喬新榮段鴻斌劉柱明趙付安

（1.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院，信陽(yáng) 464000；2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，鄭州 450002）

擬南芥PKS2與CAM4蛋白互作研究

喬新榮1段鴻斌1劉柱明1趙付安2

（1.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院，信陽(yáng) 464000；2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，鄭州 450002）

植物藍(lán)光受體向光素（phototropin，PHOT）介導(dǎo)許多生理反應(yīng)，現(xiàn)已從擬南芥中分離了其下游的一些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分。前期研究表明，擬南芥光敏色素底物 PKS家族成員PKS1與部分Ca2+結(jié)合蛋白鈣調(diào)素（calmodulin，CAM）成員互作，參與PHOT2介導(dǎo)的強(qiáng)藍(lán)光誘導(dǎo)下胚軸向光反應(yīng)。旨在探討PKS2和CAM4之間的互作關(guān)系，首先用RT-PCR技術(shù)得到PKS2和CAM4 的cDNA全長(zhǎng)序列。通過酵母雙雜交和雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)，從體外與體內(nèi)證實(shí)PKS2和CAM4能相互作用。此結(jié)果進(jìn)一步豐富了PKS家族與CAM之間的聯(lián)系，為深入解析PHOT功能研究奠定基礎(chǔ)。

擬南芥；向光素；光敏色素底物；鈣調(diào)素

植物藍(lán)光受體向光素（phototropin，PHOT）介導(dǎo)植物諸多生理反應(yīng)，PHOT1單獨(dú)介導(dǎo)弱藍(lán)光誘導(dǎo)的向光反應(yīng)及下胚軸伸長(zhǎng)的抑制，PHOT2是介導(dǎo)強(qiáng)藍(lán)光誘導(dǎo)葉綠體回避運(yùn)動(dòng)的基本光受體［1］。此外，二者以光強(qiáng)依賴方式共同調(diào)節(jié)植物的向光彎曲、氣孔開放、葉綠體聚集運(yùn)動(dòng)、葉片伸展及定位等生理反應(yīng)［1］，使植物適應(yīng)不同光環(huán)境，促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育。近年來(lái)，隨著PHOT下游信號(hào)成分的分離及功能探索，進(jìn)一步推動(dòng)了 PHOT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的深入研究。擬南芥中編碼光敏色素激酶底物的PKS（phytochrome kinase substrate）是一個(gè)小基因家族，共有4個(gè)成員PKS1-PKS4，它們最初鑒定是紅光受體激酶光敏色素（phytochrome，PHY）的底物，均定位于質(zhì)膜，參與PHY介導(dǎo)的去黃化、根與下胚軸的生長(zhǎng)定位［2-4］。近年來(lái)的研究表明，PKS 也參與藍(lán)光受體PHOT介導(dǎo)的生理反應(yīng)。藍(lán)光刺激增強(qiáng)了下胚軸伸長(zhǎng)區(qū)PKS1的表達(dá)量［5］。PKS1/2與PHOT1/2互作［6，7］，PKS1主要參與PHOT1介導(dǎo)的根和下胚軸的向光反應(yīng)［5，8］，以及PHOT2介導(dǎo)的強(qiáng)藍(lán)光誘導(dǎo)向光彎曲［7］。PKS2主要在PHOT2信號(hào)路徑中調(diào)節(jié)葉片的伸展和定位［6］。

Ca2+廣泛存在于植物體內(nèi)，是植物生長(zhǎng)發(fā)育和環(huán)境刺激應(yīng)答中心調(diào)節(jié)子［9］。許多試驗(yàn)表明，Ca2+也參與藍(lán)光誘導(dǎo)的一些生理反應(yīng)。例如，藍(lán)光誘導(dǎo)了胞質(zhì)Ca2+的升高［10-12］，且此反應(yīng)由PHOT介導(dǎo)［11，12］。單側(cè)藍(lán)光照射后的單子葉玉米胚芽鞘的背光面和向光面中Ca2+含量不同［13］。眾所周知，生長(zhǎng)素在下胚軸的背光面和向光面的不對(duì)稱分布引起了向光彎曲［14］。但上述的研究表明Ca2+也可能參與PHOT介導(dǎo)的向光反應(yīng)。鈣調(diào)素（calmodulin，CAM）是一類真核生物中廣泛存在且高度保守的Ca2+感受結(jié)合蛋白，擬南芥中7個(gè)CAM基因編碼4個(gè)CAM蛋白異構(gòu)體（isoform），分別為CAM1/CAM4、CAM2/CAM3/CAM5、 CAM6和CAM7［15］。有證據(jù)表明CAM調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素極性運(yùn)輸。為了挖掘Ca2+參與向光反應(yīng)的直接證據(jù)，我們之前研究證明PKS1不但與生長(zhǎng)素外流載體PIN1直接互作，而且與CAM4/5/7也互作，可能在PHOT2信號(hào)通路中參與調(diào)節(jié)下胚軸向光反應(yīng)［7］。為了更進(jìn)一步研究PHOT介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑中PKS家族與Ca2+之間更多的信息聯(lián)系，本研究利用酵母雙雜交（yeast two-hybird）和雙分子熒光互補(bǔ)（bimolecular fluorescence complementation，BIFC）技術(shù)，研究PKS2與CAM4之間的互作關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和質(zhì)粒 大腸桿菌（Escherichia coli）DH-5α；酵母菌（Saccharomyces cervisiae）菌株Y190；用于酵母互作的質(zhì)粒載體pAS2和pACT2，用于雙分子熒光互補(bǔ)的載體YFPC和YFPN均為本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 試劑及試劑盒 限制性內(nèi)切酶、Oligo（dT）、核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)（Marker）、DNA凝膠純化回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司；Trizol試劑購(gòu)自Invitrogen公司；高效連接試劑盒Soultion I、M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶購(gòu)自Promega公司；KOD-plus DNA聚合酶購(gòu)自ToYoBo公司；抗生素氨芐青霉素（Amp），醋酸鋰（LiAC），鮭魚精DNA，PEG，X-gal及所用分析純購(gòu)自Solarbio公司；Taq DNA聚合酶、dNTP、普通PCR buffer購(gòu)自TIANGEN公司。

1.1.3 引物 酵母雙雜交試驗(yàn)引物如下所示（下劃線是酶切位點(diǎn)）：

1.2 方法

1.2.1 總RNA提取及cDNA的合成 以擬南芥幼苗為材料，利用Trizol 法試劑說(shuō)明書提取總RNA。參照M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶說(shuō)明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA第一鏈，立即使用或-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 載體構(gòu)建 根據(jù)TAIR網(wǎng)站上提供的PKS2及CAM4的CDS序列，選擇體外互作的GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)。利用PKS2為誘餌蛋白，CAM4為捕獲蛋白，用PrimerPremier5.0 設(shè)計(jì)引物，以PF1和 PR1為引物構(gòu)建PKS2-pAS2載體，以CF1和CR1為引物構(gòu)建CAM4-pACT2載體。利用PF2和 PR2為引物構(gòu)建BIFC試驗(yàn)中的PKS2-YFPC載體，CF2和CR2為引物構(gòu)建CAM4-YFPN載體。

以制備好的cDNA為模板，利用上述引物分別擴(kuò)增PKS1及CAM4基因序列，先利用普通Taq DNA聚合酶預(yù)擴(kuò)增預(yù)期片段，再用高保真酶KODPlusDNA聚合酶，擴(kuò)增回收。擴(kuò)增條件為：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性40 s，55-57℃復(fù)性40 s，72℃（68℃）延伸1-1.5 min，30個(gè)循環(huán)；72℃（68℃）延伸10 min。

然后將擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化，用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶對(duì)基因片段和載體酶切，回收后16℃連接4 h，將連接產(chǎn)物通過熱激法傳入到大腸桿菌DH5α，并涂布在含60 μg/mL的氨芐青霉素（Amp）抗性的LB培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)。菌落PCR和質(zhì)粒PCR后，進(jìn)行酶切驗(yàn)證后，得到相應(yīng)的重組克隆質(zhì)粒送上海生工測(cè)序。

1.2.3 體外酵母雙雜交試驗(yàn)

1.2.3.1 酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化 參照Gietz和St Jean［16］的醋酸鋰法進(jìn)行。將30℃培養(yǎng)條件下獲得OD≈2.0的50 mL酵母菌（Y190）液室溫下3 800 r/min離心5 min。然后重懸于25 mL水中，1 000 r/min離心5 min，得沉淀的細(xì)胞重懸在900 μL水中，13 000 r/min離心1 min。用0.1 mol/L LiAC重懸沉淀細(xì)胞，使其最終體積為1 mL，30℃溫育10 min。然后每100 μL 分裝至1.5 mL EP管中，離心后，向沉淀細(xì)胞中依次加入 240 μL 50% PEG，36 μL 1 mol/L LiAC，50 μL鮭魚精DNA，及各5 μL的兩個(gè)不同質(zhì)粒，補(bǔ)水至360 μL。旋渦器上劇烈重懸細(xì)胞，然后置于30℃恒溫箱中溫育30 min，再置于42℃恒溫水浴池中熱激30 min，12 000 r/min離心1 min，棄上清，加適量滅菌ddH2O，輕輕重懸細(xì)胞。取20-200 μL涂于SD板上。

1.2.3.2 β-gal陽(yáng)性克隆的顯色反應(yīng) 當(dāng)30℃恒溫培養(yǎng)箱中的酵母克隆直徑約為2 mm時(shí)，剪大小合適的尼龍膜，并作上標(biāo)記，用鑷子輕輕擠壓在菌落表面，使克隆菌落粘至尼龍膜上。當(dāng)尼龍膜完全浸濕后，取出用液氮冷卻10 s，室溫解凍，再冷卻，反復(fù)2-3次。用Z-buffer/X-gal溶液浸濕濾紙并置于潔凈的培養(yǎng)皿中。把菌落裂解好的尼龍膜貼于浸濕的濾紙上。置于30℃培養(yǎng)箱孵育，8 h前不時(shí)檢查藍(lán)色反應(yīng)的出現(xiàn)。

1.2.4 BIFC試驗(yàn) 參照Walter 等［17］方法，利用PEG介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化法進(jìn)行。取數(shù)個(gè)生長(zhǎng)健壯的擬南芥葉片，切成細(xì)條，黑暗條件下，酶解細(xì)胞壁，離心收集原生質(zhì)體，用冰冷的W5（154 mmol/L NaCl，125 mmol/L CaCl2，5 mmol/L KCl，5 mmol/L葡萄糖，0.03% MES，pH5.8）溶液輕柔洗滌。重懸后23℃，100×g離心1 min。棄上清，然后每管沉淀用0.5 mL MMg（15 mmol/L MgCl2，0.1% MES，0.4 mol/L 甘露醇，pH5.6）溶液重懸。每種質(zhì)粒取約10 μg于1.5 mL EP管中，加100 μL重懸的原生質(zhì)體，輕輕混勻。然后加入110 μL PEG/Ca（1 g PEG4000，0.75 mL H2O，0.625 mL 0.8 mol/L甘露醇，0.25 mL 1 mol/L CaCl2）溶液，輕柔混勻。室溫避光靜置20-30 min。加入1 mL W5溶液，混勻。在23℃，弱光條件下孵育12-18 h。然后常溫下100×g離心2 min，取50 μL左右溶液于小塑料器皿中，靜置片刻用激光共聚焦顯微鏡觀察熒光。

2 結(jié)果

2.1 酵母雙雜交試驗(yàn)重組載體的構(gòu)建

用Trizol方法提取擬南芥幼苗RNA，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，PCR擴(kuò)增到1 329 bp的PKS2及480 bp的CAM4 CDS序列（分別如圖1，2所示的1號(hào)電泳條帶）。用Sma I和BamH I限制性內(nèi)切酶雙酶切PKS2序列片段，以及pAS2質(zhì)粒載體，得到重組菌落，挑單菌落進(jìn)行過夜LB液體培養(yǎng)，提取質(zhì)粒進(jìn)行PCR和酶切（圖1中2號(hào)條帶）。用Nco I和Xho I限制性內(nèi)切酶分別雙酶切CAM4基因片段和pACT2質(zhì)粒，結(jié)果如圖2所示。將得到的PKS2-pAS2和CAM4-pAC2重組質(zhì)粒送公司測(cè)序鑒定。

圖1 PKS2- pAS2載體構(gòu)建

圖2 CAM4-pACT2載體構(gòu)建

2.2 PKS2和CAM4酵母互作分析

為了檢測(cè)PKS2和CAM4蛋白是否相互作用，將PKS2構(gòu)建到誘餌載體pAS2上形成PKS2-pAS2重組質(zhì)粒并測(cè)序正確；將CAM4構(gòu)建到pACT2上得到CAM4-pAS2重組質(zhì)粒并測(cè)序正確。將PKS2-pAS2與CAM4-pACT2質(zhì)粒、PKS2-pAS2與pACT2質(zhì)粒、CAM4-pACT2與pAS2質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母Y190中，同時(shí)將陽(yáng)性對(duì)照［18］PHOT1-pAS2與NPH3-pACT2及陰性對(duì)照pAS2/pACT2分別共轉(zhuǎn)化酵母Y190，并涂布于SD平板上。30℃培養(yǎng)2-4 d后，挑選菌落轉(zhuǎn)接至YPD板上繼續(xù)生長(zhǎng)2-4 d。進(jìn)行β-gal 染色，結(jié)果（圖3）顯示，只有陽(yáng)性對(duì)照和PKS2-pAS2/ CAM4-pACT2變藍(lán)，而其他不變藍(lán)，說(shuō)明PKS2-pAS2和CAM4-pACT2單獨(dú)不能激活報(bào)告基因，只有PKS2-pAS2和pACT2-CAM4之間相互作用具有了轉(zhuǎn)錄激活活性。從而證明PKS2和CAM4蛋白存在相互作用。

圖3 PKS2與CAM4的酵母互作試驗(yàn)

2.3 BIFC試驗(yàn)載體構(gòu)建

利用測(cè)序正確的PKS2-pAS2質(zhì)粒為模板，用引物PF2、PR2及KOD-plus DNA 聚合酶 PCR擴(kuò)增去掉終止密碼子的PKS2全長(zhǎng)，將回收的目的條帶及YFPC空質(zhì)粒載體分別利用BamH I和Sma I酶切，得到重組質(zhì)粒PKS2-YFPC，雙酶切重組質(zhì)粒電泳條帶如圖4所示。以測(cè)序正確的CAM4-pACT2為模板，利用引物CF2、CR2及KOD-plus DNA 聚合酶 PCR擴(kuò)增去掉終止密碼子的CAM4全長(zhǎng)cDNA，用BamH I和Sma I雙酶切回收的目的條帶及YFPN質(zhì)粒載體，將構(gòu)建的重組質(zhì)粒CAM4-YFPN酶切驗(yàn)證（圖5）。將酶切驗(yàn)證正確的PKS2-YFPC和CAM4-YFPN重組質(zhì)粒送公司測(cè)序。

圖4 PKS2-YFPC載體構(gòu)建

圖5 CAM4-YFPN載體構(gòu)建

2.4 PKS2和CAM4體內(nèi)互作分析

為了進(jìn)一步在植物體內(nèi)驗(yàn)證PKS2和CAM4的相互作用，采用BiFC試驗(yàn)，將構(gòu)建好的表達(dá)載體質(zhì)粒PKS2-YFPC和CAM4-YFPN、陰性對(duì)照YFPC/YFPN及陽(yáng)性對(duì)照［19］PHOT1-YFPC/ PHOT1-YFPN，通過PEG介導(dǎo)瞬時(shí)轉(zhuǎn)化法，共轉(zhuǎn)擬南芥原生質(zhì)體，弱光處理12-18 h后，利用激光共聚焦觀察，陰性對(duì)照YFPC/YFPN未觀察到黃色熒光，而陽(yáng)性對(duì)照PHOT1-YFPC/ PHOT1-YFPN和PKS2-YFPC/CAM4-YFPN觀察到了質(zhì)膜上有黃色熒光（圖6），說(shuō)明PKS2和CAM4在細(xì)胞質(zhì)膜上互作。

3 討論

近年來(lái)，藍(lán)光受體PHOT介導(dǎo)生理反應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究已成為熱點(diǎn)之一?，F(xiàn)已分離了多種PHOT下游信號(hào)蛋白［1，20］，但由于同源蛋白激酶受體PHOT1和PHOT2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的交叉及特異性特點(diǎn)，使得對(duì)其下游信號(hào)蛋白功能的研究更為復(fù)雜及多樣性。例如，在研究PHOT介導(dǎo)的下胚軸向光彎曲反應(yīng)中，NPH3蛋白是PHOT1、PHOT2下游共有信號(hào)，與二者生理互作，但RPT2蛋白僅與PHOT1互作，PP2A蛋白與PHOT2特異互作調(diào)節(jié)向光彎曲，PKS家族中，PKS1/2都與PHOT1/2互作，但PKS2側(cè)重于PHOT2介導(dǎo)的葉片伸展和定位。另外，PHOT信號(hào)與光敏素信號(hào)、生長(zhǎng)素信號(hào)及Ca2+信號(hào)也存在關(guān)聯(lián)。因此，對(duì)PHOT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究還需進(jìn)一步深入，尤其是與Ca2+信號(hào)互作的直接證據(jù)還很有限。前期工作研究表明，PKS家族中PKS1與Ca2+信號(hào)感受蛋白CAM4/5/7互作可能參與強(qiáng)藍(lán)光誘導(dǎo)PHOT2調(diào)節(jié)下胚軸向光彎曲。本研究利用酵母雙雜交和BIFC試驗(yàn)證明PKS2能與CAM4互作。為了證明二者互作的準(zhǔn)確性，下一步可制備PKS2抗體，利用免疫共沉淀方法進(jìn)一步驗(yàn)證二者互作關(guān)系。另一方面，進(jìn)一步分析PKS2與CAM5、CAM6、 CAM7的互作反應(yīng)，為PKS家族作為PHOT與Ca2+信號(hào)的中間介導(dǎo)子功能奠定基礎(chǔ)。

圖6 PKS2與CAM4的BIFC互作試驗(yàn)

4 結(jié)論

本研究通過RT-PCR方法克隆獲得了擬南芥PKS2與CAM4的完整編碼序列，成功構(gòu)建了用于酵母雙雜交系統(tǒng)及雙分子熒光互補(bǔ)試驗(yàn)的PKS2和CAM4表達(dá)載體，并進(jìn)行了PKS2和CAM4蛋白的互作試驗(yàn)。結(jié)果表明，二者能直接相互作用。

［1］Christie JM. Phototropin blue-light receptors［J］. Annu Rev Plant Biol， 2007， 58（6）：21-45.

［2］Lariguet P， Boccalandro HE， Alonso JM， et al. A growth regulatory loop that provides homeostasis to phytochrome A signaling［J］. Plant Cell， 2003， 15（12）：2966-2978.

［3］Molas ML， Kiss JZ. PKS1 plays a role in red-light-based positive phototropism in roots［J］. Plant Cell Environ， 2008， 31（6）：842-849.

［4］Schepens I， Boccalandro HE， Kami C， et al. PHYTOCHROME KINASE SUBSTRATE 4 modulates phytochrome-mediated control of hypocotyl growth orientation［J］. Plant Physiol， 2008， 147（2）：661-671.

［5］Lariguet P， Schepens I， Hodgson D， et al. PHYTOCHROME KINASE SUBSTRATE 1 is a phototropin 1 binding protein required for phototropism［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 2006， 103（26）：10134-10139.

［6］Carbonnel M， Davis P， Roelfsema MRG， et al. The Arabidopsis PHYTOCHROME KINASE SUBSTRATE 2 protein is a phototropin signaling element that regulates leaf flattening and leaf positioning1［J］. Plant Physiol， 2010， 152（3）：1391-1405.

［7］Zhao X， Wang YL， Qiao XR， et al. Phototropins function in highintensity-blue-light-induced hypocotyls phototropism in Arabidopsis by altering cytosolic calcium［J］. Plant Physiol， 2013， 162（3）：1539-1551.

［8］Boccalandro HE， De Simone SN， Bergmann-Honsberger A， et al. PHYTOCHROME KINASE SUBSTRATE1 regulates root phototropism and gravitropism［J］. Plant Physiol， 2008， 146（1）：108-115.

［9］Hepler PK. Calcium：a central regulator of plant growth and development［J］. Plant Cell， 2005， 17（8）：2142-2155.

［10］ Babourina O， Newman I， Shabala S. Blue light induced kinetics of H+and Ca2+fluxes in etiolated wild-type and phototropin-mutant Arabidopsis seedlings［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 2002， 99（4）：2433-2438.

［11］ Baum G， Long JC， Jenkins JI， et al. Stimulation of the blue light phototropic receptor NPH1 causes a transient increase in cytosolic Ca2+［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 1999， 96（23）：13554-13559.

［12］ Harada A， Sakai T， Okada K. Phot1 and phot2 mediate blue light-induced transient increases in cytosolic Ca2+differently in Arabidopsis leaves［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 2003， 100（14）：8583-8588.

［13］Gehring CA， Williams DA， Cody SH， et al. Phototropism and geotropism in maize coleoptiles are spatially correlated withincreases in cytosolic free calcium［J］. Nature， 1990， 345：528-530.

［14］Esmon CA， Tinsley AG， Ljung K， et al. A gradient of auxin and auxin-dependent transcription precedes tropic growth responses. Proc Natl Acad Sci USA， 2006， 103（1）：236-241.

［15］McCormack E， Tsai Y， Braam J. Handling calcium signalling：Arabidopsis CaMs and CMLs［J］. Trends Plant Sci， 2005， 10（8）：383-389.

［16］Gietz D， St Jean A， Woods RA， Schiestl RH. Improved method for high efficiency transformation of intact yeast cells［J］. Nucleic Acids Res， 1992；20（6）：1425.

［17］Walter M， Chaban C， Schütze K， et al. Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation［J］. Plant J， 2004， 40（3）：428-438.

［18］Inada S， Ohgishi M， Mayama T， et al. RPT2 is a signal transducer involved in phototropic response and stomatal opening by association with phototropin 1 in Arabidopsis thaliana［J］. Plant Cell， 2004， 16（4）：887-896.

［19］ Kaiserli E， Sullivan S， Jones MA， et al. Domain swapping to assess the mechanistic basis of Arabidopsis phototropin 1 receptor kinase activation and endocytosis by blue light［J］. Plant Cell， 2009， 21（10）：3226-3244.

［20］ Kong SG， Wada M. New insights into dynamic actin-based chloroplast photorelocation movement ［J］. Molecular Plant， 2011，4（5）：771-781.

（責(zé)任編輯 李楠）

致 謝

近期為本刊審稿的專家（按姓氏的漢語(yǔ)拼音順序排列）

白志輝包永明才 華陳 芳陳 杰陳守文 陳受宜陳信忠

陳葉福崔金杰丁少雄丁 衛(wèi)高彩霞龔春梅龔國(guó)利郭安源

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王 艷王幼平王云龍王占新王志鋼王子玉衛(wèi)亞紅武書庚

向軍儉謝志雄辛嘉英邢 婧邢秀梅徐 進(jìn)徐妙云徐書景

徐田軍徐玉泉閆茂倉(cāng)楊官品應(yīng)杰政喻德躍袁杰利袁志明

張 彬張春寶張鳳英張海文張俊杰張 莉張芃芃張 偉

張 興張永山張宇宏趙國(guó)柱趙仲麟鄭青松仲寒冰周 波

周 琪周志剛朱玲玲朱 禎莊飛云訾 金

Research of PKS2 Interaction with CAM4 in Arabidopsis thailana

Qiao Xinrong1Duan Hongbin1Liu Zhuming1Zhao Fuan2
（1. Xinyang College of Agriculture and Forestry，Xinyang 464000；2. Cash Crop Research Institute， Henan Academy of Agricultural Sciences， Zhengzhou 450002）

Blue-light receptors phototropin （PHOT）mediate a wide set of physiological and developmental responses. As some PHOT downstream signal transduction components have been identified in Arabidopsis by genetic analyses， we have found that PKS1 of Phytochrome kinase substrate PKS family interacts with members of calmodulin （CAM）， which are Ca2+binding protein. In order to address the issue of how PKS2 interacts with CAM4， firstly cDNA full length sequences of PKS2 and CAM4 were obtained by RT-PCR technique. Then， it was confirmed that PKS2 could be interact with CAM4 by tests of yeast two-hybrid system and bimolecular fluorescence complementation. These date could contribute to enrich relation between PKS and CAM， which would provide base for further uncovering PHOT functions.

Arabidopsis thaliana；phototropin；phytochrome kinase substrate；calmodulin

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.013

2014-07-28

喬新榮，女，博士，講師，研究方向：植物分子育種及植物生理；E-mail：xirong806@163.com

趙付安，男，博士，研究員，研究方向：植物分子育種及植物生理；E-mail：fazcotton@163.com