劉超

（吉林農(nóng)業(yè)科技學院食品工程學院，吉林吉林132101）

分蘗蔥頭槲皮素對高血脂小鼠血脂影響

劉超

（吉林農(nóng)業(yè)科技學院食品工程學院，吉林吉林132101）

從分蘗蔥頭中提取制備槲皮素，研究其對高脂飼料喂養(yǎng)昆明小鼠建立高血脂模型的影響。利用試劑盒測定小鼠體重、臟器系數(shù)、血清中血清甘油三酯（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（Low Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（High Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）指數(shù)，計算動脈硬化指數(shù)（Arteriosclerosis Index，AI）。結(jié)果表明：與高脂陰性對照組相比，連續(xù)50 d灌胃分蘗蔥頭槲皮素能夠有效控制高血脂小鼠體重，對主要臟器沒有實質(zhì)性傷害，且可以顯著降低高脂血癥小鼠的血清TC、TG、LDL-C水平和AI值，明顯升高血清HDL-C水平，具有一定的降血脂作用，能調(diào)節(jié)高脂血癥小鼠的血脂水平，防止動脈粥樣硬化癥（Atherosclerosis，AS）的形成。綜上所述，分蘗蔥頭槲皮苷能夠預(yù)防和防治動脈粥樣硬化癥，有效降低高血脂的發(fā)病率，可以作為一種降血脂資源進行有效開發(fā)。

分蘗蔥頭；槲皮素；動脈粥樣硬化；降血脂

分蘗蔥頭，為百合科蔥屬植物（Allium cepa L.var. Agrogatum Don，ACDA），多年生草本，其鱗莖近似球形，外包赤紅色皮膜，出葉后根部呈6～14個蔥頭，屬高產(chǎn)作物。適宜黑土地生長，在黑龍江中北部、吉林大部分地區(qū)都能種植這種作物，可間作，生育期58 d，不怕凍，產(chǎn)量高。分蘗蔥頭具有抑菌、降血糖、抑制血小板凝聚、降血脂等生理功能［1-2］。其已被專家們發(fā)現(xiàn)至少有6種抗癌防衰老降脂作用的成份；對腦瘤、乳腺、前列腺等疾病都有很好的治療作用，特別是軟化脂肪中的血管療效更佳，世界各專業(yè)教授和性病專家們研究發(fā)現(xiàn)：把毛蔥經(jīng)過特殊加工后所取得的毛蔥汁（學術(shù)界稱之為毛蔥油），還在阻斷結(jié)腸、口腔、肺、肝臟胰腺、食管癌過程中有明顯的治療作用，在東南亞國家，各自家庭中把毛蔥自然加工后取汁，經(jīng)常食用還可刺激正常免疫，阻斷宮頸癌和皮膚癌細胞的生長［3］。

蔥屬植物中的黃酮醇類成分主要為山柰酚（kaempferol）、槲皮素（quercetin）與葡萄糖組成的單糖苷至多糖苷。Ngocly T.等［4］于2005年從洋蔥皮中發(fā)現(xiàn)了3個新的槲皮素縮合物，分別為槲皮素和原兒茶酸的縮合物、槲皮素氧化物和4-O-吡喃葡萄糖-槲皮素的縮合物以及槲皮素三聚物。2006年，F(xiàn)reddy A.等［5］又從洋蔥皮中發(fā)現(xiàn)了4個槲皮素B環(huán)上的氧化產(chǎn)物，這些化合物具有較強的抗氧化活性。

蔥屬植物對心血管系統(tǒng)疾病具有較強的治療作用，特別是其抗血小板聚集作用在國內(nèi)外文獻中有較多報道。Alfonso C.等分別從A.neapolitanum［6］和A. ursinum［7］中分離得到7種新黃酮醇苷，對血小板聚集均有不同程度的抑制作用。2003年，F(xiàn)urusawa M.等［8］從洋蔥皮中提取得到的4個黃酮醇可抑制人的血小板聚集，其中槲皮素及其二聚物還可使ADP引起的聚合物分解，從而有效預(yù)防了動脈粥樣硬化的發(fā)生，并為有效開發(fā)利用不可食用的洋蔥表皮提供了依據(jù)。

分蘗蔥頭總黃酮（totle flavone of Allium cepa L. var.Agrogatnm Don，TFAD）含量達48.2%，槲皮素為TFAD的主要有效成分（含量20.3%，其外皮中含量最高，達1 910 mg/kg［9］），主要是槲皮素-4′-O-β-D-葡萄吡喃糖苷和槲皮素-3，4′-O-β-D-葡萄吡喃糖苷。蘇曼曼［10］于2005年，研究了TFAD提取物對試驗性高脂血癥大鼠血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL）代謝和動脈硬化指數(shù)（AI）的影響及其抗氧化作用。結(jié)果表明粗提物能明顯降低試驗性高脂血癥大鼠升高的TC、TG、LDL及AI，并且能明顯升高HDL水平，且與模型對照組差異有顯著性。Edwards［11］和Egert［12］研究表明槲皮素可降低高血壓患者的血壓，并可顯著降低肥胖者的低密度脂蛋白膽固醇的水平。

分蘗蔥頭是一種降血脂功效明顯的東北特產(chǎn)蔥屬植物，大部分生理活性與其中高含量的分蘗蔥頭槲皮素（ACDC-Q）有直接或間接關(guān)系，但目前對于分蘗蔥頭中的槲皮素的主要功效研究不明朗，基于此點，本論文利用高效液相色譜法制備高純度槲皮素，研究其對高血脂模型小鼠的影響，以期尋找一種安全可靠的植物來源槲皮素降血脂、防治動脈粥樣硬化癥新藥。

1材料與方法

1.1材料與試劑

分蘗蔥頭：4月采于吉林市左家山區(qū)。

基礎(chǔ)飼料：玉米25%、次粉25%、面粉15%、魚粉8%、豆粕8%、油糠10%、麥麩9%。

高脂飼料：基礎(chǔ)飼料78.8%、膽固醇1%、蛋黃粉10%、豬油10%、膽鹽0.2%。

甘油三酯（TG）試劑盒（編號：1097170）、總膽固醇（TC）試劑盒（編號：1107170）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒（編號：2117060）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒（編號：2127060）：北京齊力達森儀器科技有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

WFZ75型紫外可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司；SHB-III順循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城科工貿(mào)有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；AR1140電子分析天平：奧豪斯國際貿(mào)易有限公司；KQ3200DE醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；HH-2恒溫數(shù)顯水浴鍋：常州國華電器有限公司；101-1A電熱鼓風干燥箱：天津市泰斯儀器有限公司；Shmisadezu LC-10A Tvp高效液相色譜儀：日本島津；RT-9600半自動生化分析儀：深圳市雷杜儀器設(shè)備責任有限公司。

1.3方法

1.3.1分蘗蔥頭槲皮素

精密稱取100 g分蘗蔥頭干燥鱗莖，用3倍量70%乙醇加熱回流3次，每次回流1 h，將3次溶液合并，減壓回收得流浸膏，加水溶解，過濾，濾液備用。

用高效液相色譜制備濾液中的槲皮素，制備條件如下，色譜柱：YMC-PackProC18RS（I.D.250mm×4.6mm）；流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（51∶49）；檢測波長：365 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；進樣量10 μL。得到淺黃色粉末狀槲皮素，純度達到93.5%。

1.3.2動物模型建立

100只昆明小鼠（18 g～22 g），雌雄各半，由吉林大學動物實驗中心提供。昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，按體重隨機分成5組，分為空白組、陰性對照組、分蘗蔥頭槲皮素低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組20只，各組平均體重基本相同，飼養(yǎng)環(huán)境溫度（22±3）℃、濕度60%、光照12 h、黑暗12 h循環(huán)。除空白組食用基礎(chǔ)飼料外，其余4組均喂養(yǎng)高脂飼料。在造模的同時，各組均灌胃給予受試物，槲皮素低、中、高劑量組分別以2、4、6 mg/kg·d進行灌胃，空白組以相同容量的自來水灌胃，陰性對照組以相同容量的高脂飼料灌胃，每天一次，連續(xù)50 d，試驗期間動物自由進食和飲水，各組小鼠每日定點給予飼料一次。試驗結(jié)束后各組小鼠禁食16 h，摘眼球采血，收集血樣于離心管中，室溫下靜置30 min，待血液凝固后，經(jīng)4 000 r/min離心10 min，用移液器吸取上層血清，依次利用各種試劑盒測定小鼠血清中的TG、TC、HDL-C、LDL-C、AI指標。采血后隨即采集各組小鼠的肝、脾、腎等臟器，稱重后密封保存，待測臟器系數(shù)。

1.3.3各指標的測定方法

1.3.3.1體重與臟器指數(shù)的測定

小鼠每1天～每2天量一次體重。

臟器系數(shù)是內(nèi)臟鮮重和體重比值的百分數(shù)，它能反映動物總的營養(yǎng)狀態(tài)和內(nèi)臟的病變情況。處死小鼠剝離其肝臟、脾臟、大腦、心臟、腎、胸腺立刻稱取其質(zhì)量，計算臟器系數(shù)。公式如下：

1.3.3.2血清脂質(zhì)的測定

摘眼球采血，收集血樣于離心管中，室溫下靜置30 min，待血液凝固后，經(jīng)4 000 r/min離心10 min，用移液器吸取上層血清并保存于超低溫冰箱，備用。將各組小鼠血清按照每種試劑盒的說明書規(guī)范操作，并使用半自動生化分析儀來檢測以下生化指標：TC、TG、HDL-C、LDL-C，根據(jù)公式計算出AI值，AI值增大時，動脈粥樣硬化危險性就增加。公式如下：

1.4數(shù)據(jù)處理

所有試驗數(shù)據(jù)均用SPSS 16.0軟件進行分析，試驗結(jié)果均以x±s表示，P＜0.05表示為具有統(tǒng)計學差異，P＜0.01表示具有極顯著性差異。

2結(jié)果與分析

2.1高脂模型的建立

用高脂飼料喂養(yǎng)小鼠1周后，隨機抽取4只小鼠，眼球取血，測得小鼠血清TC、TG含量與空白對照組的比較結(jié)果見表1。

表1　高脂血動物模型的建立Table 1Foundation of hyperlipemia mice model

從表1可以看出喂養(yǎng)1周后，小鼠血清TC、TG含量顯著升高（P＜0.01），表明高脂血癥小鼠模型建立成功。

2.2小鼠生長發(fā)育及體重變化

2.2.1體重影響

飼養(yǎng)過程中，各組小鼠中健康狀況良好，未發(fā)現(xiàn)疾病等異?，F(xiàn)象。各組小鼠體重變化見表2所示。

表2　分蘗蔥頭槲皮素對高脂血癥小鼠體重的動態(tài)影響（n=10）Table 2Dynamic effect of ACDC-Q on hyperlipemia mice weight（n=10）

試驗結(jié)果表明，處理前各組小鼠的體重差異不明顯，無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。按各組規(guī)定給料飼養(yǎng)50 d后，各組小鼠的體重均穩(wěn)步增長，并且高脂模型組小鼠體重與空白對照組相比顯著（P＜0.01），證明高脂模型建立成功。

在飼料中添加ACDC-Q后，空白對照組、陰性對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組小鼠的體重比試驗前分別增加了73.17%、104.78%、96.67%、66.18%和56.80%。低劑量組與高脂陰性對照組之間小鼠體重差異不顯著（P＞0.05），中劑量組、高劑量組與高脂陰性對照組之間小鼠體重差異極顯著（P＜0.01），這說明一定劑量的ACDC-Q可使高血脂小鼠體重下降。從攝食情況看，空白對照組與高脂陰性對照組比各劑量組表現(xiàn)出更強的食欲。從活動能力來看，中、高劑量組小鼠活動力增強。因此說明一定劑量ACDC-Q可以拮抗體內(nèi)脂肪過剩吸收的作用，并能增加小鼠活躍度，降低脂肪積累。

2.2.2臟器指數(shù)影響

臟器指數(shù)是一個重要的反映試驗動物總的營養(yǎng)狀態(tài)和內(nèi)臟的病變情況的指標，如接觸外來物質(zhì)使某個臟器受到損害，臟器指數(shù)將發(fā)生變化。50 d喂食ACDC-Q對高脂血癥的小鼠臟器指數(shù)的影響見表3。

由表3可知，與空白組相比，高脂組小鼠的肝、脾、腦和胸腺指數(shù)有極顯著性統(tǒng)計學差異（P＜0.01），可見高脂飼料對于小鼠的肝、脾、腦和胸腺臟器損害較大，不利于小鼠健康。在喂食ACDC-Q 50 d后，各劑量組的小鼠脾、腎臟指數(shù)與空白對照組相比，無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），說明槲皮素對健康小鼠脾臟、腎臟無顯著影響，并能在一定程度上降低血脂對這兩個臟器的損害；各試驗組的高劑量組的腦、胸腺指數(shù)與空白對照組相比無顯著性統(tǒng)計學差異（P＜0.05），這可能說明槲皮素對小鼠的腦神經(jīng)和胸腺有一定的營養(yǎng)改善作用；各個劑量組同空白對照組相比較，肝、心臟、脾及腎臟指數(shù)未見明顯差異，由此可初步推斷，給藥期間，中、高劑量組能保持小鼠重要臟器器官的重量不下降，說明藥物干預(yù)對小鼠臟器不會造成實際性傷害，并能改善臟器營養(yǎng)狀況。

表3　分蘗蔥頭槲皮素對高脂血癥小鼠各臟器指數(shù)的動態(tài)影響（n=10）Table 3Dynamic effect of ACDC-Q on organ coefficient of hyperlipemia mice（n=10）

2.3小鼠血脂指標變化

經(jīng)過50 d給藥飼養(yǎng)后，按1.3.3方法，測定各組實驗小鼠的血脂各項指標。結(jié)果見表4所示。

表4　分蘗蔥頭槲皮素對高脂血癥小鼠血脂相關(guān)指標的影響（n=10）Table 4Dynamic effect of ACDC-Q on serum lipids index of hyperlipemia mice（n=10）

ACDC-Q對高脂血癥小鼠血清中TC、TG的影響結(jié)果表明，飼喂高脂飼料，高脂模型組小鼠血清TC、 TG含量分別提高了72.03%（P＜0.01）、51.06%（P＜0.05），均顯著高于空白對照組。經(jīng)過50 d連續(xù)灌胃給藥，中、高劑量組小鼠血清中的TC、TG含量（P＜0.01）顯著降低。與高脂陰性對照組相比，低劑量槲皮素干預(yù)試驗中小鼠的TC、TG分別平均降低了20.00%、18.44%，表明其具有抑制高脂飼喂小鼠血清TC、TG升高的效果（P＜0.05）。在槲皮素干預(yù)試驗中，低、中、高劑量均有效果，以中、高劑量組效果較明顯，并且高劑量組小鼠血清TC、TG含量指標已接近空白對照組小鼠血清TC、TG含量水平，說明ACDC-Q能夠在臨床上顯著降低血脂，可以作為一種降血脂藥劑使用。

高脂模型組小鼠血清中HDL-C含量顯著低于空白對照組（P＜0.05），差異達到水平（P＜0.05），說明所采用的高脂飼料能顯著降低試驗小鼠血清HDL-C值，高脂血癥模型建立成功。在建立高脂模型的同時，采用ACDC-Q進行50 d的干預(yù)試驗。試驗結(jié)果表明，與高脂模型組相比，不同劑量槲皮素干預(yù)組都可以升高HDL-C水平分別使血清中HDL-C含量平均升高了55.86%、85.59%、102.70%。說明槲皮素具有升高高脂血癥小鼠血清中HDL-C含量的作用，升高作用隨著劑量的增加而加強。

ACDC-Q在升高小鼠血液中HDL-C水平的同時，協(xié)同降低LDL-C值，在槲皮素干預(yù)試驗中，隨著劑量的增加，小鼠血清LDL-C值依次降低，各劑量組小鼠血清LDL-C值與高脂模型組相比顯著差異（P＜0.05、P＜0.01），表明ACDC-Q能有效降低血清中的LDL-C值，降低高血脂指標，緩解高血脂癥狀，小鼠活動力有一定程度改善。

動脈粥樣硬化（AS）在臨床上主要表現(xiàn)出血清中的高TC和LDL-C，低HDL-C水平，在醫(yī)學上常用AI表示AS的危險性，AI值升高表示機體發(fā)生AS的可能性增加，AI值的大小與AS程度成正相關(guān)。各試驗組的AI值明顯低于高脂對照組值，均達到極顯著水平（P＜0.01）。在槲皮素干預(yù)試驗中，與高脂模型組相比，各劑量組的AI值平均下降率分別為56.88%、68.42%、97.62%?？梢夾CDC-Q各劑量組均可顯著降低AI值，降低AS的形成，對此類現(xiàn)代病可起到一定程度的預(yù)防和治療作用。

3結(jié)論

分蘗蔥頭是含有類黃酮化合物較高的蔬菜，類黃酮化合物多存在于毛蔥鱗莖中，主要有黃酮類、黃酮醇類和花色素類。黃酮醇類有山奈酚、異鼠李素、槲皮素及它們與葡萄糖組成的單糖苷和二糖苷至多糖苷［13］。研究表明，黃酮有抗氧化性，消除自由基活性，抑制脂氧合酶和環(huán)氧化物酶，防止血小板凝集的作用［14］。通過對高血脂模型小鼠血清的檢測，分蘗蔥頭槲皮素降血脂效果明顯，這與Liu Z T等研究相符［15］。

文鏡等［16］論證了建立高血脂小鼠模型的穩(wěn)定性，并提出了評價動物模型在降血脂研究中的實用性，本論文也結(jié)合評價標準，檢測了論文中高血脂小鼠模型的可靠性，保證血清指標的可信度。血脂是人體中一種重要的物質(zhì)，雖有較多功能作用，但如果血脂過多，容易造成血稠，血脂沉積，易導(dǎo)致冠心病、腦中風、腎動脈硬化、高血壓；誘發(fā)膽結(jié)石、胰腺炎，加重肝炎。“三高”是危害人類健康的殺手锏，其中之一的高血脂癥可以引起內(nèi)皮功能的受損［17］，對高血脂研究認為NO生物合成減少會損傷內(nèi)皮功能［18］，進而升高TC、LDL-C水平，引起動脈粥樣硬化。HDL-C可以促進體內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運，能夠延緩或者阻止AS和冠心病。因此，HDL-C的升高可阻抗AS的形成，進而改善脂質(zhì)代謝的紊亂。因此，臨床上常以降低LDL-C、升高HDL-C水平作為治療HLP的主要目標［19］。

本論文通過給予50 d的高脂飼料喂養(yǎng)，模型組小鼠血清中的TC含量顯著性的升高，并且體重也顯著性的高于正常組，符合高脂血癥的相關(guān)描述，表明高脂建模的成功。ACDC-Q進行干預(yù)治療后，高血脂模型小鼠血清中的TC、TG和LDL-C含量顯著降低，并升高血清中的HDL-C含量，同時對高血脂小鼠體重的增加有一定的控制能力，營養(yǎng)主要臟器，AI值降低，從而使得小鼠的高脂血癥狀態(tài)得以改善，有效防治AS。這與對于分蘗蔥頭降血脂作用的文獻研究相符合［10，20］，表明本試驗的重復(fù)性得以驗證。因此，開發(fā)東北特產(chǎn)分蘗蔥頭，將其作為高脂血癥、動脈粥樣硬化病患者的功能性食療保健品具有良好的開發(fā)前景。

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Antihyperlipidemic Activity of Quercetin from Allium cepa L.var.Agrogatum Don on Serum Lipids Index of Hyperlipidemic Mouse

LIU Chao
（School of Food Technology，Jilin Agriculture Science and Technology College，Jilin 132101，Jilin，China）

The anti-hyperlipidemic activity of Allium cepa L.var.Agrogatum Don quercetins（ACDA-Q）in hyperlipidemic mouse induced by high fat diet was studied.The efficacy was determined by rats serum lipids indexes including weights，organ coefficients，triglycerides（TG），total cholesterol（TC），low density lipoprotein cholesterol（LDL-C），high density lipoprotein cholesterol（HDL-C）and arteriosclerosis Index（AI）. The hyperlipidemic mouse showed significant decrease in TC，TG，LDL-C and AI value and increase HDL-C level by 50 days successive administration with Allium cepa L.var.Agrogatum Don quercetins（ACDA-Q）. ACDA-Q also showed controlling of weights and no damage of main organs.The anti-hyperlipidemic effect mediated by ACDA-Q may also be anticipated to have biological significant and prevent atherosclerosis as an anti-hyperlipidemic medicine.

Allium cepa L.var.Agrogatum Don；quercetin；atherosclerosis；antihyperlipidemic property

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.17.005

2015-05-19

吉林省教育廳“十二五”科學技術(shù)研究項目“毛蔥（鬼子蔥）的深加工技術(shù)及蔥油膠囊的研制”（吉教科合字［2014］第375號）

劉超（1982—），女（漢），講師，碩士研究生，研究方向：食品生物技術(shù)，生物活性物質(zhì)研究。