孫玉章，代永聯(lián)，吳光玉，衣服德，王永玲

（1.中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島　 266032；2.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東青島　266100；3.科爾沁右翼中旗動物衛(wèi)生監(jiān)督所，內(nèi)蒙古興安盟　029400）

三種雞馬立克氏病疫苗的攻毒保護(hù)試驗(yàn)比較研究

孫玉章1，代永聯(lián)2，吳光玉3，衣服德2，王永玲1

（1.中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032；2.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東青島266100；3.科爾沁右翼中旗動物衛(wèi)生監(jiān)督所，內(nèi)蒙古興安盟029400）

為比較3種商品化馬立克氏病疫苗的免疫效果，本研究將150只1日齡AA+肉雞隨機(jī)分為攻毒對照組、乾元浩疫苗組、梅里亞疫苗組、瑞普疫苗組和空白對照組5組，并按廠家說明劑量進(jìn)行馬立克氏病疫苗免疫。8日齡時進(jìn)行馬立克氏病超強(qiáng)毒Md5株攻毒，每天觀察各組臨床癥狀，對病死雞進(jìn)行剖檢和病理組織學(xué)觀察。根據(jù)免疫攻毒后的臨床觀察、剖檢病變和病理切片等綜合分析，梅里亞疫苗組的保護(hù)指數(shù)略高于乾元浩疫苗組和瑞普疫苗組，差異不顯著（P ＞ 0.05），說明不同廠家生產(chǎn)的雞馬立克氏病疫苗對Md5超強(qiáng)毒株的攻擊具有相似的保護(hù)效果。因此在生產(chǎn)中使用國產(chǎn)馬立克氏病疫苗或進(jìn)口馬立克氏病疫苗均能對我國當(dāng)前流行的馬立克氏病有較好的保護(hù)效果。

馬立克氏?。怀瑥?qiáng)毒株；商品化疫苗；免疫效果；病理學(xué)觀察

馬立克氏?。∕arek’s disease，MD）是由皰疹病毒科馬立克氏病病毒（Marek’s disease virus，MDV）引起雞的一種高度接觸傳染性T淋巴細(xì)胞增生性腫瘤疾病，以內(nèi)臟器官、外周神經(jīng)、性腺、虹膜、肌肉和皮膚單獨(dú)或多發(fā)的淋巴樣細(xì)胞浸潤并形成大體腫瘤病變?yōu)樘卣鳎?-3］。該病存在于世界上所有養(yǎng)禽國家和地區(qū)，是一種嚴(yán)重危害集約化家禽養(yǎng)殖業(yè)的傳染病。雖然MD的疫苗接種是獸醫(yī)學(xué)成功控制家禽疫病的典型范例，但由于本病的意外暴發(fā)以及隨著MDV毒力的不斷增強(qiáng)可能導(dǎo)致的免疫失敗和免疫抑制所造成的嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，本病仍然是全世界家禽養(yǎng)殖業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)［1］。

MDV是一群細(xì)胞結(jié)合性的α-皰疹病毒，但具有γ-皰疹病毒的嗜淋巴特性。根據(jù)免疫瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)和型特異單克隆抗體可將MDV分離株分成?、Ⅱ和Ⅲ 3種血清型［3］。?型MDV包括強(qiáng)毒MDV分離株及其人工或自然致弱毒株；Ⅱ型為從雞體分離的無致病性MDV毒株；Ⅲ型包括火雞皰疹病毒（HVT）及其變異株。根據(jù)免疫雞群攻毒保護(hù)試驗(yàn)，又可將?型MDV分為四種不同毒力的類型：溫和型（mMDV）、強(qiáng)毒型（vMDV）、超強(qiáng)毒型（vvMDV）和特超強(qiáng)毒型（vv+MDV）。目前我國尚無vv+MDV的分離報道［4］。作為一種可用疫苗防治的腫瘤性疫病，1日齡接種疫苗是有效控制MD和減少經(jīng)濟(jì)損失的主要手段。本研究通過對3種商品化MD疫苗進(jìn)行的免疫效力比較試驗(yàn)，旨在比較不同商品化MD疫苗的免疫效果，為當(dāng)前我國MD的防控提供有益的借鑒。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動物、疫苗和病毒株

1日齡AA+肉雞由諸城外貿(mào)有限責(zé)任公司提供種蛋并孵化。雞馬立克氏病活疫苗（CV?988/ Rispens株）分別由梅里亞動物保健有限公司和乾元浩生物股份有限公司生產(chǎn)；雞馬立克氏?、瘛ⅱ笮投r活疫苗（CV?988+FC126株）由天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)；雞馬立克氏病超強(qiáng)毒Md5株由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院提供，液氮保存。

1.2試驗(yàn)分組與攻毒

將150只1日齡AA+肉雞隨機(jī)分為5個組，分別為攻毒對照組、乾元浩疫苗組、梅里亞疫苗組、瑞普疫苗組和空白對照組，每組30只，分別隔離飼養(yǎng)。3種疫苗同時按廠家說明劑量接種免疫1日齡AA+肉雞，8日齡時以1 500 PFU/只的劑量分別對試驗(yàn)組的AA+肉雞腹腔注射馬立克氏病超強(qiáng)毒Md5株，空白對照組腹腔注射等量生理鹽水。所有AA+肉雞分別在隔離器中飼養(yǎng)至67 d，分別于1 d、7 d、15 d和67 d稱量體重并記錄。攻毒后每天觀察所有試驗(yàn)組雞的精神狀態(tài)，記錄其發(fā)病和死亡情況。

1.3剖檢和病理組織學(xué)檢測

對試驗(yàn)期間死亡的雞只逐只剖檢，觀察并記錄心、肝、脾、肺、腎、法氏囊、腺胃和肌胃等組織器官的大體病變。試驗(yàn)期結(jié)束后（67日齡），對所有實(shí)驗(yàn)組的雞只分別取血并進(jìn)行常規(guī)血相觀察。將所有試驗(yàn)組的雞只全部剖殺后，取疑似病變組織器官經(jīng)甲醛溶液固定、常規(guī)法石蠟包埋制片、HE染色后光鏡下觀察各組織器官的病理組織學(xué)變化。

2　結(jié)果

2.1試驗(yàn)組的臨床癥狀

攻毒對照組的雞只在攻毒后第2周開始出現(xiàn)厭食、精神萎頓、羽毛蓬亂和體型消瘦，攻毒對照組攻毒后第67天的平均體重相比空白對照組體重平均減少10%～20%，比免疫攻毒組平均減少7%～15%（數(shù)據(jù)未發(fā)表）。攻毒對照組的雞只眼觀可見關(guān)節(jié)腫大，后期可觀察到馬立克氏病比較典型的劈叉癥狀（圖1A）。攻毒對照組的雞只最早于攻毒后第21天發(fā)生死亡，死亡高峰期集中出現(xiàn)在攻毒后第32～50天，病死率為86.67%（26/30）。免疫攻毒組的雞只均有不同程度的出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫大和體型消瘦，在攻毒后第6周開始出現(xiàn)零星死亡的雞只，其中梅里亞疫苗組的病死率（6.67%）略低于乾元浩疫苗組（13.33%）和瑞普疫苗組（10.00%），差異不顯著（P ＞ 0.05）。

圖1 攻毒對照組的臨床癥狀和病理剖檢

2.2病理解剖

攻毒對照組在攻毒后第3周開始出現(xiàn)死亡病例，剖檢未見明顯的眼觀腫瘤病變，可見肝、腎、脾和法氏囊等不同程度的腫大，肺輕度淤血，腺胃黏膜腫脹，輕微出血。攻毒后第6～7周出現(xiàn)的死亡病例剖檢可見肝、脾、腎等腫大，肝臟出現(xiàn)多個白色結(jié)節(jié)狀腫瘤（圖1B），腺胃腫脹出血，肌胃角質(zhì)膜易剝離。免疫攻毒組在攻毒后出現(xiàn)的死亡病例剖檢雖可見肝、脾、腎等輕度腫大，腺胃壁增厚，但大體病變輕微，均未出現(xiàn)壞死和腫瘤。

2.3血相與病理組織學(xué)觀察

攻毒對照組的雞只血細(xì)胞中淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯增多；免疫攻毒組的血細(xì)胞中嗜酸性粒細(xì)胞也較空白對照組多（圖2）。免疫攻毒組肝臟切片均可見較小的炎性灶，攻毒對照組肝細(xì)胞變性、壞死，淋巴細(xì)胞大量集聚，出現(xiàn)較多的炎性灶（圖3A）。免疫攻毒組腎臟均出現(xiàn)零星的炎性灶，攻毒對照組可見腎小管局部壞死，梅里亞疫苗組有輕微的淤血和炎性細(xì)胞浸潤（圖4C）；免疫攻毒組肺臟均有炎性浸潤，梅里亞疫苗組有輕微淤血，瑞普疫苗組炎性灶最少（圖5D）。

圖2 攻毒各組雞的血液學(xué)檢驗(yàn)

圖3 攻毒各組雞的肝組織的病理學(xué)特征（HE，200 ×）

圖4 攻毒各組雞的腎組織的病理學(xué)特征（HE，200 ×）

圖5 攻毒各組雞的腎組織的病理學(xué)特征（HE，200 ×）

3　討論與分析

由于3種血清型的MDV之間具有一定的交叉保護(hù)，因此從上世紀(jì)70年代以來，火雞皰疹病毒（herpes virus of turkey，HVT）、HVT+SB-1雙價疫苗和CV?988/Rispens株弱毒活疫苗等都曾先后成為有效預(yù)防MD的疫苗。但廣泛使用疫苗也促進(jìn)了MDV的進(jìn)化，從上世紀(jì)90年代開始?xì)W美地區(qū)陸續(xù)出現(xiàn)CV?988/Rispens株弱毒活疫苗都不能完全保護(hù)的超強(qiáng)毒株和特超強(qiáng)毒株［5］，給世界養(yǎng)禽業(yè)造成巨大損失。由于我國的養(yǎng)禽情況更為復(fù)雜，如MDV野毒株毒力的不斷增強(qiáng)、幼仔雞的早期感染、MD疫苗的使用不當(dāng)以及大環(huán)境生物安全措施的缺位等，MD的流行每年給中國的養(yǎng)禽業(yè)造成的損失數(shù)以百億計。

免疫攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明，超強(qiáng)MDV病毒株的感染可以造成嚴(yán)重的免疫器官衰竭和明顯的免疫抑制，通過反復(fù)發(fā)生溶細(xì)胞性感染引發(fā)淋巴器官受損，產(chǎn)生轉(zhuǎn)化感染并誘發(fā)腫瘤形成［6］。CV?988/ Rispens株疫苗仍是目前預(yù)防MD超強(qiáng)毒株感染效果最好的疫苗之一，能夠比其它MD疫苗提供更好的免疫保護(hù)力，有效地預(yù)防大多數(shù)MDV流行毒株的侵襲。本研究中不同廠家生產(chǎn)的雞馬立克氏病疫苗均能夠?qū)D超強(qiáng)毒Md5株的攻擊起到相近的保護(hù)效果。因此在生產(chǎn)中使用國產(chǎn)MD疫苗或進(jìn)口MD疫苗均能對我國當(dāng)前流行的MD有較好的保護(hù)效果。但也有研究指出，MDV強(qiáng)毒株感染和CV?988/Rispens株在雞體內(nèi)的復(fù)制是相互獨(dú)立的［7］，使用CV?988/Rispens株疫苗也會造成機(jī)體免疫器官或非免疫器官出現(xiàn)不同程度的淋巴細(xì)胞浸潤，因此可能會對雞的生長和免疫產(chǎn)生一定的影響［8］。在本研究中，3組免疫攻毒組均出現(xiàn)了與攻毒對照組相似的病變，盡管剖檢未發(fā)現(xiàn)腫瘤病變，但疫苗的毒力效應(yīng)不可忽視。因此有必要開發(fā)MD新型弱毒疫苗或基因缺失苗，對于我國預(yù)防和控制MD的發(fā)生和減少養(yǎng)禽業(yè)的損失具有重要意義。同時應(yīng)該意識到，疫苗的使用不能從根本上阻斷MDV的感染和傳播，必須采取培育新型遺傳抗性品種［9］和加強(qiáng)養(yǎng)禽場的生物安全防控［10］等措施來控制MD的發(fā)生和流行。

［1］Saif Y M. 禽病學(xué)［M］. 蘇敬良，高福，索勛，譯. 12版. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社，2012： 522-599.

［2］白文彬，于康震. 動物傳染病診斷學(xué)［M］. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社，2002： 228-233.

［3］韋平，秦愛建. 重要動物病毒分子生物學(xué)［M］. 北京： 科學(xué)出版社，2008： 107-132.

［4］崔治中. 中國雞群病毒性腫瘤病及防控研究［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.

［5］Haq K，F(xiàn)ear T，?braheem A，et al. ?nfluence of vaccination with CV?988/Rispens on load and replication of a very virulent Marek's disease virus strain in feathers of chickens ［J］. Avian Pathol，2012，41（1）： 69-75.

［6］賀君君，滕麗瓊，韋平，等.馬立克氏病病毒體內(nèi)復(fù)制動力學(xué)研究進(jìn)展［J］. 中國家禽，2011，33（5）： 47-51.

［7］Davison F，Nair V. Use of Marek’s disease vaccines： could they be driving the virus to increasing virulence？ ［J］. Expert Rev Vaccines，2005，4（1）： 77-88.

［8］鄭永勝，張艷萍，李志杰，等. 雞馬立克氏病病毒疫苗株對強(qiáng)毒株的復(fù)制抑制作用［J］. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2014，36（1）：7-10.

［9］ 金元昌，陳壯，李玉峰，等. 抗性選育協(xié)同疫苗免疫對雞羽囊馬立克病毒載量的影響［J］. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2015，46（5）：836-840.

［10］ 周蛟. 我國當(dāng)前禽病流行概況及防控對策［J］. 獸醫(yī)導(dǎo)刊，2014，（12）： 37-38.

（責(zé)任編輯：胡藕祥）

Comparison of Vaccine Eff cacy in Chickens Challenged with Very Virulent MDV Strain Md5

Sun Yuzhang1，Dai Yonglian2，Wu Guangyu3，Yi Fude2，Wang Yongling1
（1. China Animal Health & Epidemiology Center，Qingdao，Shandong 266032；2. Qingdao ?nstitute of Animal Husbandry & Veterinary Science，Qingdao，Shandong 266100；3. Horqin Right Wing Middle Banner ?nstitute of Animal Health Supervision，Xing'an League，?nner Mongolia 029400）

The present study was conducted to compare the vaccine efficacy in AA+ chickens challenged with very virulent MDV strain Md5. 150 AA+ chickens were randomly divided into 5 groups： challenge control group，QYH vaccine group，Merial vaccine group，Ringpu vaccine group and unvaccinated control group. Chickens were vaccinated with each three types of MD vaccine at 1 day old，and were challenged with Md5 strain at 8 days old. During 60 days after challenge，all dead chickens were collected and dissected for histopathology examination. The result showed that there was no obvious difference in immune-protection among the three MD vaccines （P ＞ 0.05），and the domestic MD vaccine was as efficient as imported MD vaccine. Nevertheless，it is still necessary to develop novel non-toxicity vaccines or gene-deleted vaccines in the future.

Marek's disease；very virulent strain；commercial vaccine；vaccine efficacy；histopathology

S859.79+7

B

1005-944X（2015）11-0087-04

中央財政農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣項目（CA201403025）；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)專項資金（SDA?T-13-011-13）

王永玲