEGFbFGF

急性胃潰瘍是臨床常見(jiàn)急癥之一，易發(fā)大出血、穿孔等嚴(yán)重并發(fā)癥。化學(xué)品灼傷、物理機(jī)械損傷、應(yīng)激、藥物及中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變等均可致急性胃潰瘍發(fā)生［1］。隨著胃鏡檢查技術(shù)發(fā)展，本病診斷率大大提高［2］。前期研究發(fā)現(xiàn)益氣活血方對(duì)急性胃潰瘍患者有良好的療效，本研究通過(guò)觀察益氣活血方對(duì)急性胃潰瘍大鼠模型的潰瘍發(fā)生率、潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率以及VEGF、bFGF表達(dá)水平、再生黏膜愈合質(zhì)量等的影響，探究益氣活血方治療急性胃潰瘍的機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物及造模126只雄性SD大鼠，適應(yīng)環(huán)境3 d，隨機(jī)選取40只作為正常對(duì)照組，其余大鼠以冰醋酸灼燒大鼠胃竇前壁漿膜層制備胃潰瘍模型［3］。3 d后隨機(jī)取6只處死，解剖胃觀察胃潰瘍情況，符合潰瘍模型標(biāo)準(zhǔn)后，隨機(jī)分為模型組、益氣活血方組，每組40只。

1.2藥物及試劑益氣活血方，方藥組成：炙黃芪、川桂枝、烏賊骨、鐵樹(shù)葉、炒白芍、炙甘草、五靈脂、蒲黃、制乳香等。飲片均購(gòu)自蘇州春暉堂飲片廠，按質(zhì)量加10倍水，浸泡1.5 h，加熱提取2次，每次1.5 h，提取液合并濃縮為生藥1.2 g/mL的藥液實(shí)驗(yàn)備用［4］。乙酸：上海化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20010701。

1.3給藥治療分組后開(kāi)始灌胃給藥，每天按成人與大鼠的體表面積換算標(biāo)準(zhǔn)喂服所需劑量藥物，每次20 mL，每日2次，連續(xù)14 d，正常組與模型組予0.9%氯化鈉注射液，益氣活血方組予中藥煎液。

1.4標(biāo)本采集與檢測(cè)治療結(jié)束后，大鼠均予頸椎脫臼處死，解剖取胃，鏡下觀察胃黏膜損傷的情況，將胃黏膜組織脫水、透明、封固、制片。1）觀察胃竇部潰瘍的大小、深淺、基底清潔度，有無(wú)覆白苔，周圍黏膜色澤、彈性以及充血水腫等情況。2）潰瘍指數(shù)的測(cè)定。0級(jí)：黏膜完整。1級(jí)：點(diǎn)狀出血1～5個(gè)點(diǎn)。2級(jí)：6～10個(gè)點(diǎn)。3級(jí)：10個(gè)點(diǎn)以上。4級(jí)：條狀出血1～5條。5級(jí)：6～10條。6級(jí)：10條以上［5］。3）參考文獻(xiàn)［6-7］評(píng)判黏膜損傷程度，測(cè)定黏膜再生黏膜厚度，計(jì)算黏膜囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)量、再生微血管數(shù)量。4）免疫組織化學(xué)染色：采用抗生物素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物法（SABC）。一抗為VEGF，bGFG兔抗多克隆抗體（質(zhì)量濃度200 ng/L）。二抗為兔抗大鼠IgG（1∶100）。熱修復(fù)抗原3 min，一抗孵育37℃1 h，二抗37℃孵育20 min，DAB顯色，雙蒸水終止反應(yīng)，脫水、透明、封固，顯微鏡觀察。VEGF和bFGF陽(yáng)性細(xì)胞為胞漿呈棕褐色，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/400高倍鏡視野表示。每只動(dòng)物隨機(jī)取3張切片，每張切片梗死周邊區(qū)腦組織隨機(jī)觀察5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的平均值［8］。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示。組間比較滿足正態(tài)性者，使用單因素方差分析，不滿足正態(tài)性資料用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組模型大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)比較見(jiàn)表1。結(jié)果示，與正常組比較，模型組潰瘍發(fā)生率、潰瘍指數(shù)均明顯增加（均P＜0.05）。益氣活血方組與模型組比較，潰瘍發(fā)生率和潰瘍指數(shù)明顯降低，潰瘍抑制率顯著提高（均P＜0.05）。

表1　各組胃黏膜潰瘍指數(shù)的影響比較

2.2各組胃黏膜組織再生黏膜厚度、囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)量和新生微血管數(shù)量比較見(jiàn)表2。與正常組比較，模型組再生黏膜厚度、微血管數(shù)明顯不足，而囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)增加較明顯（均P＜0.05）。益氣活血方組再生黏膜厚度、囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)改善均優(yōu)于模型組（均P＜0.05）。

表2　各組組織再生黏膜厚度、囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)量和新生微血管數(shù)量比較（±s）

表2　各組組織再生黏膜厚度、囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)量和新生微血管數(shù)量比較（±s）

組別n微血管數(shù)（個(gè)）再生黏膜厚度（μm）囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)（個(gè)）正常組4026.2±5.2模型組4011.3±2.3*218.3±21.10 42.7±10.1*17.7±2.7*益氣活血方組4023.2±3.1*△188.0±20.2*△7.8±2.5*△

2.3各組血清VEGF、bFGF的含量比較見(jiàn)表3。模型組血清VEGF、bFGF的含量較正常組含量明顯增加（均P＜0.05）。益氣活血方組血清VEGF、bFGF增加優(yōu)于模型組（均P＜0.05）。

表3　各組血清VEGF、bFGF陽(yáng)性表達(dá)率比較（%）

3　討論

隨著抑酸藥物及胃鏡下止血技術(shù)的發(fā)展，急性胃潰瘍基本可得到治愈，但仍有并發(fā)大出血、穿孔的危險(xiǎn)，且可能發(fā)展為復(fù)發(fā)性胃潰瘍或慢性胃潰瘍［9］。Tarnawski等［10］發(fā)現(xiàn)相當(dāng)部分急性胃潰瘍患者雖然內(nèi)鏡檢查顯示已愈合，但組織或超微結(jié)構(gòu)方面仍有所異常，而組織局部結(jié)構(gòu)與功能顯示成熟程度較低，鏡下及病理表現(xiàn)為大量結(jié)締組織充填，腺體紊亂，黏膜層變薄，尤其鏡下微血管結(jié)構(gòu)紊亂、血管減少，故易并發(fā)出血、穿孔造成潰瘍反復(fù)，從而提出了“潰瘍愈合質(zhì)量（QOUH）”的概念。潰瘍愈合需要多種細(xì)胞、組織相互作用及多種因子共同參與。血管在肉芽組織中形成毛細(xì)血管網(wǎng)，各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可被運(yùn)送到潰瘍底部，使得潰瘍部位生長(zhǎng)速度加快。在潰瘍愈合過(guò)程中，胃黏膜VEGF、bFGF表達(dá)水平升高，這與胃黏膜自身修復(fù)功能密切相關(guān)［11］，潰瘍發(fā)生后機(jī)體代償性地增加bFGF、VEGF等生長(zhǎng)因子的分泌，以保護(hù)胃黏膜，防止?jié)儼l(fā)生［12］。研究表明益氣活血方在潰瘍愈合過(guò)程中可通過(guò)增加VEGF、bFGF表達(dá)水平促進(jìn)潰瘍愈合［13］。

急性胃潰瘍可歸屬于中醫(yī)學(xué)“吞酸”“胃脘痛”范疇。中醫(yī)認(rèn)為急性胃潰瘍的發(fā)生與本身正氣不足及胃絡(luò)瘀阻有關(guān)。脾胃為后天之本，《馮氏錦囊秘錄》言“脾胃虛則百病生，調(diào)理中州，其首務(wù)也”，故而“脾胃氣虛”是潰瘍發(fā)病的主要因素。脾胃受盛和運(yùn)化水谷，生氣生血，是臟腑和經(jīng)絡(luò)發(fā)揮正常功能的源泉，因此脾胃和人體氣血有著緊密聯(lián)系。胃為多氣多血之腑，以氣血調(diào)和為貴。中藥治療急性胃潰瘍即可通過(guò)整體氣血調(diào)節(jié)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)潰瘍損傷部位良好的修復(fù)作用，許多資料顯示，在治療消化性饋瘍疾病中，中醫(yī)藥具有顯著優(yōu)勢(shì)［14］。

益氣活血方是已故名老中醫(yī)黃一峰先生治療胃潰瘍的經(jīng)驗(yàn)方，為黃芪建中湯與失笑散加減而成。君藥為黃芪、炒白芍、川桂，黃芪健脾補(bǔ)中、益衛(wèi)固表，甘溫益氣升陽(yáng)以治療中虛；桂枝溫通經(jīng)脈，助陽(yáng)化氣，白芍具有養(yǎng)血斂陰、止痛，二者共用和營(yíng)衛(wèi)而調(diào)陰陽(yáng)。五靈脂、蒲黃為臣藥，二藥相合，氣血兼顧，活血散瘀，通絡(luò)止痛，使瘀化絡(luò)通，脈絡(luò)通暢則胃膜得養(yǎng)，肌生潰斂；制乳香、鐵樹(shù)葉為佐藥，加強(qiáng)活血定痛之功，并有消腫生肌之效。研究發(fā)現(xiàn)［15-16］，黃芪、乳香合用可促進(jìn)血管再生；炙甘草為使藥，功能緩急止痛、調(diào)和諸藥，亦能補(bǔ)三焦之元?dú)狻?/p>

本研究結(jié)果示，益氣活血方治療急性胃潰瘍大鼠模型后，與模型組比較大鼠胃黏膜其潰瘍發(fā)生率和潰瘍指數(shù)明顯降低，潰瘍抑制率顯著提高，再生黏膜厚度與微血管個(gè)數(shù)更接近正常組，紊亂的囊狀擴(kuò)張腺體數(shù)明顯減少，表明益氣活血方具有改善潰瘍愈合質(zhì)量的效果。且益氣活血方組血清VEGF、bFGF含量明顯增加，也提示益氣活血方可通過(guò)提高胃黏膜VEGF、bFGF表達(dá)水平，使?jié)儾课坏玫匠渥銧I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)潰瘍部位組織愈合再生。潰瘍新生血管增加與VEGF、bFGF表達(dá)或有一定相關(guān)，可能是益氣活血方提高潰瘍愈合速度及質(zhì)量的機(jī)制所在。前期研究發(fā)現(xiàn)益氣活血方可通過(guò)對(duì)多種胃黏膜保護(hù)途徑的影響提高潰瘍愈合質(zhì)量，改善患者臨床癥狀，并降低潰瘍嚴(yán)重并發(fā)癥及復(fù)發(fā)的趨勢(shì)［17］。但這些保護(hù)因素之間是否有協(xié)同作用以及其作用機(jī)理等因素，都有待進(jìn)一步深入研究。

［1］陳灝珠，林果為，王吉耀.實(shí)用內(nèi)科學(xué)［M］.14版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：1918

［2］夏梅青.田素榮.內(nèi)鏡下治療急性胃潰瘍出血臨床分析［J］.現(xiàn)代診斷與治療，2012，23（6）：812-813.

［3］謝田.胃潰瘍實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制作方法的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué)，2014，22（10）：309-310

［4］江國(guó)榮，張露蓉，葛惠男.益氣活血方聯(lián)用奧美拉唑?qū)Υ笫笙詽冇腺|(zhì)量的影響［J］.東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，32（3）：320-323.

［5］梁桂寧，黃媛恒，賈曉棟，等．紫菜多糖對(duì)急性酒精灌胃小鼠胃組織SOD、GSH-Px的影響［J］．中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2012，7（4）：248-249.

［6］梅武軒，曾常春．乳香提取物對(duì)大鼠乙酸胃潰瘍愈合質(zhì)量的影響［J］．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2004，12（1）：34-36．

［7］姒健敏，錢(qián)云，吳加國(guó)．云母對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍愈合質(zhì)量的影響［J］．中國(guó)中藥雜志，2005，30（19）：1536-1541．

［8］江國(guó)榮.張露蓉.葛惠男.益氣活血方對(duì)大鼠胃潰瘍愈合部位新血管的生成及促血管生成因子表達(dá)的作用［J］.吉林中醫(yī)藥，2013，8（8）：827-828.

［9］中華消化雜志編委會(huì).消化性潰瘍?cè)\斷與治療規(guī)范（2013，深圳）［J］．中華消化雜志，2014，34（2）：73-76．

［10］Annewski A，Stachura J，Krause WJ.Qualityofgastriculcerhealing：anew，emergingconcept［J］.Clin Gastroenterol，1991，13（Suppl1）：42.

［11］永港，舒晴，邱猛進(jìn).胃潰瘍患者胃黏膜不同生長(zhǎng)因子表達(dá)的觀察［J］.中國(guó)基層醫(yī)藥，2006，13（5）：829-830.

［12］李海濤，智緒亭.VEGF、bFGF表達(dá)和微血管密度檢測(cè)在難治性胃潰瘍中的意義［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2005，8（16）：1311-1315.

［13］張衛(wèi)平，葛惠男.益氣活血方對(duì)消化性潰瘍新生血管影響的初步研究［J］.北京中醫(yī)藥，2008，28（4）：256-258.

［14］殷文銀，尹玉平.中藥分期聯(lián)合西藥治療消化性潰瘍98例［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2012，21（4）：664-665.

［15］朱瑾波，李玉鼎，李玉書(shū)．黃芪治療慢性皮膚潰瘍對(duì)血管生成過(guò)程的機(jī)制探討［J］．河北中醫(yī)，1996，18（4）：21.

［16］張建國(guó)，李強(qiáng)，張兆祥，等．中藥對(duì)小鼠骨折后血管重建與骨折愈合方式關(guān)系的影響［J］．中國(guó)骨傷，2003，16（2）：84.

［17］郭金偉，葛惠男．益氣活血方對(duì)消化性潰瘍復(fù)發(fā)的影響［D］．南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2009.

The Research of Yiqi Huoxue Decoction on Healing Quality of Gastric Mucosa in Rats with Acute Gastric Ulcer

MAN Guangliang，GE Huinan，SHI Fangzhen.Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210029，China

Objective：To discuss the influence of Yiqi Huoxue Decoction on the healing quality of gastric mucosa in rats，with acute gastric ulcer.Methods：120 rats were randomly divided into three groups：the normal group，the model group and Yiqi Huoxue Decoction group，40 cases in each group.The model was made by glacial acetic acid which was injected to burning the placenta percreta in antral gastritis.The three groups were feed with purified water and decoction by gavage for 14days.After treatment，the following items were recorded：the degree of gastric mucosa injury，the incidence rate of ulcer，the index of ulcer，the suppression ratio of ulcer，the expression level of VEGF and bFGF，and the healing quality of mucosa.Results：Compared with the normal group，the the incidence rate and the index of ulcer of the model group and the Yiqi Huoxue Decoction group increased obviously（P＜0.05），especially the model group.Compared with the model group，the incidence rate and index of ulcer of the Yiqi Huoxue Decoction group reduced obviously and the inhibition rate of ulcer increased obviously（P＜0.05）.Compared with the normal group，the thickness of the regenerated mucosa and the amount of micrangium of the model group were obviously insufficient，and there was an obvious increase in the number of cystically dilated glands（P＜0.05）.As for the Yiqi Huoxue Decoction group，there was a better improvement in the thickness of the regenerated mucosa and the number of cystically dilated glands than that of the model group（P＜0.05）.The expression level of VEGF and bFGF in the model group has a more obvious increase than that of the normal group（P＜0.05），and the expression level of VEGF and bFGF in the Yiqi Huoxue Decoction group has a more obvious increase than that of the model group（P＜0.05）.Conclusion：Yiqi Huoxue Decoction can reduce the incidence rate and the index of ulcer，improve the inhibition of ulter，promote the mucosal regeneration of a-cute gastric ulcer，reduce inflammatory response and improve the expression of VEGF and bFGF to increase the healing quality of mucosa.

Rat model of acute gastric ulcer；Yiqi Huoxue Decoction；Healing quality of ulcer；VEGF；bFGF

R285.5

A

1004-745X（2015）11-1939-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.11.018

2015-04-26）

江蘇省蘇州市科學(xué)技術(shù)管理局資助項(xiàng)目（SYS201366）

（電子郵箱：szzyy88@163.com）