王春明鐘超王鳳學(xué)黃凡賈紅華韋萍趙印

（1.南京工業(yè)大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，南京 211816；2.河南天冠企業(yè)集團(tuán)有限公司車用生物燃料技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南陽 473000）

一株Bacillus sublitis JH-1發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶培養(yǎng)基的響應(yīng)面優(yōu)化

王春明1鐘超1王鳳學(xué)1黃凡1賈紅華1韋萍1趙印2

（1.南京工業(yè)大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，南京 211816；2.河南天冠企業(yè)集團(tuán)有限公司車用生物燃料技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南陽 473000）

利用剛果紅透明圈法從秸稈堆肥中篩選出一株產(chǎn)木聚糖酶菌株Bacillus sublitis JH-1，以單因素試驗(yàn)為基礎(chǔ)，采用響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)Bacillus sublitis JH-1液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，得到產(chǎn)木聚糖酶發(fā)酵最適條件為：培養(yǎng)溫度33℃，pH值6.0，麥芽糖濃度為2.6%，酵母粉濃度為1.2%，KH2PO4濃度為1.2%，發(fā)酵產(chǎn)酶量比優(yōu)化前提高了1.8 倍。

Bacillus sublitis JH-1；木聚糖酶；響應(yīng)面法

木聚糖酶（1，4-β-D-xylanase）是一種糖基水解酶，以內(nèi)切方式作用于木聚糖主鏈內(nèi)部的β-1，4-木糖苷鍵，其主要水解產(chǎn)物為低聚木糖和少量木糖。木聚糖酶主要存在于海洋陸地動(dòng)物、植物和微生物之中，但其主要來源出自微生物。產(chǎn)木聚糖酶的微生物種類很多［1］，近年來報(bào)道的有曲霉［2］、木霉［3］、青霉［4］、鏈霉菌、酵母菌［5］等真菌屬和芽孢桿菌［6］等細(xì)菌屬［7］。

目前，木聚糖酶已被廣泛應(yīng)用于人們的生產(chǎn)生活中［8-11］。木聚糖酶可以輔助漂白，改善造紙傳統(tǒng)工藝中劇毒致癌的含氯漂白劑［12］。木聚糖還可用于飼料、釀酒、面粉、果汁澄清等行業(yè)。國外早在20世紀(jì)中葉就開始對(duì)木聚糖酶進(jìn)行研究，我國到20世紀(jì)80年代才開始涉足該領(lǐng)域［13］，最初僅應(yīng)用于工業(yè)化飼料生產(chǎn)中，但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，在紡織、造紙、廢紙脫墨等行業(yè)中都有廣泛的應(yīng)用，工業(yè)化生產(chǎn)木聚糖酶的報(bào)道也越來越多［14］。近些年，因木聚糖酶可將廢棄的生物質(zhì)材料轉(zhuǎn)化為乙醇、燃料等能源，由于其巨大的潛力和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，使得越來越多的學(xué)者投入到對(duì)它的研究中［16］。

由于木聚糖酶廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域及巨大經(jīng)濟(jì)潛力，篩選優(yōu)化木聚糖酶高產(chǎn)菌株具有重要的研究意義和應(yīng)用價(jià)值。自然界中很多微生物都能產(chǎn)生木聚糖酶，針對(duì)廢棄農(nóng)作物中半纖維素組分的高效利用，本研究前期以此篩選到了一株產(chǎn)木聚糖酶的菌株，通過PCR提取16S rDNA進(jìn)行測序分析，測序結(jié)果通過GenBank Blast分析，認(rèn)定為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），命名為B. sublitis JH-1。因其產(chǎn)生芽孢能耐受高溫高壓，與真菌、放線菌和霉菌的傳統(tǒng)固態(tài)培養(yǎng)相比，液態(tài)培養(yǎng)具有生產(chǎn)效率高、容易自動(dòng)化控制、可對(duì)過程進(jìn)行多種手段精確調(diào)控的優(yōu)勢，且具有較好的穩(wěn)定性和生物活性，并容易分離。

本研究應(yīng)用的菌株屬于嗜酸性微生物，因此可以考慮將其應(yīng)用于飼料加工方面。向家畜養(yǎng)殖的飼料中添加木聚糖酶，能有效提高動(dòng)物消化中的酶活性，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)有效的消化吸收。此外，被降解后的木聚糖，轉(zhuǎn)化為低聚木糖能使雙歧桿菌增殖，有效地調(diào)節(jié)動(dòng)物腸胃中的微生態(tài)環(huán)境，達(dá)到提高動(dòng)物的抗病及生產(chǎn)性能的效果。王修啟等［15］驗(yàn)證了在家畜飼料中添加木聚糖酶，可有效提高家畜的生產(chǎn)性能。

由于B. sublitis JH-1具有良好的發(fā)展前景，但微生物生長受培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基成分影響很大，為了優(yōu)化其生長環(huán)境，本研究在對(duì)該菌株木聚糖酶發(fā)酵條件進(jìn)行單因素優(yōu)化的基礎(chǔ)上，通過Plackett-Burman（PB）試驗(yàn)設(shè)計(jì)、最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)和Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)3個(gè)過程，得出影響顯著的因子和水平，通過建立回歸擬合方程得出理論最高值，對(duì)培養(yǎng)基組分進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化，旨在更好地提高該菌株的產(chǎn)酶量。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 木聚糖酶高產(chǎn)菌株篩選樣品來源于南京工業(yè)大學(xué)沼氣站秸稈堆肥區(qū)。

1.1.2 培養(yǎng)基 發(fā)酵培養(yǎng)基（%）：蛋白胨1.0，酵母粉0.5，NaCl 1.0，121℃高壓滅菌20 min。

1 mg/mL剛果紅溶液：稱取1 g剛果紅溶于1 000 mL去離子水中，121℃高壓滅菌20 min。

1%木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取1 g木聚糖溶解后定容至 100 mL，貯存4℃?zhèn)溆谩?/p>

3，5-二硝基水楊酸顯色液：準(zhǔn)確稱取 6.3 g 3，5-二硝基水楊酸置于262 mL 2 mol/L 氫氧化鈉溶液中，然后加酒石酸鉀鈉的熱溶液 500 mL（182.0 g酒石酸鉀鈉溶于500 mL蒸餾水中），再加 5.0 g重蒸酚和5.0 g亞硫酸鈉，攪拌至溶解，冷卻后定容至1 000 mL，貯于棕色瓶中置冰箱一周后使用，用前過濾。

1.2 方法

1.2.1 酶活力測定方法 采用DNS法［17］測定酶反應(yīng)體系中產(chǎn)生的還原糖，以木糖作標(biāo)準(zhǔn)曲線測定木聚糖酶的活性。

酶活力單位的定義：以木聚糖作為底物，每毫升稀釋酶液每分鐘釋放1 μg還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

1.2.2 單因素試驗(yàn)

1.2.2.1 溫度對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響 將B. sublitis JH-1接入液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于31℃-39℃ 180 r/min搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d后，測定酶活，并根據(jù)酶活力的大小，確定最佳的培養(yǎng)溫度。

1.2.2.2 初始pH對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響 分別配制0.2 mol/L的pH4.0和pH5.0的醋酸緩沖液、pH6.0-9.0磷酸鹽緩沖液、pH9.0 Tris鹽酸緩沖液，分別添加液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中。將B. sublitis JH-1接入液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于180 r/min搖床培養(yǎng)箱中33℃培養(yǎng)3 d后，測定酶活，并根據(jù)酶活力的大小，確定最佳的初始pH。

1.2.2.3 碳源對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響 在液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，分別添加濃度為1%（m /w）的木糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、木聚糖、玉米芯，可溶性淀粉，將B. sublitis JH-1接入pH6的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于180 r/min搖床培養(yǎng)箱中33℃培養(yǎng)3 d后，測定酶活，并根據(jù)酶活力的大小，確定最佳的碳源種類。

根據(jù)碳源的篩選結(jié)果，選擇酶活力最高的作為最適碳源，在pH6.0的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，分別添加0.5%-4%的麥芽糖，置于180 r/min搖床培養(yǎng)箱中33℃培養(yǎng)3 d后，測定酶活，并根據(jù)酶活力的大小，確定最佳碳源添加量。

1.2.2.4 氮源對(duì)產(chǎn)酶的影響 在已優(yōu)化的pH、碳源的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，分別添加濃度為0.4%（m/w）的無機(jī)氮源NaNO3、KNO3、NH4Cl、（NH4）2SO4，有機(jī)氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母粉作為單一氮源，將B. sublitis JH-1接入，置于180 r/min搖床培養(yǎng)箱中33℃培養(yǎng)3 d后，測定酶活，并根據(jù)酶活力的大小，確定最佳的氮源種類。

根據(jù)氮源的篩選結(jié)果，選擇酶活力最高的作為最適碳源，分別添加0.5%-4%的酵母粉，置于180 r/min搖床培養(yǎng)箱中33℃培養(yǎng)3 d后，測定酶活，并根據(jù)酶活力的大小，確定最佳氮源添加量。

1.2.3 響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)

1.2.3.1 PB試驗(yàn)-顯著影響因素的篩選 在單因素?fù)u瓶發(fā)酵試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以下試驗(yàn)都采用100 mL搖瓶，10%的接種量，90 r/min轉(zhuǎn)速33℃搖床培養(yǎng)2 d的方式（試驗(yàn)得出的結(jié)論，篇幅有限，未在文中列出），將篩選出的影響B(tài). sublitis JH-1產(chǎn)木聚糖酶發(fā)酵培養(yǎng)基的9種成分，乳糖、麥芽糖、可溶性淀粉、酵母粉、蛋白胨、氯化鈉、硫酸鎂、硫酸銨和磷酸二氫鉀分別作為PB試驗(yàn)的考察對(duì)象，利用Minitab 16軟件，選用N=12的 Plackett-Burman設(shè)計(jì)，并余2個(gè)空項(xiàng)作為誤差分析。

表1 Plackett-Burman試驗(yàn)因素水平及編碼

1.2.3.2 最陡爬坡試驗(yàn) 根據(jù)PB試驗(yàn)結(jié)果，確定影響B(tài). sublitis JH-1木聚糖酶的3個(gè)主要因素，根據(jù)PB試驗(yàn)得到的一次擬合方程系數(shù)的正負(fù)決定該因素的爬坡方向和步長的遞增和遞減。

1.2.3.3 中心組合試驗(yàn)及響應(yīng)面分析 根據(jù)最陡爬坡試驗(yàn)的結(jié)果，選用麥芽糖、酵母粉、磷酸二氫鉀為考察因素，采用Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)3因素3水平的響應(yīng)面分析（RSA）試驗(yàn)，試驗(yàn)因子和編碼水平，見表2。

表2 試驗(yàn)因素水平及編碼水平

2 結(jié)果

2.1 培養(yǎng)溫度、初始pH對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

如圖1所示，隨著溫度的上升產(chǎn)酶量增加，但當(dāng)溫度高于33℃時(shí)，產(chǎn)酶量明顯下降。結(jié)果顯示，在33℃下，B. sublitis JH-1產(chǎn)木聚糖酶量最大。

圖1 溫度對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

如圖2所示，pH＞7時(shí)，B. sublitis JH-1產(chǎn)酶活性較低，說明枯B. sublitis JH-1適合偏酸性環(huán)境，中性或者偏堿都不適合B. sublitis JH-1的生長和代謝，pH值為6時(shí)，B. sublitis JH-1產(chǎn)酶活性最強(qiáng)。

2.2 碳源對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

如圖3所示，以麥芽糖作為碳源，對(duì)B. sublitis JH-1產(chǎn)酶更有利。

通過研究不同麥芽糖添加量對(duì)B. sublitis JH-1產(chǎn)木聚糖酶的影響，結(jié)果（圖4）顯示，其產(chǎn)酶效果依次為1.5%＞2%＞2.5%＞1%，可見添加1%-2.5%的麥芽糖作為碳源，產(chǎn)酶效果較好，最佳添加量為1.5%。

圖2 pH對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

圖3 碳源對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

圖4 麥芽糖濃度對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

2.3 氮源對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

如圖5所示，分別添加濃度為0.4%的不同氮源，考察他們對(duì)B. sublitis JH-1產(chǎn)木聚糖酶的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以酵母粉為氮源，優(yōu)于其他無機(jī)氮源和有機(jī)氮源。分別添加0.5%-4%酵母粉考察不同濃度酵母粉對(duì)B. sublitis JH-1酶活的影響。如圖6所示，1%-2%的酵母粉作為氮源產(chǎn)酶效果較好，最佳含量為1.5%。

圖5 氮源對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

圖6 酵母粉濃度對(duì)產(chǎn)木聚糖酶的影響

2.4 Plackett-Burman設(shè)計(jì)篩選及影響產(chǎn)木聚糖酶的重要因素

PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表3，由表4 的結(jié)果得到圖 7的效應(yīng) Pareto 圖。結(jié)果顯示，只有麥芽糖、酵母粉和磷酸二氫鉀超過了誤差邊界。因此，麥芽糖、酵母粉和磷酸二氫鉀是影響B(tài). sublitis JH-1影響木聚糖酶的培養(yǎng)基重要因素。同時(shí)由表4結(jié)果發(fā)現(xiàn)，麥芽糖、酵母粉和磷酸二氫鉀的效應(yīng)分別為（+）148.41、（-）106.13和（+）74.83。

表3 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表4 PB設(shè)計(jì)結(jié)果的各因素效應(yīng)及評(píng)價(jià)

圖7 影響木聚糖酶發(fā)酵的 9 成分的 Pareto 圖

2.5 最陡爬坡試驗(yàn)

最陡爬坡試驗(yàn)的設(shè)計(jì)及結(jié)果（表5）顯示，實(shí)驗(yàn) 5對(duì)應(yīng)的木聚糖酶酶活為2 821.19 U/mL，隨后木聚糖酶開始降低，因此選取實(shí)驗(yàn)5 的麥芽糖（2.4%）、酵母粉（1.2%）和磷酸二氫鉀（1.2%）做優(yōu)化試驗(yàn)的中心點(diǎn)。

表5 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)及其結(jié)果

2.6 中心組合試驗(yàn)及響應(yīng)面分析

利用統(tǒng)計(jì)軟件Design-Expert7.1.1 對(duì)試驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析，根據(jù)表6的試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)表中數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，所得到的木聚糖酶酶活（Y）對(duì)麥芽糖（X1）、酵母粉（X2）和KH2PO4（X3）通過擬合可得到的二次多項(xiàng)式方程為：Y=3670.84+92.63X1-10.31X2+44.52X3-6.01X1X2-4.01X1X3-76.45X2X3-104.28X1X1-133.20 X2X2-106.57 X3X3，由此方程可進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表7。

表7顯示，建立的回歸模型顯著（P＜0.05），說明方程擬合度較好；Pr失擬項(xiàng)= 0.，1126＞0.05，說明失擬項(xiàng)并不顯著，殘差由于隨機(jī)誤差而引起，模型選擇正確；復(fù)相關(guān)系數(shù)R2=0.976 7，表明預(yù)測值與實(shí)測值之間具有比較高的相關(guān)性；調(diào)整性決定系數(shù)表明方程模型可信度比較高，能夠較好地描述本次試驗(yàn)的結(jié)果。

表6 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

圖8 麥芽糖和酵母粉對(duì)木聚糖酶酶活影響的響應(yīng)面立體分析圖

圖9 麥芽糖和磷酸二氫鉀對(duì)木聚糖酶酶活影響的響應(yīng)面立體分析圖

圖10 酵母粉和磷酸二氫鉀對(duì)木聚糖酶酶活影響的響應(yīng)面立體分析圖

由回歸方程所作出的響應(yīng)面立體分析圖（圖8-圖10）顯示，它們分別反映了麥芽糖（X1）、酵母粉（X2）和KH2PO4（X3）這3個(gè)因素之間兩兩交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響。麥芽糖和酵母粉對(duì)木聚糖酶的影響如圖8所示，X1因素（麥芽糖）與X2因素（酵母粉）交互作用顯著，X1因素（麥芽糖）對(duì)木聚糖酶酶活的影響較大，為主效應(yīng)因子。如圖9所示，X1因素（麥芽糖）與X3因素（KH2PO4），當(dāng)KH2PO4的濃度一定時(shí)，木聚糖酶的酶活隨著麥芽糖添加濃度的增加而增大，但當(dāng)麥芽糖的添加濃度大于2.577%時(shí)，木聚糖酶酶活逐漸呈下降趨勢；當(dāng)麥芽糖的添加濃度一定時(shí)，隨KH2PO4添加濃度的增加，木聚糖酶的酶活先增加后降低。如圖10所示，酵母粉和KH2PO4的濃度一定時(shí)，另一因素的濃度增加到達(dá)最適濃度時(shí)，木聚糖酶酶活隨之增大，濃度超過最適濃度后繼續(xù)增加，木聚糖酶酶活隨之降低。

從響應(yīng)面圖可分析得出，對(duì)于各因素之間的交互影響中，3個(gè)因素中麥芽糖對(duì)木聚糖酶酶活影響最大，KH2PO4次之，酵母粉最弱。通過Design-Expert軟件分析，可得到B. sublitis JH-1液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶，最佳培養(yǎng)基配方為：麥芽糖添加濃度為2.577%，酵母粉添加濃度為1.176%，KH2PO4添加濃度為1.248%，在此條件下木聚糖酶酶活預(yù)測值可達(dá)3 697.37 U/mL。結(jié)合實(shí)際試驗(yàn)操作的方便性和方差分析的結(jié)果，將最終確定培養(yǎng)基配方為：麥芽糖添加濃度為2.6%，酵母粉添加濃度為1.2%，KH2PO4添加濃度為1.2%。為了驗(yàn)證B. sublitis JH-1液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶響應(yīng)面模型的精確性，對(duì)該模型進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，按照最終確定的培養(yǎng)基參數(shù)進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證，可得木聚糖酶酶活平均值為3 693.91 U/mL，表明此模型實(shí)際值與預(yù)測值有較好的擬合性，是可行有效的，具有較高的實(shí)踐參考價(jià)值。

3 討論

本研究中，培養(yǎng)條件對(duì)微生物生長影響很大，溫度越高，微生物生長代謝越快，次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成速度也加快。但由于有些中間代謝酶類對(duì)溫度變化比較敏感，過高的溫度反而會(huì)降低其活性，從而影響相關(guān)代謝產(chǎn)物的積累。初始pH的變化會(huì)直接影響微生物細(xì)胞膜的電荷狀態(tài)，從而影響微生物的生理代謝功能。

培養(yǎng)基成分是影響微生物生理代謝的最重要因素，直接關(guān)系到酶等次級(jí)代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生和積累，對(duì)碳源、氮源等培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化，不僅可以降低成本，更充分發(fā)揮菌株產(chǎn)酶潛能，提高產(chǎn)酶率。推測菌體不僅可利用麥芽糖作為生長代謝的來源，乳糖也可能是木聚糖酶合成的較強(qiáng)的誘導(dǎo)物，麥芽糖含量過低不能達(dá)到好的誘導(dǎo)效果，過量則可能反過來抑制B. sublitis JH-1的生長及產(chǎn)酶。陳熊等［18］報(bào)道通過添加不同的碳源，特別是麥芽糖，可顯著提高微生物木聚糖酶產(chǎn)量，張?jiān)蒲愕龋?9］也報(bào)道麥芽糖對(duì)木聚糖酶表達(dá)具有誘導(dǎo)作用，與本研究結(jié)果一致。氮是微生物生長代謝的關(guān)鍵元素，也是各種生物活性物質(zhì)的重要組成部分。其原因可能是酵母粉不僅為B. sublitis JH-1生長提供了氮源，滿足生長代謝的需求，還能提供輔助的生長因子及豐富的氨基酸促進(jìn)其代謝產(chǎn)物的合成。江國忠等［20］也報(bào)道添加酵母粉為氮源培養(yǎng)B. sublitis JH-1，酶活力顯著高于其他氮源。

本研究篩選的B. sublitis JH-1還可通過離子束誘變育種技術(shù)、蛋白質(zhì)工程、基因工程，固定化細(xì)胞技術(shù)［21］等技術(shù)手段，進(jìn)一步提高B. sublitis JH-1的木聚糖酶產(chǎn)量，研究其酶學(xué)性質(zhì)，充分挖掘其應(yīng)用潛力。

4 結(jié)論

對(duì)B. sublitis JH-1木聚糖酶產(chǎn)量有顯著影響的3個(gè)因素為麥芽糖、酵母粉和KH2PO4；在此最優(yōu)培養(yǎng)基條件下，該菌株木聚糖酶產(chǎn)量可達(dá)到3 693.91 U/mL，發(fā)酵產(chǎn)酶量比優(yōu)化前提高了1.8倍。用響應(yīng)面法優(yōu)化B. sublitis JH-1產(chǎn)木聚糖酶的發(fā)酵培養(yǎng)基是有效可行的。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

Optimization of Bacillus sublitis JH-1 for Xylanase Production by Response Surface Analysis

Wang Chunming1Zhong Chao1Wang Fengxue1Huang Fan1Jia Honghua1Wei Ping1Zhao Yin2
（1. Colloge of Biotechnology and Pharmaceutical Engineering，Nanjing Tech University，Nanjing 211816；2. State Key Laboratory of Motor Vehicle Biofuel Biotechnology，Henan Tianguan Group Co. Ltd.，Nanyang 473000）

Xylanase producing strain Bacillus sublitis JH-1 was screened from straw compost by Congo red transparent circle method. According to the single-factor experiments， response surface methodology was applied to optimize the liquid state fermentation conditions of Bacillus sublitis JH-1 for xylanase production， with the optimal conditions being listed as follows：temperature as 33℃， pH value as 6.0， maltose as 2.6%（m/V）， YE as 1.2%（m/V）， KH2PO4as 1.2%（m/V）. Increased 1.8 times in average as compared with preliminary culture and consistent with the maxmum predicted value.

Bacillus sublitis JH-1；xylanase；Response Surface Methodology

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.027

2014-07-01

國家“863”計(jì)劃（2012AA021405），車用生物燃料技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題（2013024），廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃（桂科重1348004-4）

王春明，女，碩士研究生，研究方向：生物能源；E-mail：aishuiyuasy@sina.com

賈紅華，男，副研究員，研究方向：生物能源；E-mail：hhjia@njtech.edu.cn