郝鳳奇，李景梅，*，楊桂連*

（1.長(zhǎng)春理工大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春　130022；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春　130118）

嗜酸乳酸桿菌對(duì)自主活動(dòng)受限型應(yīng)激小鼠腸道黏膜免疫狀態(tài)的影響

郝鳳奇1，李景梅1，*，楊桂連2，*

（1.長(zhǎng)春理工大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春130022；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春130118）

目的：探討嗜酸乳酸桿菌（Lactobacillus acidophilus，LA）對(duì)自主活動(dòng)受限型應(yīng)激小鼠腸道黏膜免疫狀態(tài)的影響。方法：以健康雌性BALB/c小鼠為受試動(dòng)物，分為常規(guī)飼養(yǎng)組（NC組）、常規(guī)飼養(yǎng)條件灌胃LA組（NC+LA組）、應(yīng)激組（S組）、應(yīng)激條件灌胃LA組（S+LA組），小鼠的LA灌胃劑量為108CFU/d；應(yīng)激組小鼠每天被限制自主活動(dòng)3 h；15 d后取材，采用流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等方法，對(duì)腸系膜淋巴結(jié)（mesenteric lymph nodes，MLN）中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD11c+樹(shù)突細(xì)胞（CD11c+dendritic cell，CD11c+DC）比例，結(jié)腸組織白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）和白細(xì)胞介素-17（interleukin-17，IL-17）水平，以及小腸總分泌型免疫球蛋白A（secreted immunoglobulin A，sIgA）水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：常規(guī)飼養(yǎng)條件下，LA能極顯著提高小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞比例（P＜0.01），顯著提高M(jìn)LN中CD11c+DC比例、小腸總sIgA水平和結(jié)腸組織IL-10水平（P＜0.05），顯著降低結(jié)腸組織IL-17水平（P＜0.05），而對(duì)MLN中CD8+T細(xì)胞比例無(wú)顯著影響（P＞0.05）；應(yīng)激條件能極顯著降低小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞比例和CD11c+DC比例（P＜0.01），顯著降低CD8+T細(xì)胞比例（P＜0.05），極顯著降低小鼠結(jié)腸組織IL-10水平和小腸總sIgA水平（P＜0.01），極顯著提高結(jié)腸組織IL-17水平（P＜0.01）；應(yīng)激條件下，LA能顯著提高小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞比例和CD11c+DC比例（P＜0.05），顯著提高小鼠結(jié)腸組織IL-10水平和小腸總sIgA水平（P＜0.05），并顯著降低結(jié)腸組織IL-17水平（P＜0.05），而對(duì)小鼠MLN中CD8+T細(xì)胞比例無(wú)顯著影響（P＞0.05）。結(jié)論：給予自主活動(dòng)受限型應(yīng)激小鼠LA干預(yù)，可提高小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞和CD11c+DC比例，上調(diào)結(jié)腸IL-10和小腸總sIgA分泌水平，下調(diào)結(jié)腸IL-17分泌水平，調(diào)節(jié)應(yīng)激小鼠的腸道黏膜免疫狀態(tài)。

嗜酸乳酸桿菌；自主活動(dòng)受限；應(yīng)激；腸道黏膜免疫

應(yīng)激是機(jī)體對(duì)外部或內(nèi)部刺激產(chǎn)生的一種生理性應(yīng)答，應(yīng)激過(guò)程中機(jī)體啟動(dòng)不同的防御機(jī)制對(duì)抗刺激以維持自身穩(wěn)態(tài)［1］。當(dāng)機(jī)體長(zhǎng)期處于某種或某幾種應(yīng)激條件下會(huì)增加罹患疾病的風(fēng)險(xiǎn)，如癌癥、自身免疫性疾病和感染等［2-3］。動(dòng)物模型研究結(jié)果表明，重復(fù)性應(yīng)激會(huì)影響機(jī)體正常的細(xì)胞免疫和體液免疫狀態(tài)［4-5］，甚至?xí)鹉c道微生物菌群結(jié)構(gòu)的變化［6-7］，進(jìn)而影響腸道黏膜免疫功能。

乳酸桿菌是人和動(dòng)物腸道內(nèi)重要的益生菌，通過(guò)增強(qiáng)黏膜屏障［8］、促進(jìn)腸道健康微生物群落結(jié)構(gòu)形成［9］、提高局部黏膜免疫應(yīng)答［10-11］、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌［12］等作用調(diào)控機(jī)體的免疫狀態(tài)。

本研究以嗜酸乳酸桿菌（Lactobacillus acidophilus，LA）為研究對(duì)象，通過(guò)BALB/c小鼠自主運(yùn)動(dòng)受限的應(yīng)激模型，探討應(yīng)激條件下LA灌胃對(duì)小鼠腸系膜淋巴結(jié)（mesenteric lymph nodes，MLN）中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD11c+樹(shù)突細(xì)胞（CD11c+dendritic cell，CD11c+DC）比例，結(jié)腸組織白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）和白細(xì)胞介素-17（interleukin-17，IL-17）水平，以及小腸總分泌型免疫球蛋白A（secreted immunoglobulin A，sIgA）水平的影響，明確LA對(duì)該種應(yīng)激條件下小鼠腸道黏膜免疫的調(diào)節(jié)作用，以期為深入研究LA的腸道黏膜免疫調(diào)控作用機(jī)制及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑提供有價(jià)值的參考，對(duì)LA應(yīng)用于功能性乳制品或腸道微生態(tài)制劑的開(kāi)發(fā)提供一定指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株

嗜酸乳酸桿菌（LA），分離自健康嬰兒糞便，由長(zhǎng)春理工大學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2培養(yǎng)基與試劑

乳酸桿菌MRS培養(yǎng)基自行配制；DMEM培養(yǎng)基美國(guó)Gibco公司；Cooktail蛋白酶抑制劑瑞士羅氏公司；anti-mCD4-FITC、anti-mCD8-PE單克隆抗體美國(guó)BD公司；小鼠IL-10、IL-17、總sIgA酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒美國(guó)R&D公司。

1.1.3Green-berger Lysis Buffer的配制

基礎(chǔ)緩沖液含1 mmol/L MgCl2·6H2O、15 mmol/L Tris-HCl、150 mmol/L NaCl、1 mmol/L CaCl2、1% Triton，使用時(shí)按1∶100（V/V）加入Cooktail蛋白酶抑制劑。

1.1.4動(dòng)物

清潔級(jí)BALB/c雌性小鼠40 只，體質(zhì)量（17.080±0.972） g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1LA菌體懸液的制備

采用MRS液體培養(yǎng)基，37 ℃條件下靜止厭氧培養(yǎng)LA，待菌液OD600nm值為0.6～0.8時(shí)，4 ℃、6 000 r/min離心2 min，菌體沉淀用1×磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）（pH 7.4）清洗3 次后，制成108CFU/mL菌體懸液。

1.2.2動(dòng)物分組及處理

BALB/c小鼠隨機(jī)平均分為4 組：常規(guī)飼養(yǎng)組（NC組）、常規(guī)飼養(yǎng)條件灌胃LA組（NC+LA組）、應(yīng)激組（S組）、應(yīng)激條件灌胃LA組（S+LA組），適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后進(jìn)行為期15 d的正式實(shí)驗(yàn)。

正式實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，NC組：常規(guī)條件飼養(yǎng)；NC+LA組：常規(guī)飼養(yǎng)條件下給每只小鼠灌胃LA菌體懸液，劑量為1 mL/d；S組：每天8：00—11：00將小鼠置于帶有通氣孔的透明容器中（內(nèi)部尺寸：長(zhǎng)×寬×高為10 cm×3 cm×3 cm），確保小鼠不能調(diào)頭，只能前后移動(dòng)。S+LA組：應(yīng)激處理后給每只小鼠灌胃LA菌體懸液，劑量為1 mL/d。各組小鼠均在清潔級(jí)條件下飼養(yǎng)，自由飲水和采食，12 h光照/12 h黑暗，給予NC組和S組小鼠灌胃1×PBS（pH 7.4）1 mL/d。第16天對(duì)小鼠實(shí)行安樂(lè)死，無(wú)菌條件下取小腸、結(jié)腸、腸系膜淋巴結(jié)（MLN）用于指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.3MLN細(xì)胞懸液的制備及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

將MLN置于盛放有DMEM培養(yǎng)基的平皿中，用注射器末端研磨后，過(guò)無(wú)菌篩網(wǎng)制成細(xì)胞懸液，2 000 r/min離心5 min，棄上清液，沉淀用PBS洗滌2 次，加入適量DMEM培養(yǎng)基計(jì)數(shù)。取細(xì)胞懸液200 μL分別加入2.0 mL FACS Buffer，2 000 r/min離心5 min，棄上清液，沉淀用PBS洗滌2 次后再用FACS Buffer混勻至106個(gè)，加入到Tube管中，每管加入15 μL熒光標(biāo)記的單克隆抗體（CD4+T細(xì)胞檢測(cè)采用anti-mCD4-FITC單克隆抗體、CD8+T細(xì)胞檢測(cè)采用anti-mCD8-PE單克隆抗體），4 ℃避光作用30 min，F(xiàn)ACS Buffer洗滌2 次后重懸于100 μL FACS Buffer中，進(jìn)行BD Canto流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.4結(jié)腸組織IL-10、IL-17水平檢測(cè)

采用預(yù)冷的Green-berger Lysis Buffer將結(jié)腸組織制成勻漿，采用ELISA試劑盒，按照說(shuō)明書方法操作，檢測(cè)IL-10、IL-17水平。

1.2.5小腸總sIgA水平檢測(cè)

取幽門下至回盲結(jié)合部約15 cm腸段，無(wú)菌1×PBS（pH 7.4）緩慢沖洗腸腔后，刮取腸黏膜表面黏液層，收集于1.5 mL無(wú)菌離心管中，加入0.5 mL無(wú)菌1×PBS（pH 7.4，含Cooktail蛋白酶抑制劑）混勻后，4 ℃、12 000 r/min離心10 min，取上清液，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書方法操作，檢測(cè)總sIgA水平。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)分析和作圖采用Graphpad Prism 6.0軟件，結(jié)果用±s表示。

2　結(jié)果與分析

2.1各組小鼠體質(zhì)量變化分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，NC組、NC+LA組、S組、S+LA組小鼠體質(zhì)量分別為（20.81±0.56）、（21.13±0.23）、（19.94±0.48）、（20.17±0.33） g，各組小鼠體質(zhì)量變化無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.2小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD11c+DC比例變化分析

圖1 各組小鼠MLN中CCDD44+T細(xì)胞、CCDD88+TT細(xì)胞比例Fig.1　Ratios of CD4+T cells and CD8+T cells in MLN from mice from each group

圖2　各組小鼠MLN中CD1111cc+　DDCC比例Fig.2　Ratio of CD11c+DCs in MLN from mice from each group

由圖1、2可知，NC組小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD11c+DC比例分別為（34.46±1.76）%、（20.59±1.59）%和（33.97±2.15）%，NC+LA組分別為（41.12±3.03）%、（21.66±2.33）%和（37.95±1.98）%，S組分別為（25.28±2.41）%、（17.49±1.10）%和（25.52±1.53）%，S+LA組分別為（29.46±1.39）%、（17.24±1.42）%和（29.48±0.88）%。常規(guī)飼養(yǎng)條件下，LA極顯著提高了小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞比例（P＜0.01），顯著提高了CD11c+DC比例（P＜0.05），而對(duì)CD8+T細(xì)胞比例變化無(wú)顯著影響（P＞0.05）；給予小鼠自主活動(dòng)限制后，極顯著降低了小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞和CD11c+DC比例（P＜0.01），顯著降低了CD8+T細(xì)胞比例（P＜0.05），在此條件下，盡管灌胃LA可顯著提高小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞比例和CD11c+DC比例（P＜0.05），但仍顯著或極顯著低于NC組（P＜0.05或P＜0.01），且給予LA不能提高自主活動(dòng)受限小鼠的MLN中CD8+T細(xì)胞比例。

2.3小鼠結(jié)腸組織中IL-10、IL-17水平變化分析

圖3　各組小鼠結(jié)腸組織中IL-10和IL-177水平Fig.3　Levels of IL-10 and IL-17 in colon tissue from mice from each group

由圖3可知，NC組小鼠結(jié)腸組織中IL-10、IL-17水平分別為（60.07±2.25）、（61.04±2.15） pg/mL，NC+LA組分別為（65.86±3.60）、（55.27±2.13） pg/mL，S組分別為（49.08±2.26）、（77.88±1.59） pg/mL、S+LA組分別為（54.83±2.57）、（72.08±4.82） pg/mL。常規(guī)飼養(yǎng)條件下，LA顯著提高了小鼠結(jié)腸組織中IL-10水平（P＜0.05），顯著降低了IL-17水平（P＜0.05）；給予小鼠自主活動(dòng)限制后，極顯著降低了小鼠結(jié)腸組織中IL-10水平（P＜0.01），極顯著提高了IL-17水平（P＜0.01），在該條件下，盡管灌胃LA可顯著提高小鼠結(jié)腸組織中IL-10水平（P＜0.05），顯著降低IL-17水平（P＜0.05），但仍與NC組有顯著或極顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。

2.4小鼠小腸總sIgA水平變化分析

圖4　各組小鼠小腸總sIgAA水平Fig.4　Level of small intestinal total sIgA in mice from each group

由圖4可知，NC組小鼠小腸總sIgA水平為（31.67±1.59） μg/mL，NC+LA組為（35.93±2.17）μg/mL， S組為（23.18±2.18） μg/mL，S+LA組為（27.08±1.64） μg/mL。常規(guī)飼養(yǎng)條件下，LA顯著提高了小鼠小腸總sIgA水平（P＜0.05）；給予小鼠自主活動(dòng)限制后，極顯著降低了小鼠小腸總sIgA水平（P＜0.01），在該條件下，盡管LA可顯著提高小鼠小腸sIgA水平（P＜0.05），但仍極顯著低于NC組（P＜0.01）。

3　討 論

近年來(lái)，人類微生物組計(jì)劃（Human Microbiome Project，HMP）和人體腸道宏基因組研究（Metagenomics of the Human Intestinal Tract，MetaHIT）計(jì)劃的階段性研究成果表明，人類腸道中有約1014個(gè)共生微生物，種類多達(dá)1 000 種，稱之為“微生物組”，編碼的基因達(dá)100 萬(wàn)個(gè)以上，被譽(yù)為“人類的第二個(gè)基因組”。腸道微生物組與多種腸道外疾病相關(guān)，如糖尿病、肥胖、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等［13-14］。機(jī)體70%的免疫細(xì)胞在腸道中發(fā)揮作用，腸道微生物組與腸道黏膜免疫間的互作穩(wěn)態(tài)對(duì)宿主的健康至關(guān)重要。乳酸桿菌作為人類和動(dòng)物腸道內(nèi)的益生菌，被公認(rèn)為“GRAS”（Generally Regarded as Safe）等級(jí)的微生物，對(duì)于緩解腸易激綜合征（irritablebowelsyndrome，IBS）、炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）、抗生素引起的腹瀉等具有一定作用。

關(guān)于應(yīng)激對(duì)健康的影響，傳統(tǒng)的思維關(guān)注于體液代謝和離子平衡方面，通常忽略了腸道微生態(tài)平衡調(diào)控機(jī)體健康的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，應(yīng)激降低了腸道中擬桿菌屬的相對(duì)豐度，提高了梭菌屬的相對(duì)豐度［7］。因此，研究外源乳酸桿菌干預(yù)應(yīng)激條件下腸道黏膜的免疫狀態(tài)具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)所采用的LA分離自健康嬰兒糞便，前期研究結(jié)果表明，該菌能顯著提高C57BL/6雌性小鼠結(jié)腸集合淋巴結(jié)中TLR2+細(xì)胞比例，上調(diào)Th1和Th2型免疫反應(yīng)［15］。本實(shí)驗(yàn)旨在前期工作基礎(chǔ)上，初步探討該菌對(duì)自主活動(dòng)受限型應(yīng)激小鼠腸道黏膜免疫狀態(tài)的影響。

自主活動(dòng)受限是應(yīng)激條件的一種，本實(shí)驗(yàn)中連續(xù)15 d給予小鼠3 h/d的自主活動(dòng)受限。第10天時(shí)，除NC組小鼠外，其他各組小鼠均出現(xiàn)排斥進(jìn)入受限裝置的現(xiàn)象，并伴有飲水量增加的行為學(xué)變化，但實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組小鼠體質(zhì)量并無(wú)顯著差異，推測(cè)原因是15 d的應(yīng)激并未累積至腸道消化吸收功能紊亂，這是否類似于人類的亞健康狀態(tài)，還有待于進(jìn)一步探討。然而，為探索該應(yīng)激條件是否影響了小鼠腸道黏膜免疫狀態(tài)，以及外源乳酸桿菌干預(yù)對(duì)腸道黏膜免疫的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，分別檢測(cè)了各組小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD11c+DC比例以及結(jié)腸組織中IL-10、IL-17水平和小腸總sIgA水平。

MLN是腸道黏膜免疫系統(tǒng)中重要的次級(jí)淋巴器官，是腸道中T細(xì)胞駐留的重要場(chǎng)所之一，腸道黏膜固有層中未成熟樹(shù)突細(xì)胞（immature dendritic cell，iDC）遇到抗原時(shí)，對(duì)其進(jìn)行捕獲和加工，其自身分化為成熟樹(shù)突細(xì)胞（mature dendritic cell，mDC），并攜帶抗原信息遷移至MLN中，活化T細(xì)胞［16］。CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化一定程度上反映了機(jī)體的免疫狀態(tài)。MLN中的Na?ve CD4+T細(xì)胞被激活后，可根據(jù)不同的刺激信號(hào)分化為Th1、Th2、Treg、Th17等亞型［17-18］。近年來(lái)，腸道Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞數(shù)量間的動(dòng)態(tài)平衡是腸道炎癥的重要指標(biāo)［19-20］。Treg細(xì)胞通過(guò)分泌IL-10發(fā)揮抑制炎癥作用，調(diào)控腸道黏膜免疫應(yīng)答趨向耐受反應(yīng)［21］；Th17細(xì)胞通過(guò)分泌IL-17發(fā)揮促炎作用，調(diào)控腸道黏膜免疫應(yīng)答趨向炎癥反應(yīng)［22］。正常情況下，Treg/Th17、IL-10/IL-17間處于動(dòng)態(tài)平衡，以維持腸道黏膜免疫穩(wěn)態(tài)［16］。然而，一旦在某些因素的影響下平衡被打破，將會(huì)引起腸道黏膜免疫紊亂。本實(shí)驗(yàn)中，15 d的重復(fù)性自主活動(dòng)受限條件下，小鼠MLN中CD4+T細(xì)胞比例極顯著降低，說(shuō)明應(yīng)激導(dǎo)致了小鼠腸道黏膜免疫狀態(tài)發(fā)生了改變，結(jié)合IL-10和IL-17兩種細(xì)胞因子來(lái)看，應(yīng)激條件極顯著提高了IL-17水平，極顯著降低了IL-10水平，推測(cè)應(yīng)激可能誘發(fā)小鼠腸道炎癥性疾病。然而，應(yīng)激條件下同時(shí)給予LA干預(yù)，可使IL-10水平顯著增加，IL-17水平顯著降低，但二者仍未恢復(fù)到正常水平。此外，常規(guī)飼養(yǎng)條件下，LA顯著增加IL-10水平，顯著降低IL-17水平。結(jié)果表明，常規(guī)飼養(yǎng)或應(yīng)激條件下，LA均具有調(diào)控腸道黏膜免疫趨向耐受、降低炎癥性腸道疾病發(fā)生的潛能。

CD8+T細(xì)胞識(shí)別由MHCI類分子遞呈的內(nèi)源性抗原肽，其主要功能亞群是細(xì)胞毒性T細(xì)胞［23］。本實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)激導(dǎo)致了CD8+T細(xì)胞比例顯著降低。與CD4+T細(xì)胞不同的是，常規(guī)飼養(yǎng)或應(yīng)激條件下，LA對(duì)MLN中CD8+T細(xì)胞比例均無(wú)顯著影響，說(shuō)明LA對(duì)腸道黏膜免疫的調(diào)節(jié)作用并非依賴于CD8+T細(xì)胞，這可能與CD8+T只識(shí)別內(nèi)源性抗原肽有關(guān)。

DC是機(jī)體內(nèi)專職抗原遞呈細(xì)胞，是連接先天免疫和獲得免疫的“橋梁”［24-25］。腸道黏膜免疫系統(tǒng)中的DC依賴其自身的模式識(shí)別受體，如Toll樣受體（Toll like receptor，TLR）、NOD樣受體（NOD like receptor，NLR）、C型凝集素受體（C-type lectin receptor，CLR）等識(shí)別腸道內(nèi)相應(yīng)的微生物相關(guān)配體，并引起免疫級(jí)聯(lián)反應(yīng)，包括DC激活、介導(dǎo)T細(xì)胞活化、細(xì)胞因子分泌等，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用［22］。已有研究證實(shí)，DC表面模式識(shí)別受體中TLR2識(shí)別肽聚糖分子、TLR4識(shí)別脂多糖分子、DC-SIGN識(shí)別S層蛋白分子［12，26-28］。CD11c是小鼠腸道DC活化的重要標(biāo)志，本實(shí)驗(yàn)中，常規(guī)飼養(yǎng)條件或應(yīng)激條件下，LA均顯著增加MLN中CD11c+DC比例，說(shuō)明LA具有誘發(fā)腸道DC活化的潛能，鑒于LA是G+菌，其菌體表面含有大量的肽聚糖和S層蛋白，因此推測(cè)LA活化DC很可能依賴于其表面的肽聚糖和S層蛋白。

sIgA是腸道黏膜局部體液免疫應(yīng)答中的主要抗體。乳酸桿菌通過(guò)激活DC，或調(diào)節(jié)腸道菌群穩(wěn)態(tài)等方式，直接或間接上調(diào)sIgA水平［29］。本實(shí)驗(yàn)中，常規(guī)飼養(yǎng)條件或應(yīng)激條件下，LA均顯著增加腸道sIgA水平，表明LA具有提高腸道黏膜局部體液免疫的作用。

4　結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，15 d的自主活動(dòng)受限型應(yīng)激條件下，小鼠腸道黏膜免疫功能紊亂，主要表現(xiàn)為MLN中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD11c+DC比例顯著或極顯著降低，結(jié)腸組織中IL-10水平極顯著降低、IL-17水平極顯著增加，以及小腸總sIgA水平極顯著降低。LA具有調(diào)節(jié)應(yīng)激小鼠腸道黏膜免疫的潛能，主要表現(xiàn)為提高M(jìn)LN中CD11c+DC和CD4+T細(xì)胞比例，上調(diào)結(jié)腸組織中IL-10水平和小腸總sIgA水平，下調(diào)結(jié)腸組織中IL-17水平。然而，LA菌體表面一種或多種分子與腸道相關(guān)免疫細(xì)胞間的相互作用及其機(jī)制，以及LA對(duì)應(yīng)激條件下腸道微生物群落組成的影響仍需進(jìn)一步深入研究。

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Influence of Lactobacillus acidophilus on Intestinal Mucosal Immunity in a Mouse Model of Stress Induced by Auto-Activity Restriction

HAO Fengqi1， LI Jingmei1，*， YANG Guilian2，*
（1. School of Life Science and Technology， Changchun University of Science and Technology， Changchun130022， China；2. College of Animal Science and Technology， Jilin Agricultural University， Changchun130118， China）

Objective： To assess the influence of Lactobacillus acidophilus on intestinal mucosal immunity in a mouse model of stress induced by auto-activity restriction. Methods： Male health BALB/c mice were divided into 4 groups. In normal control group （NC）， the mice received balanced diet and water and were left undisturbed in their cages. In NC plus Lactobacillus acidophilus （NC + LA） group， the mice were given a suspension of LA with 108CFU/d per mouse through intragastric administration under normal control condition. In stress group （S）， the mice were subjected to stress induced by auto-activity restriction for 3 h per day. In stress plus LA （S+LA） group， the mice were given a suspension of LA with 108CFU/d per mouse through intragastric administration under stress condition. After 15 days， mice from each group were sacrificed. CD4+T， CD8+T and CD11c+dendritic cells （CD11c+DCs） in mesenteric lymph nodes （MLN），interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17） levels in colon tissue， total secretory immunoglobulin A （sIgA） level in small intestine were analyzed by fl ow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Results： Under NCcondition， the proportions of CD4+T cells and CD11c+DCs in MLN （CD4+T cell： P ＜ 0.01， CD11c+DC： P ＜ 0.05）， small intestinal sIgA level and IL-10 level in colon tissue （sIgA， IL-10： P ＜ 0.05） were enhanced by LA and IL-17 level in colon tissue was decreased （P ＜ 0.05）， but the proportion of CD8+T cells in MLN was not signifi cantly varied （P ＞ 0.05）. After auto-activity restriction， the proportions of CD4+T cells， CD8+T cells and CD11c+DCs， and the levels of IL-10 and small intestinal sIgA were decreased （CD4+T cell， CD11c+DC， IL-10， sIgA： P ＜ 0.01， CD8+T cell： P ＜ 0.05）. Interestingly， the proportion of CD4+T cells and CD11c+DCs， the levels of IL-10 and small intestinal sIgA were increased， and the level of IL-17 was decreased by LA under stress condition （P ＜ 0.05）， but the proportion of CD8+T cells was not signifi cantly affected（P ＞ 0.05）. Conclusion： LA administered to mice subjected to auto-activity restriction enhances the proportions of CD4+T cells and CD11c+DCs in MLN， up-regulates the levels of IL-10 in colon and total small intestinal sIgA， and downregulates the level of IL-17 in colon， thereby modulating their intestinal mucosal immunity under stress condition.

Lactobacillus acidophilus； auto-activity restriction； stress； intestinal mucosal immunity

Q939.91

A

1002-6630（2015）23-0247-06

10.7506/spkx1002-6630-201523045

2015-03-04

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31272552）；吉林省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目

郝鳳奇（1981—），男，講師，碩士，研究方向?yàn)槲⑸锱c免疫學(xué)。E-mail：hao4269@126.com

李景梅（1969—），女，教授，博士，研究方向?yàn)槲⑸飳W(xué)。E-mail：ljm3023@126.com楊桂連（1978—），男，副教授，博士，研究方向?yàn)閯?dòng)物微生態(tài)與黏膜免疫。E-mail：yangguilian@jlau.edu.cn